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離心機(jī)的原理和使用11/24/20232高速離心機(jī)2高速離心機(jī)1*104g~2.5*104r/min,R.C.F1*104g~105g用途:分離各種沉淀物、細(xì)胞碎片及較大的細(xì)胞器等高速冷凍離心機(jī)11/24/20235超速離心機(jī)2.5*104g~8*104r/min,R.C.F5*105g或更高結(jié)構(gòu):離心管帽、冷凍裝置和溫控系統(tǒng)、真空系統(tǒng)、安全保護(hù)系統(tǒng)、制動(dòng)系統(tǒng)、指示儀表等。按用途分:制備用超速離心機(jī):分離純化生物大分子、細(xì)胞器和病毒等分析用超速離心機(jī):測(cè)定樣品純度(根據(jù)紫外吸收率或折光率等判斷)、沉降系數(shù)、相對(duì)分子量11/24/20236沉降系數(shù)S:?jiǎn)挝浑x心力作用下粒子的沉降速度,以Svedberg表示,簡(jiǎn)稱(chēng)S。1S=1*10-13s11/24/20237沉降系數(shù)S與分子量M有對(duì)應(yīng)關(guān)系,測(cè)出離心機(jī)轉(zhuǎn)速、離心時(shí)間和粒子移動(dòng)距離,可求出S,再得到M11/24/20238二離心方法的選擇對(duì)于常速和高速離心機(jī),由于所分離的顆粒大小和密度相差較大,只要選擇好離心速度和時(shí)間,就能達(dá)到分離效果。超速離心的離心方法:差速離心、密度梯度離心和等密度梯度離心
11/24/202391差速離心采用不同的離心速度和離心時(shí)間,使沉降速度不同的顆粒分批分離的方法。主要用于分離大小和密度差異較大的顆粒。11/24/2023102密度梯度離心樣品在密度梯度介質(zhì)中進(jìn)行離心,使沉降系數(shù)比較接近的物質(zhì)得以分離的一種區(qū)帶分離方法。密度梯度系統(tǒng):梯度介質(zhì)有足夠大的溶解度,不與分離組分反應(yīng),不會(huì)引起分離組分的凝集、變性或失活。常用介質(zhì):蔗糖、甘油等。樣品鋪在密度梯度溶液表面,離心后形成若干條界面清楚的不連續(xù)區(qū)帶。11/24/20231111/24/2023123等密度離心當(dāng)欲分離的不同顆粒的密度范圍在離心介質(zhì)的密度梯度范圍內(nèi)時(shí),不同浮力密度的物質(zhì)顆粒在離心力作用下一直移動(dòng)到與各自浮力密度相等的位置(等密度點(diǎn)),形成區(qū)帶。等密度離心常用的介質(zhì):銫鹽,如CsCl,Cs2SO4,CsBr11/24/202313三離心條件的確定離心力(轉(zhuǎn)速)離心時(shí)間溫度pH值
真空11/24/202314思考題1名詞解釋離心分離相對(duì)離心力沉降系數(shù)2按離心機(jī)轉(zhuǎn)速分,離心機(jī)有哪些種類(lèi)?各自的適用范圍是什么?3超
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