2023-01版呋喃唑酮代謝物〔2023-01版一、原理本試劑盒承受間接競爭ELISA方法檢測水產和雞肉等組織樣本中的AOZ，在微孔條上預包被上偶聯抗原，利用抗原與抗體的特異性免疫化學反響的原理來進展的，樣本中的AOZ和微孔條上預包被偶聯抗原競爭抗呋喃唑酮代謝物的衍生物抗體，TMBAOZ含量與樣品的吸光度值呈反比，與標準曲線比較即可得出呋喃唑酮代謝物含量。二、試劑盒技術指標：試劑盒靈敏度：0.05ppb樣本檢測下限：組織〔雞/鴨/豬/牛/羊/魚/蝦肉〕—---——0.1ppb肝臟〔雞/鴨/豬/牛/羊肝臟〕 ———0.1ppb蜂蜜、牛奶、腸衣 -—0.1ppb

7、終止液 7ml 黃色帽8、20X濃縮洗滌液40ml 白色帽9、2X濃縮復溶液50ml 透亮帽10、衍生化試劑 10ml 白色帽四、所用儀器、試劑具備的儀器：微孔酶標儀、打印機、均質器、氮氣吹干裝置、振蕩器、離心機、〔0.01g〕微量移液器：單道20μl-200μl，100μl-1000μl、多250μl試 劑：氫氧化鈉、乙酸乙酯、正己烷、濃HCl、磷酸氫二鉀〔全部樣本使用〕亞硝基鐵氰化鉀KF〔C〕NO·3HO、2 5 2ZnSO·7HO〔奶樣專用〕4 2魚/蝦等水產品組織因存在肯定的干擾，0.2ppb穿插反響率：呋喃唑酮代謝物————————————100%呋喃它酮代謝物———————————﹤0.1%呋喃妥因代謝物———————————﹤0.1%呋喃西林代謝物———————————﹤0.1%回收率：組織、肝臟… 90%±10%蜂蜜、牛奶、腸衣… 75%±15%三、試劑盒組成1812條2、標準液X6〔1ml/瓶〕0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb3、酶標記物 12ml 紅色帽4、抗體工作液7ml 藍色帽5、底物A液 7ml 白色帽6、底物B液 7ml 黑色帽

五、樣本前處理步驟樣本處理前須知處理任何樣本時，都必需留意：本試劑盒所檢測的組織樣本包括：動物組織、禽類和水產組織。eg:雞、鴨、牛、兔、魚、蝦等。試驗中必需使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。要時可對試驗器具進展清潔，以避開污染干擾試驗結果。樣本前處理需配制：配液1: 用去離子水將2×濃縮復溶液按1：1稀釋，用于提取后的樣本復溶配液: C液〔供奶樣用稱12.5g亞硝基鐵氰鉀用去離子水定溶至100ml。D〔供奶樣用〕稱29.8g100ml。配液3: 0.1MKHPO 稱22.8gKHPO·3HO

2-8℃。2 4 2 4 21L4:1MHCl取8.6ml濃HCl加水定溶至100ml。配液51MNaOH稱取4gNaOH加水定溶至100m樣本的處理方法：奶樣1、取出5ml的奶樣本到玻璃離心管中,分別參加CD250μl。2、用振蕩器充分混合樣本,用恒溫離心機4000r/min以上離心10min(4-12℃).假設沒有恒溫離心機,則先將樣本降溫至大約8℃,然后離心。3、接(b)的描述方法組織、蜂蜜、腸衣、肝臟1、取1±0.05g1.1ml〔相當1ml奶樣，分別參加4ml0.5ml1MHCl100μl237〔16h〕56℃水浴中孵育(2h)；35ml0.1MKHPO0.4ml1M2 4，NaOH5ml5min；4、在室溫下〔20-25℃〕4000r/min10min。52.5ml50℃氮氣/空氣吹干。61ml1ml好的復溶液充分混合30s；在室溫下〔20-25℃〕4000r/min10min。750μl樣本稀釋倍數：2六、酶標免疫分析程序1、從4℃冷藏環境中取出所需試劑，置室溫〔20-25℃〕平衡30min以上，留意每種液體試劑使用前均須搖勻。2、取出需要數量的微孔及框架，將不用的微孔放

3、配液：將40ml濃縮洗滌液〔20倍濃縮〕用去離子水依據1：19稀釋〔1份濃縮洗滌液+19份去離子水，或按所需用量配制洗滌液。4、編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。5、加標準品/樣本50μl/孔到各自的微孔中，然后加抗體50μl/6250μl/4-515-30秒，用吸水紙拍干〔拍干后未被去除的氣泡可用干凈的槍頭刺破。7、每孔參加酶標記物10μ環境中反響30min。將孔內液體甩干，用洗滌4-5遍〔同上〔拍干后未被去除的氣泡可用干凈的槍頭刺破。8A液50μl，再加底物B50μl，輕輕振蕩混勻，25℃環境中避光顯色30min。950μl，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處〔建議用雙波長450/630nm檢測，在5min內讀完數據，測定每孔OD值。七、結果判定結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方2AOZ的含量成負相關。1、粗略判定：用樣品的平均吸光度值與標準值比較即可得出樣本所含AOZ濃度范圍〔ng/ml〕。假設樣品10.268，樣品21.230，標準液吸光度值分別是：0ppb為1.671；0.05ppb1.425；0.15ppb1.103；0.45ppb0.567；1.35ppb0.205；4.05ppb0.104。則樣品10.45ppb-1.35ppb20.05ppb-0.15ppb。乘以其對應的稀釋倍數即AOZ2、定量判定：所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值〔B〕除以第一個標準〔0〕的吸光度值〔B〕100%，即百分吸光度值。0 B

11、顯色液假設有任何顏色說明變質，應當棄之。00.5質。12、25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。百分吸光度值〔%〕＝

×100%B0

九、貯存條件和保質期B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值B—0ng/ml0

貯存條件：試劑盒于2-8℃保存，不要冷凍。保質期：該產品有效期為1AOZ濃度〔ng/ml〕的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋AOZ假設利用試劑盒專業分析軟件進展計算，更便于大量樣品的準確、快速分析。八、留意事項120-25℃。22-8℃冰箱。3、在ELISA洗板的全都性，認真依據推舉的洗板挨次操作ELISA4、全部恒溫孵育過程中，避開光線照耀，用蓋板膜封住微孔板。520℃或試劑及標本沒有回到室溫〔20-25℃〕會導致全部標準的OD6、在洗板過程中假設消滅板孔枯燥的狀況，則會伴隨著消滅標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應馬上進展下一步操作。7、混合要均勻，