湖南省疾病預防控制中心地址：長沙市芙蓉中路一段450號1201室（410005）電話南省疾病預防控制中心性病艾滋病防治科張國強梅毒實驗室診斷梅毒的臨床分期

一期梅毒早期梅毒二期梅毒后天梅毒（病期在2年以內）早期潛伏梅毒

晚期梅毒心血管和神經梅毒、（病期在2年以上）晚期潛伏梅毒等梅毒

先天梅毒早期胎傳梅毒（出生后2年以內發病）晚期胎傳梅毒（出生后2年以后發病）一期梅毒實驗室檢查：1暗視野顯微鏡檢查：皮膚黏膜損害或淋巴結穿刺液可查見梅毒螺旋體。2非梅毒螺旋體抗原血清學試驗：陽性。如感染不足2～3周，該試驗可為陰性，應于感染4周后復查。3梅毒螺旋體抗原血清學試驗：陽性。診斷標準疑似病例：應同時符合梅毒流行病學史、臨床表現和2項。確診病例：應同時符合梅毒流行病學史、臨床表現和1、3中的任一項。二期梅毒實驗室檢查：1暗視野顯微鏡檢查：二期皮損尤其扁平濕疣、濕丘疹及黏膜斑，易查見梅毒螺旋體。2非梅毒螺旋體抗原血清學試驗：陽性。3梅毒螺旋體抗原血清學試驗：陽性。診斷標準疑似病例：應同時符合梅毒流行病學史、臨床表現和2項。確診病例：應同時符合梅毒流行病學史、臨床表現和1、3中的任一項。三期梅毒（晚期梅毒）實驗室檢查：

1非梅毒螺旋體抗原血清學試驗：陽性。

2梅毒螺旋體抗原血清學試驗：陽性。

3腦脊液檢查：白細胞計數≥10×106/L，蛋白量＞500mg/L，且無其他引起這些異常的原因。腦脊液VDRL試驗（存在假陰性）或FTA-ABS試驗（存在假陽性）陽性。

4組織病理檢查：有三期梅毒的組織病理變化。診斷標準疑似病例：流行病學史、臨床表現中的任一項和1項。確診病例：應同時符合疑似病例的要求和2、3、4中的任一項。隱性梅毒（潛伏梅毒）實驗室檢查：1非梅毒螺旋體抗原血清學試驗：對于無既往梅毒史者，非梅毒螺旋體抗原試驗陽性（滴度一般在1：8以上）。對于有既往梅毒治療史者，與前次非梅毒螺旋體抗原試驗結果相比，本次試驗結果陽轉或其滴度升高4倍或更高。2梅毒螺旋體抗原血清學試驗：陽性。3腦脊液檢查：無異常發現。診斷標準疑似病例：應同時符合梅毒流行病學史、臨床表現和1項。確診病例：應同時符合疑似病例的要求和2、3項。

胎傳梅毒（先天梅毒）實驗室檢查：1暗視野顯微鏡檢查：在早期胎傳梅毒兒的皮膚黏膜損害或胎盤中可查到梅毒螺旋體。2非梅毒螺旋體抗原血清學試驗：陽性。2.1血清抗體滴度持續上升。2.2定量試驗結果比母親高四倍（低于或等于并不排除）3梅毒螺旋體抗原血清學試驗：陽性。患兒檢出19S－IgM抗體。診斷標準疑似病例：應同時符合梅毒流行病學史、臨床表現和2項。確診病例：應同時符合疑似病例的要求和1、3中的任一項。梅毒的傳播途徑：性接觸是主要的傳染途徑母嬰傳播血源性傳播間接接觸傳播梅毒實驗室檢測方法病原學檢查血清學檢測病原學檢查－實驗原理一期、二期梅毒時，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋結穿刺術得到的組織液；在暗視野顯微鏡下光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發出亮光，從而可根據其特殊形態和運動方式進行檢測；梅毒螺旋體的親銀特性；運用特異性的抗梅毒螺旋體與梅毒螺旋體發生抗原抗體反應的原理，將已經經過Reiter株非致病螺旋體制成的吸收劑吸收過標記有異硫氰酸鹽熒光素（FITC）的抗梅毒螺旋體或單克隆抗體加到載有標本的玻片上，如標本上有梅毒螺旋體，則會出現抗原抗體反應，熒光顯微鏡下可查到翠綠色熒光標記的螺旋體。病原學檢查－試驗方法病原學檢查的主要方法有暗視顯微鏡檢查、鍍銀染色法和直接熒光法。病原學檢查－取材

皮膚黏膜損害取材用棉拭子或紗布取無菌鹽水輕輕擦去皮損上的污物，如皮損上有痂皮，可用鈍刀小心除去，再用鈍刀輕輕地刮數次（避免出血）；并擠壓至產生血清滲出物。用薄刮片或接種環刮取滲出液，直接置于載玻片上，或直接用載玻片沾取滲出液。淋巴結取材消毒淋巴結表面皮膚，用無菌干棉球擦干。用1mL無菌注射器配12號針頭，吸取無菌等滲鹽水0.25mL～0.5mL，以無菌操作穿刺淋巴結并注入鹽水，再吸入注射器內，反復2～3次后，取少量淋巴液于載玻片上。病原學檢查－結果

暗視野顯微鏡下，典型的梅毒螺旋體呈白色發光,其螺旋較密而均勻，運動規律，運動性較強。梅毒螺旋體具有親銀性，鍍銀染色后顯微鏡下可見到染成棕色的梅毒螺旋體。直接熒光染色后，在熒光顯微鏡下可見到發蘋果綠色的梅毒螺旋體。臨床意義與暗視野顯微鏡檢測相同。但DFA的特異性及敏感性均大于暗視野顯微鏡檢測。病原學檢查－臨床意義病原學方法直接鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床可確診梅毒，且具有快速、簡便、直接的特點。螺旋體檢查是診斷早期現癥梅毒的最佳方法(一期、二期梅毒皮損或淋巴結節、孕婦羊膜穿刺)，對于患者的早期診斷、及時治療、預后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性，取材部位不正確、螺旋體數量不足、患者已接受抗生素治療、損害接近自然消退和實驗室工作人員缺乏經驗等均會影響結果的判斷。梅毒血清學檢測非梅毒螺旋體抗原血清學試驗（非特異性梅毒抗體）梅毒螺旋體抗原血清學試驗（特異性梅毒抗體）非梅毒螺旋體抗原血清學試驗－原理

梅毒螺旋體一旦感染人體，經過一段時間，宿主迅速對螺旋體表面的脂質作出免應答，在3周-4周產生抗類脂抗原的抗體（非特異性反應素），主要是IgM和IgG混合抗體。未經治療的病人，其血清內的反應素可長期存在。經正規治療后，反應素可以逐漸減少至轉為陰性。所有非梅毒螺旋體抗原血清試驗的抗原基本成分都是一樣。非梅毒螺旋體抗原血清學試驗－原理非梅毒螺旋體抗原試驗是使用心磷脂、卵磷脂及膽固醇作為抗原的絮狀凝集試驗。反應素與心磷脂形成抗原抗體反應，卵磷脂可加強心磷脂的抗原性，膽固醇可增強抗原的敏感性。心磷脂、卵磷脂遇水形成膠體溶液，膽固醇遇水形成結晶。當抗原與抗體（反應素）混合發生反應時，后者即粘附膠體微粒的周圍，形成疏水性薄膜。由于搖動、碰撞，使顆粒與顆粒互相粘附而形成肉眼可見的顆粒凝集和沉淀，即為陽性反應。如遇到非梅毒血清，因體液中的白蛋白多于球蛋白，而白蛋白對膠體顆粒有保護作用，形成親水性薄膜，即使同樣搖動、碰撞，由于抗原顆粒周圍沒有粘附免疫球蛋白的作用，不能形成較大顆粒，無肉眼可見的凝集和沉淀，因此為陰性反應。常見的非梅毒螺旋體抗原血清學試驗：1、性病研究實驗室試驗(venerealdiseaseresearchlaboratorytest，VDRL)2、不加熱血清反應素試驗（unheatedserumreagintest，USR）3、快速血漿反應素環狀卡片試驗(rapidplasmareagincirclecardtest，RPR)4、甲苯胺紅試驗(tolulizedredunheatedserumtest，TRUST)性病研究實驗室試驗（VDRL)特點抗原需新鮮配制，不能長時間保存血清標本需56℃滅活目前主要用于腦脊液標本檢查顯微鏡觀察結果主要用于神經梅毒的腦脊液檢查,特異性高，但敏感性低不加熱血清反應素試驗（USR）特點是VDRL試驗的改良抗原同VDRL，但抗原可長期保存，能維持一年血清樣本不必加熱滅活制成試劑盒，使用方便快速血漿反應素環狀卡片試驗（RPR）特點在USR試劑成分的基礎上加入了黑色碳顆粒，作為沉淀的指示物，所不需要顯微鏡觀察結果，可用肉眼直接觀察特制的白色紙卡替代了玻片血清不需滅活可作定量試驗有現成的試劑盒，攜帶方便操作簡單價格便宜梅毒自動旋轉儀梅毒自動旋轉儀RPR質控卡RPR試驗結果甲苯胺紅試驗（TRUST)特點TRUST試驗原理與RPR試驗原理相同。唯TRUST試驗的抗原中加入甲苯胺紅顆粒代替活性炭顆粒指示物，使陽性結果出現紅色絮狀現象，陰性結果見紅色顆粒集于中央或均勻分散。TRUST試驗結果TRUST試驗與RPR試驗結果非梅毒螺旋體抗原血清學試驗－臨床意義早期梅毒（一期、二期）經足量規則抗梅毒治療后3個月，VDRL試驗抗體滴度下降2個稀釋度，6個月下降4個稀釋度一期梅毒1年后轉陰二期梅毒2年后轉陰晚期梅毒治療后血清滴度下降緩慢，2年后約50%病人血清反應仍然陽性非梅毒螺旋體抗原血清學試驗－臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗方法簡單、快速、敏感性和特異性較好，適合于大量人群的篩查、產前檢查及健康體檢等早期梅毒硬下疳出現1－2周后，血清可呈現陽性治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復發或再感染的指征非梅毒螺旋體抗原血清學試驗－假陽性技術性假陽性反應由于標本保存不當（如細菌污染或溶血）、試劑質量差或過期、或實驗室操作錯誤所造成生物學假陽性反應是由于患者有其他疾病或生理狀態發生變化，使梅毒血清學試驗出現陽性梅毒假陽性的處理由操作錯誤引起的技術性假陽性反應，經過重復試驗即可排除。對于急性生物學假陽性反應，應做TPPA/TPHA等試驗進行排除前帶現象指非梅毒螺旋體抗原血清試驗中，有時血清中存在高濃度的抗體時出現的弱陽性、不典型或陰性反應的結果，而臨床上又象二期梅毒，此時將血清稀釋后再進行試驗，出現了陽性的結果，該現象稱為前帶現象耐血清性（血清固定）指經抗梅毒治療后，非梅毒螺旋體抗原血清試驗在一定時期內不轉陰。早期耐血清性常與治療不足或不規則治療、復發、再感染或有神經系統梅毒等因素有關影響定量試驗穩定性的因素移液器、水平旋轉儀、試劑滴管等要校準反應孔大小要標準標本稀釋前生理鹽水不涂開，稀釋好的標本要求涂滿整個反應板圓圈；涂布從稀釋最高倍數開始，依次到原倍。旋轉速度、時間要準確，結果觀察要及時。非梅毒螺旋體抗原血清試驗方法比較VDRLUSRRPRTRUST抗原成分心磷脂、卵磷脂、膽固醇同前+EDTA+氯化膽堿同前+EDTA+氯化膽堿+活性炭同前+EDTA+氯化膽堿+甲苯胺紅抗原穩定性不穩定,1天穩定4℃～8℃保存12個月穩定4℃～8℃保存12個月穩定4℃～8℃保存12個月血清試驗前處理需滅活不需滅活不需滅活不需滅活反應板直徑14mm漆圈玻片直徑14mm圓圈的一次性塑料（玻璃）直徑為18mm圓圈的特制白色反應卡片直徑為18mm圓圈的特制白色反應卡片針頭60±1滴/mL45±1滴/ml60±1滴/mL60±1滴/mL轉速180±5次/min180±5轉/min100±5轉/min100±5轉/min轉時4min4min8min8min顯微鏡10×10倍顯微鏡下觀察肉眼或100倍顯微鏡肉眼肉眼梅毒螺旋體抗原血清學試驗采用梅毒螺旋體特異蛋白作抗原，檢測血清中抗梅毒螺旋體IgG或IgM抗體（為特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體），其敏感性和特異性均較高。感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺旋體抗體試驗呈陽性，則患者終身陽性。常見的梅毒螺旋體抗原血清學試驗：1梅毒螺旋體血球凝集試驗（treponemapallidumhaemagglutinationassay,TPHA）2梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（treponemapallidumparticleassay，TPPA）3熒光螺旋體抗體吸收試驗（fiuorescenttreponemalantibodyabsorptiontest，FTA-ABS）4梅毒螺旋體酶聯免疫吸附試驗（TP-ELISA）5梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（TP-WB）6梅毒免疫層析法－梅毒快速檢測（RT）7測定螺旋體IgM抗體的血清學試驗8化學發光免疫分析法（CLIA）TPPA/TPHA試驗－報告方法a.陽性報告：定性試驗，血清在1:80以上稀釋度與致敏顆粒發生凝集反應（1+或更強），與未致敏顆粒（第3孔）不發生凝集反應。定量試驗則應報告發生陽性反應的血清最高稀釋度，為血清滴度。

b.陰性報告：血清與致敏顆粒和未致敏顆粒均不發生凝集反應。TPPA結果TPPA/TPHA試驗－注意事項

a.微量反應板要清潔干凈，孔內無異物。

b.加入血清后，使用微量板振蕩器振蕩反應板，而不可使用水平旋轉儀。

c.試劑盒不可置于0℃以下，防止凍結。不同批號試劑不可混合使用。

d.有些血清標本在血清低稀釋度時可出現前帶現象，此時可作定量試驗；

e.如未致敏顆粒出現凝集反應，應將血清進行吸收處理后再進行試驗，或改用其他試驗方法。TPPA試驗TPPA/TPHA試驗－血清吸收處理a.取0.95mL已恢復體積的未致敏顆粒加入清潔的小試管內。

b.試管內加入50μL血清標本并充分混勻，置15～25℃20min或更長時間。

c.離心2000rpm，5min，取25μL上清液（血清標本稀釋1：20）置第3孔，注意不要混入顆粒。

d.自第4孔～第10孔各加25mLB液。

e.自第3孔吸25mL至第4孔，混勻后吸25mL至第5孔……如此稀釋至第10孔，棄去25mL。

f.按定量試驗法加入D液和C液，將反應板置微量板振蕩器上振蕩30秒鐘，置濕盒內，15～25℃孵育2小時觀察結果。熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(FTA-ABS)－原理FTA-ABS試驗以完整形態的Nichol梅毒螺旋體作為抗原，加上經吸收劑（用Reiter株螺旋體制備而成）處理過的患者血清形成抗原抗體復合物，再加入熒光素（FITC）標記的抗人免疫球蛋白，與血清梅毒螺旋體抗體結合。在熒光顯微鏡下，螺旋體顯示蘋果綠色的熒光，即為陽性反應。FTA-ABS－材料a.梅毒螺旋體抗原玻片，有直徑0.5cm涂布梅毒螺旋體的圓圈，在高倍鏡下每視野不少于30條螺旋體，丙酮固定。

b.吸收劑（5