功能性消化不良大鼠模型的制備方法

功能消化不良（fd）是消化科常見病和常見病，嚴重影響了人們的生活質量。較之西藥,中醫治療該病有著明顯的優勢。近年來,有關該病的動物實驗研究也有了較大的進步。通過以“功能性消化不良”、“實驗研究”、“鼠”為關鍵詞檢索中國知網2010年1月至2013年5月的相關文獻計55篇,通過整理發現,文獻中明確記錄制備中醫證型動物模型的有22篇,涉及證型7種:肝郁型(3篇),肝胃不和型(5篇),肝郁脾虛型(8篇),肝脾氣滯型(1篇),脾胃虛寒型(3篇),脾氣虛弱型(1篇),胃虛飲停型(1篇)。其中肝郁型、肝胃不和型動物模型涉及造模方式1種(夾尾刺激法);肝郁脾虛型涉及造模方式5種(夾尾刺激法,改良夾尾刺激法,慢性束縛法,慢性束縛加飲食失節加孤養法,慢性束縛加過度疲勞加飲食失節法);肝脾氣滯型涉及1種(慢性應激法(9種刺激因素));脾氣虛弱型涉及1種(不規則喂養法);脾胃虛寒型涉及造模方式2種(飲食失節加過食肥甘厚味法和食醋灌胃法);胃虛飲停型涉及1種(稀酸灌胃法)。現將具體方法進行綜述,以期對該病的深入研究提供方法和依據。1大鼠尾行為檢測丁宏、白璐、方銀玲參考文獻用夾尾刺激法制作FD肝郁大鼠模型。方法:每日四次(8:00,11:00,14:00,17:00)用鼠夾夾大鼠尾巴遠端1/3處,每次夾尾刺激持續30分鐘(如有破損用碘伏涂擦),連續刺激7天。7天后出現進食量減少,體形漸瘦,溏便,毛發變暗、枯黃、不順,易怒,常互相嘶咬,并有緊張、焦慮狀態,提示造模成功。郭氏的造模方法應用最多,被認為是比較經典的FD模型制備方法。在文獻的記錄中,弭艷紅、胡淑娟、劉松林[7、8]、高帆亦采用該方法建立肝胃不和型FD大鼠模型。2慢性束縛應激法黃雅慧參考郭海軍氏方法制作肝郁脾虛型功能性消化不良動物模型。連續刺激8天。于文靖,包海蘭、吳艷慧參考文獻采用改良夾尾刺激法制造FD肝郁脾虛模型。方法:每日用長海綿鑷子鉗夾大鼠尾巴末端1/3處,以令其尖叫掙扎但不破皮為度(如有抓傷破皮,則用0.5%碘伏消毒受傷部位,以防感染),使其暴怒并和其他大鼠廝打,每次持續30分鐘,2次/d,連續刺激3周。造模期間,各組大鼠自由進食及飲水。經夾尾刺激后的大鼠,與正常對照組比較,出現進食量減少,體形漸瘦,溏便,毛發變暗、枯黃、不順,易怒,常互相嘶咬,并有緊張、焦慮狀態,提示造模成功。岳利峰,王玲等運用21d慢性束縛應激法造大鼠肝郁脾虛證模型。方法:將大鼠束縛于特制的束縛架上,每日3h,束縛時間點隨機,連續束縛21d。郭建麗,馮瑪莉等考慮到現代人壓力大、易飲食失節、孤處易抑郁的特點,應用慢性束縛加飲食失節孤養的方法成功創立符合中醫證候特征的肝郁脾虛模型。方法:將造模大鼠放入自制的鋼絲網籠中,令其身軀及四肢不能自由活動,每籠1只孤養,每天束縛6h,從9:00am-3:00pm。每周給大鼠不定時的禁食2次,造模時間3周。王玉杰、呂瑤采用慢性束縛應激+過度疲勞+飲食失節的方法制備模型。方法:實驗前全部動物進行預游泳,剔除游泳時間少于lOmim,大于20min的大鼠。合格造模大鼠于每天上午8:00置于束縛盒中限制3h,下午2:00置于盛有溫水(22±1℃)的大塑料桶中游泳l0min。隔日喂食(隔日禁食,隔日足量給食),連續3周。3學習或教育引導20h由于機體對單一應激源刺激易產生耐受性,因此肖政華參考文獻運用多種不可預知的刺激方式交替進行,制備肝脾氣滯型小鼠模型。小鼠適應性喂養3天,選取多種刺激因素對小鼠進行刺激,包括:(1)食物剝奪(24h);(2)飲水剝奪合并空瓶刺激(12h);(3)倒懸(30min);(4)束縛(30min);(5)夾尾(1h);(6)明暗顛倒(24h);(7)濕籠飼養(24h);(8)超聲刺激(2h);(9)強迫游泳(45°C,5min)。每天隨機選取上述9種刺激中的一種,刺激項目相鄰的兩天不重復,讓動物無法預料剌激的發生,應激處理方法在每日上午08:30開始更換,這樣連續刺激21d,每種刺激方法平均使用2~3次。4聲波有分布式刺激劉富林等采用不規則喂養的方法,在小鼠胃電節律失常模型基礎上,加以超聲波噪音刺激。即單日進食,逢雙禁食,以打亂正常的飲食規律,自由飲水,并于每日8:00~20:00將超聲波清洗機放置鼠籠附近,每2小時噪音干擾1次,每次持續約30分鐘,持續14天,建立小鼠FD模型。5模型選取結果陳蘇寧、史業東按文獻方法,用4℃食醋給大鼠10L/g灌胃,每日1次,連續10d。大鼠出現,活動減少、倦臥少動、扎堆、拱背、反應遲鈍、唇色蒼白,捉拿時反抗無力,漸見體型瘦弱,體重下降,便溏,皮毛粗糙稀疏,飲食及飲水量減少,12項中有9項即為造模成功標準。沙蘭,吳元祥制備脾胃虛寒模型采用的方法與人類的飲食失節、過食肥甘厚味等多種致病因素相一致。每日灌胃精煉豬油(1ml/100g),同時給以圓白菜喂養,連續造模10d。6胃虛飲停證臨床上有類功能性消化不良病人表現為胃液體排空延遲,其臨床表現類似于中醫痞證中胃虛飲停證的表現。曹峰,傅延齡參考文獻的造模方法將大鼠適應性喂養3天后,在溫度為0℃條件下,用濃度為0.5mol/L鹽酸(用量按0.8ml/l00g)灌胃,每日1次,共造模2周。7中醫證型制備方法的目前存在的問題建立符合中醫證型的動物模型不僅是從事中醫藥物作用機制研究的基礎,而且也是中藥新藥開發研制的平臺,還可用于中藥和方劑的藥效評價。因此,研究和復制一些符合中醫證候特點的動物模型有著十分重要的意義。通過對近3年來功能性消化不良中醫證型動物模型制備方法的總結,我們發現目前還存在以下問題:(1)FD中醫分型比較混亂,證型不統一,勢必給分型造模帶來不便;(2)合格的中醫證型動物模型即要符合中醫理論,又要滿足FD的診斷標準,嚴格意義上講,難度較大;(3)造模方法相對較為集中,多采用郭海軍的夾尾激怒刺激法,如肝郁型和肝