果寡糖和枯草芽孢桿菌對肉雞盲腸中有益菌群的影響

根據國內外研究，寡婦糖、益生素及其合成材料可調節家禽胃腸道的微生態環境，影響氮、硫、鈣、磷的吸收和后腸的發酵，提高生產力和身體穩定性。近年來,寡糖、益生素的研究主要集中在對腸道菌群數量及免疫功能的影響上,從環保角度研究的報道較少。本試驗目的是研究飼糧中添加果寡糖、枯草芽孢桿菌及其二者的合劑對肉雞腸道菌群數量、糞中氨氣和硫化氫散發量及營養素利用率的影響。1材料和方法1.1果實獨特的糖和枯草芽菌1.1.1%是速度且探索由江南大學食品學院提供,肉雞飼糧推薦添加劑量為0.3%。按HPLC法測定,含量為:單糖1.83%,蔗糖1.13%,蔗果三糖39.81%,蔗果四糖49.78%,蔗果五糖7.06%。1.1.2料生產與使用技術中國農業大學跨越計劃項目“安全畜牧微生物飼料生產與使用技術(中試)”(22001跨-16)科研成果,枯草芽孢桿菌總含量(60±5)億/g,肉雞飼糧推薦添加劑量為0.1%。1.2基礎飼糧1%硅藻土選用360只1日齡AA肉公雞,隨機分成5個處理組,每個處理設6個重復,每個重復12只雞。試驗飼糧分別為:1)基礎飼糧(對照組);2)基礎飼糧+0.3%果寡糖;3)基礎飼糧+0.1%枯草芽孢桿菌;4)基礎飼糧+0.3%果寡糖+0.1%枯草芽孢桿菌;5)基礎飼糧+150mg/kg金霉素(有效成分為15%);5種飼糧中都均勻混入1%硅藻土,作為酸不溶灰分?；A飼糧參照NRC(1994)家禽營養需要量標準,見表1。試驗雞自由采食和飲水,飼養管理和免疫程序參照AA肉雞飼養管理手冊。1.3測試指標和方法1.3.1菌種的活化培養分別于21日齡、42日齡從各處理組中隨機選取6只試雞,肌肉注射戊巴比妥酸鈉麻醉后,迅速解剖,截取盲腸末端2cm腸段,液氮保存至試驗分析。將樣品從液氮中取出,擠出盲腸食糜于滅菌培養皿中,混勻,稱取1g放于盛有99mL滅菌生理鹽水的帶有玻璃珠的滅菌三角瓶中,振蕩10min,逐級進行10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9的倍比稀釋,各稀釋度分設3個重復,吸取0.1mL接種于選擇性培養基平皿上。大腸桿菌、沙門氏菌、總需氧菌分別接種于伊紅美蘭瓊脂、SS瓊脂、營養瓊脂培養基平皿上,在37℃生化培養箱中有氧培養24h后菌落計數;乳酸桿菌接種于乳酸桿菌選擇性培養(LBS)平皿上,在37℃生化培養箱中厭氧培養48h后進行菌落計數。菌群數量以每克腸道內容物所含的細菌數(lgCFU/g)表示。1.3.2硫酸溶液和碘溶液的制備飼養試驗結束前1d,按每個重復收集新鮮糞樣,剔除毛屑雜物,充分混勻。準確稱取50g新鮮雞糞,裝入500mL磨口玻璃瓶中,用膠塞密封,室溫下放置3d,任其發酵。用100mL注射器抽取100mL氣體,經大氣采樣器,以小于0.1L/min的速度,NH3和H2S分別用0.005mol/L硫酸溶液和0.01mol/L碘溶液吸收。NH3用納氏試劑比色法,H2S用滴定法進行分析測定。1.3.3雞粗蛋白及鈣、磷含量測定飼養試驗結束前3d,每個重復連續3d收集新鮮糞樣,剔除毛屑雜物,按100g鮮糞入10%H2SO410mL,充分混勻,于65～70℃烘干至恒重,回潮,粉碎后制成風干樣。粗蛋白的含量用凱氏定氮法測定,粗灰分的含量用灼燒法測定,鈣的含量用EDTA滴定法測定,磷的含量用分光光度法測定。用酸不溶灰分標記法計算各處理組肉雞粗蛋白和鈣、磷的利用率。營養素利用率(%)=100?糞中營養素含量×飼糧酸不溶灰分含量飼糧營養素含量×糞中酸不溶灰分含量×100100-糞中營養素含量×飼糧酸不溶灰分含量飼糧營養素含量×糞中酸不溶灰分含量×1001.4durcan氏多重比較采用SPSS11.5軟件,對所有試驗數據進行單因素方差分析,差異顯著者再作Duncan氏多重比較。試驗結果用平均數±標準差(xˉ±S)(xˉ±S)表示,P<0.05為顯著性差異。2結果與討論2.1果寡糖對雞肉腸道菌群的影響各處理組肉雞腸道菌群數量見表2。可見,果寡糖和枯草芽孢桿菌對肉雞盲腸微生物的影響較為相似,與金霉素有較大的不同;這兩種添加劑都減少肉雞盲腸中的總需氧菌、大腸桿菌和沙門氏菌的數量,增加乳酸桿菌的數量;隨著肉雞的生長,這種作用更加明顯。本研究果寡糖對肉雞盲腸大腸桿菌和總需氧菌的抑制作用在3周齡以前并不明顯,而在肉雞生長后期才表現出來,可能是由于果寡糖對宿主消化道菌群數量的調控需要一定的時間,這與Houdijk等報道類似。Stricking等報道,芽孢桿菌可使胃腸道內有益菌如乳酸桿菌和鏈球菌的數量增多,這些細菌會產生大量的有機酸使腸道內pH下降,從而抑制胃腸道內病原菌的繁殖;而且有報道已從芽孢桿菌中分離出桿菌肽,這也可抑制病原菌的繁殖。本研究還發現,寡糖和枯草芽孢桿菌表現出一定的協同作用,二者的復合添加對肉雞盲腸菌群的作用效果好于抗生素,與Swanson的報道一致。這是由于枯草芽孢桿菌與腸道固有菌產生競爭性的酵解作用,使枯草芽孢桿菌在通過腸道上段時存活率得到改善,后腸微生物的定植率提高,從而增強了寡糖對內源和外源菌生長及活性的刺激作用。2.2果寡糖+枯草芽孢桿菌添加對發酵糞中nh3和hs自組織的影響由表3可知,肉雞飼糧中果寡糖的添加,使發酵糞中NH3和H2S的散發量分別降低38.38%(P<0.05)和24.35%(P<0.05),與Canh等報道的基本一致,這可能是由于果寡糖可使胃腸道內有益菌如乳酸桿菌和鏈球菌的數量增多,這些細菌會產生大量的有機酸使腸道內pH下降;而且糞尿中未消化果寡糖可降低其pH值。果寡糖+枯草芽孢桿菌的添加,使發酵糞中NH3和H2S的散發量分別降低62.14%(P<0.05)和28.49%(P<0.05),而且果寡糖+枯草芽孢桿菌添加組糞中NH3散發量顯著低于(P<0.05)果寡糖添加組,但二組之間H2S的散發量差異不顯著(P>0.05)。雖然本試驗枯草芽孢桿菌的添加可選擇性地增加肉雞盲腸中的乳酸桿菌等有益菌群的數量,但不能有效降低發酵雞糞中NH3和H2S的散發量,這可能是體內外環境差異較大所致。有試驗表明,乳酸桿菌和雙歧桿菌并不分解含氮化合物,產生的乳酸和揮發性脂肪酸可降低腸道和糞尿pH,從而減少腸道和糞尿中NH3、H2S、吲哚和胺類等惡臭氣體的產量。安永義等報道,乳酸桿菌的添加可降低發酵糞中NH3和H2S的散發量。因此,在枯草芽孢桿菌中復合添加乳酸桿菌和雙歧桿菌,對改善動物微生態環境和降低糞中NH3和H2S的散發量很有必要。另外,本研究還發現,果寡糖和枯草芽孢桿菌的復合添加,使發酵糞中NH3和H2S的散發量進一步降低,這也預示著果寡糖和益生素組成的合生元對降低雞舍中有害氣體含量可能起著更重要的作用。2.3果寡糖、枯草芽孢桿菌、金霉素的添加對雞飼糧中粗蛋白及磷排放量的影響各處理組肉雞粗蛋白、粗灰分、鈣、磷利用率見表4。肉雞飼糧中添加果寡糖、枯草芽孢桿菌、果寡糖+枯草芽孢桿菌、金霉素有提高粗蛋白利用率的趨勢,但各處理組之間差異均不顯著(P>0.05),與國內外許多報道一致。這是由于枯草芽孢桿菌可分泌蛋白酶,果寡糖可增加食糜中蛋白酶的活性,金霉素可使消化道腸壁變薄且微生物消耗減少,使蛋白質消化吸收有增加的趨勢。同時,果寡糖發酵需要合成更多的微生物蛋白,枯草芽孢桿菌的活動也需要不斷合成和分解微生物蛋白,使糞氮的排泄有增加的可能。但這些因素的綜合不足以影響粗蛋白利用率。果寡糖、枯草芽孢桿菌、果寡糖+芽孢桿菌或金霉素的添加,使肉雞飼糧中粗灰分的利用率分別提高了18.94%(P<0.05)、17.36%(P<0.05)、23.66%(P<0.05)、21.24%(P<0.05),但各添加組之間差異不顯著(P>0.05);使鈣的利用率分別提高了20.78%(P<0.05)、14.63%(P<0.05)、21.31%(P<0.05)、21.47%(P<0.05),但各添加組之間差異不顯著(P>0.05);使磷的利用率分別提高了6.60%(P>0.05)、12.32%(P<0.05)、14.67%(P<0.05)、10.25%(P<0.05),但各添加組之間差異不顯著(P>0.05),這與Ohta等、胡彩虹等、武英等的報道基本一致。本試驗證實,果寡糖、枯草芽孢桿菌及二者的復合具有選擇性地增加肉雞盲腸中的乳酸桿菌等有益菌群的數量。這些細菌產生了大量的乳酸和揮發性脂肪酸,使腸道內pH下降,增加了礦物質的溶解度,促進礦物質的吸收。在本研究中,果寡糖的添加可顯著提高鈣的利用率,但對磷利用率的改善不顯著,這可能是由于本研究中果寡糖0.3%的添加對植酸磷的作用不明顯所致。果寡糖的添加可增加大腸中但減少小腸中鈣結合蛋白水平,而大腸中鈣結合蛋白含量與鈣的吸收率呈正相關,小腸中鈣結合蛋白含量則與鈣的吸收率呈負相關。3不同菌種復合使用對發酵雞