第十六章

細胞因子與黏附分子檢測醫學技術學院免疫教研室齊齊哈爾醫學院免疫復習1.T細胞增殖試驗的原理、刺激物？2.T細胞增殖試驗的主要方法？3.T細胞介導的細胞毒試驗主要方法？掌握：細胞因子、粘附分子概念；臨床常用的測定方法熟悉：細胞因子的特性與功能；了解：其他齊齊哈爾醫學院免疫第一節概述第二節臨床常用的測定方法第三節細胞因子與黏附分子測定的臨床應用齊齊哈爾醫學院免疫第一節

概述細胞因子(cytokine)

是由免疫細胞及組織細胞表達并分泌，通過結合細胞表面的相應受體，在細胞間發揮相互調控作用的一類小分子蛋白質或多肽。齊齊哈爾醫學院免疫掌握1.細胞因子的種類

白細胞介素（IL）干擾素（IFN）集落刺激因子（CSF）腫瘤壞死因子（TNF）生長因子（GF）趨化因子一、細胞因子及其受體的特性與功能齊齊哈爾醫學院免疫熟悉自分泌內分泌血液循環遠距離作用旁分泌作用于比鄰細胞細胞因子發揮作用的三種方式作用于分泌細胞自身2.細胞因子的共同特性與生物學功能齊齊哈爾醫學院免疫熟悉高效性、多效性、重疊性、網絡性、協同性、拮抗性迅速高效性非特異性

2.細胞因子的共同特性齊齊哈爾醫學院免疫熟悉肥大細胞胸腺細胞BIL-4活化、增殖、分化增殖

增殖

多效性齊齊哈爾醫學院免疫IL-2、IL-4、IL-5IL-4+IL-5IL-4IFN-

拮抗性重疊性協同性均有刺激B細胞增殖的功能更有效地誘導IgE類別轉換IL-4阻斷IFN-

誘導類別轉化的作用BBB齊齊哈爾醫學院免疫2.細胞因子的生物學功能參與調控免疫細胞的發育、分化和功能參與調控免疫應答抗感染抗腫瘤誘導細胞凋亡齊齊哈爾醫學院免疫了解3、細胞因子受體的共同特性細胞因子發揮作用：

細胞因子與靶細胞表面特異性受體結合細胞因子受體結構：胞膜外區、跨膜區和胞質區組成細胞因子家族：Ⅰ型細胞因子受體家族、Ⅱ型細胞因子受體家族、腫瘤壞死因子受體超家族、免疫球蛋白受體超家族、趨化因子受體家族。齊齊哈爾醫學院免疫了解齊齊哈爾醫學院免疫二、

黏附分子的特性與功能黏附分子（AM）是介導細胞間或細胞與細胞外基質間相互結合的分子。齊齊哈爾醫學院免疫掌握1.黏附分子的特性

黏附分子均為跨膜糖蛋白，由胞膜外區、跨膜區和胞質區三部分組成，根據其結構特點可分為免疫球蛋白超家族、整合素家族、選擇素家族和鈣黏蛋白家族。齊齊哈爾醫學院免疫了解2.黏附分子的主要生物學功能參與細胞的信號轉導與活化、細胞分化及發育參與免疫應答和炎癥反應、淋巴細胞歸巢、傷口愈合與血栓形成、調節細胞凋亡等功能齊齊哈爾醫學院免疫了解B細胞與Th細胞間信號轉導的細胞粘附分子齊齊哈爾醫學院免疫第二節臨床常用的測定方法一、酶聯免疫吸附試驗方法二、化學發光酶免疫試驗三、流式細胞分析法四、酶聯免疫斑點試驗五、免疫學測定方法學評價齊齊哈爾醫學院免疫

基因水平：PCR技術。檢測水平生物活性測定

蛋白水平

免疫學測定

第二節臨床常用的測定方法掌握齊齊哈爾醫學院免疫

生物活性測定：測活性。靈敏性高,特異性低蛋白水平ELISA

免疫學測定化學發光酶免疫試驗

（含量）流式細胞術酶聯免疫斑點試驗

第二節臨床常用的測定方法掌握齊齊哈爾醫學院免疫一、酶聯免疫吸附試驗（一）基本方法1.直接法---雙抗體夾心法

（測CK最常用方法）2.間接法3.抗原競爭法齊齊哈爾醫學院免疫熟悉敏感性偏低不能區分細胞因子的生物學活性（二）方法學評價特異、簡便成本低、易于推廣和標準化等優點可同時檢測大量標本且試驗廢棄物便于處理細胞因子測定的首選方法缺點優點齊齊哈爾醫學院免疫了解二、化學發光酶免疫試驗是以發光劑作為酶免疫測定的底物，通過發光反應增強測定的靈敏度。（一）基本方法雙抗體夾心法（二）方法學評價特異性好、靈敏度高、線性范圍寬、試劑穩定、可自動化檢測齊齊哈爾醫學院免疫了解三、流式細胞術（flowcytometry,FCM)分離和培養待檢細胞細胞破膜與固定封閉非特異性結合位點染色與分析基本方法了解方法學評價優點：特異、高效、靈敏.應用:對單個細胞水平CK或AM檢測；檢測細胞內CK；膜上AM、CK受體同一細胞內兩種以上細胞因子表達

齊齊哈爾醫學院免疫熟悉四、酶聯免疫斑點試驗(ELISPOT)

包被有待測細胞因子抗體的微孔板

分泌相應細胞因子的待測細胞

有或無刺激物培養細胞因子被板上的特異性抗體捕獲后續的反應如同ELISA一個斑點代表一個細胞因子分泌細胞，斑點的顏色深淺程度與細胞分泌的細胞因子量相關

基本原理+了解齊齊哈爾醫學院免疫方法學評價比常規ELISA法的靈敏度提高200倍應用：檢測分泌特定細胞因子的細胞熟悉五、免疫學測定方法學評價優點：

特異性高操作簡便、快速，無需依賴細胞株影響因素較少且易控制，重復性好，方法容易標準化。缺點：

所測定含量，與其生物活性不一定呈正比結果與所用的抗體來源及親和力有很大的關系

敏感性相對較低標本中可溶性受體，會影響特異性抗體對細胞因子結合熟悉第三節細胞因子與黏附分子測定的臨床應用1.特定疾病的輔助診斷2.機體免疫狀態的評估3.臨床疾病治療效果的監測和指導用藥4.疾病預防的應用熟悉一、臨床應用原則方法選擇和結果判斷作出綜合考慮:

異質性

功能交叉性和多樣性

來源的復雜性

組織細胞的非特異性細胞因子和粘附分子

全身免疫或炎癥狀態——血漿、血清炎癥局部細胞因子的水平——局部分泌液細胞分泌細胞因子的特性——外周單個核細胞細胞表面細胞因子受體或黏附分子定位檢測疾病療效觀察和預后判斷1.標本的適當選取敏感性高-------特異性低，廢棄物難處理活性測定-------不能精確蛋白定量基因分析-------操作繁瑣，有助于疾病分析多種方法—綜合分析—正確評價

2.方法的聯合應用意義：細胞因子具有網絡狀調節的特點級聯效應或相互抑制作用的網絡系統有助于提供有效的疾病診斷和機體免疫狀態信息舉例：免疫細胞分泌：IL-1、IL-2、IFN-γ和GM-CSFTh1/Th2細胞平衡狀態：IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ3.細胞因子的聯合檢測二、特定疾病的輔助診斷（一）細胞因子與疾病1.細胞因子風暴—IL-1、IL-2、IL-6、IFN-γ等

引發全身炎癥反應綜合征2.變態反應性疾病—哮喘IL-4促進IgE合成3.自身免疫病—類風濕性關節炎（TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、MCP-1）（一）細胞因子與疾病4.免疫缺陷病—IL-2Rγ基因缺陷（重癥聯合免疫缺陷病）；IL-6（漿細胞瘤、膀胱癌）5.器官移植排斥反應—TNF-α、IL-1、IL-2、IL-6、IFN-γ水平升高6.惡性腫瘤—檢測IL-2、IL-6、IFN-γ水平用于療效的評估（二）黏附分子與疾病1.動脈粥樣硬化——ICAM、P-選擇素2.腎臟疾病——ICAM3.肝臟疾病---VCAM-1、ICAM-1、IL-14.自身免疫病----SLE（E-選擇素、ICAM-1）類風濕關節炎（E-選擇素）

三、評估機體的免疫狀態機體免疫應答的強弱作為觀察治療效果和判斷預后的重要指標對保證治療效果具有指導意義四、疾病療效檢測及指導用藥根據患者相關細胞因子水平或免疫狀態的檢測結果選擇細胞因子的種類和劑量。細胞因子水平過表達/可溶性黏附分子增高使用相應的細胞因子拮抗劑或抗體1．細胞因子和細胞粘附分子的概念？細胞因子可分為幾類？2．臨床檢測中常用細胞因子與細胞黏附分子的免疫學檢測方法有哪些？3．細胞因子及黏附分子檢測的臨床意義是什么？思考題1.細胞外可溶性黏附分子主要測定法是()

A.ELISAB.酶免疫組化法

C.熒光免疫法D.流式細胞儀測定法

E.時間分辨熒光免疫法2.下列對FCM檢測細胞因子的描述中錯誤的是()A.靈敏度高B.可測細胞內細胞因子

C.特異性高D.單細胞水平分析

E.mRNA表達水平3．用ELISA方法測定細胞因子，錯誤的是()

A.特異性高B.可測活性

C.操作簡便D.可定量分析E.時間短4.在檢測可溶性黏附分子中，ELISA常用()

A.直接法B.間接法C.夾心法D.競爭法E.組化法AEBC5.不屬于細胞因子特點的是()

A.分泌型蛋白質B.自分泌C.低分子量D.不受MHC限制E.半衰期長6.黏附分子作用是()

A.細胞信號傳導與活化B.細胞的伸展與轉移

C.細胞的生長與分化D.創傷的愈合

E.以上都是7.慢性肝炎的急性期和活動期水平顯著升高,而穩定期和恢復期有明顯下降的細胞因子()A.TNF和IL-6B.TNF和IL-10C.TNF和EPOD.GM-CSF和EPOE.GM-CSF和IL-6EEA8.細胞因子生物學測定法最重要的優點是()A.高特異性B.操作簡單C.低靈敏