1非小細(xì)胞肺癌患者表皮生長因子受體第19、21號外顯子突變研究浙江省腫瘤醫(yī)院葉雪梅毛偉敏劉杏娥1非小細(xì)胞肺癌患者表皮生長因子受體第19、21號外顯12浙江省2009年癌癥發(fā)病率排名listmale(ASR*)listFemale(ASR*)1Lung1Breast2Liver2Lung3Stomach3Esophageal

4Esophagus4Stomach5Colon/rectum5Live在癌癥發(fā)病人群中，男性肺癌占第一位，女性為第二位。我省惡性腫瘤報(bào)告發(fā)病率為226.12/10萬，死亡率為171.03/10萬，占總死亡人數(shù)的27.67%，居我省死因首位。

2浙江省2009年癌癥發(fā)病率排名listmale(ASR*23靶向治療的重要性初次確診3/4患者局部晚期及晚期,失去手術(shù)機(jī)會,以化療主為的綜合治療手段鉑類兩藥聯(lián)合方案是目前標(biāo)準(zhǔn)的化療方1.仍不能明顯延長晚期肺癌的生存期2.相互比較無特別優(yōu)秀方案3.達(dá)到了一個(gè)平臺,

傳統(tǒng)方案1年生存率20%-25%

第3代方案1年生存率33%,2年生存率11%分子靶向藥物毒性較小，耐受性較好靶向治療的目的:改善患者生活質(zhì)量，延長生存期3靶向治療的重要性初次確診3/4患者局部晚期及晚期,失去手術(shù)34EGFRIinhibitionViaTyrosineKinaseInhibitors4EGFRIinhibitionViaTyrosine4有效預(yù)測因子亞裔非吸煙腺癌EGFR突變女性TKI有效預(yù)測因子亞裔非吸煙腺癌EGFR突變女性TKI5課題思路隨訪TKI治療測序step1step2step3課題思路隨訪TKI治療測序step1step2step36目的檢測90例NSCLC患者肺癌組織中的EGFR基因第19和21號外顯子的突變率觀察Exon19和Exon21的突變類型分析突變與臨床特征的關(guān)系，并探討其生物學(xué)活性，為臨床醫(yī)生選擇最受益人群提供理論依據(jù)。觀察TKI療效與EGFR突變的關(guān)系目的檢測90例NSCLC患者肺癌組織中的EGFR基因第觀察E7方法收集標(biāo)本（90例）提取DNA（酚氯法）DNA測序（正反雙向）方法收集標(biāo)本提取DNADNA測序89PCR產(chǎn)物電泳圖片ABA:Exon19擴(kuò)增片段電泳圖（371bp）B:Exon21擴(kuò)增片段電泳圖（371bp）(注：1為marker，2～10分別為9個(gè)不同標(biāo)本)Exon19、exon21目的片段

9PCR產(chǎn)物電泳圖片ABA:Exon19擴(kuò)增片段電泳圖（39101.突變分布

例數(shù)百分比(%)Exon191617.8Exon211314.4同義突變4752.2delE746-A750delL747-P753insSS749S2244(A→G)突變類型exon19L858R（T→G）L861Q(T→A)exon21101.突變分布例數(shù)百分比(%)Exon191617.810112.MutationtypesofEGFRin

Exon19andExon21MutationtypesNucleotidesAminoacidsWidetypeExon19AAGGAATTAAGAGAAGCAACATCTCCGAAAGCCKELREATSPKAdelL747-P753insSAAGGAAT

CGAAAGCCKESKAdelE746-A750AAG

AACATCTCCGAAAGCCKTSPKAWidetypeExon21TTTGGGCTGGCCAAACTGCTGGGTGCGGAAFGLAKLLGAEL858RTTTGGGCGGGCCAAACTGCTGGGTGCGGAAFGRAKLLGAEL861QTTTGGGCTGGCCAAACAGCTGGGTGCGGAAFGLAKQLGAEWidetypeExon19AGACCCTGCTCATCTCCACATCCTRPCSSPHPS749S2244(A→G)AGACCCTGCTCGTCTCCACATCCTRPCSSPHP112.MutationtypesofEGFRin11121.delL747-P753insS

CCCGTCGCTATCAAGGAATTAAGAGAAGCAACATCTCCGAAAGCCAACAAGGAAATCCTCCCGTCGCTATCAAGGAATCGAAAGCCAAACAAGGAAATCCTTCGATGTGAGTTTCTGC121.delL747-P753insSCCCGTCGC12132.delE746-A750CCCGTCGCTATCAAGGAATTAAGAGAAGCAACATCTCCGAAAGCCAACAAGGAAATCCCCGTCGCTATCAAGACATCTCCGAAAGCCAACAAGGAAATCCTTCGATGTGAGTTT

132.delE746-A750CCCGTCGCTATCA13143.L858R（T→G）

GATTTTGGGCTGGCCAAACTGCTGGGTGCGGAAGAGAAAGAAGATTTTGGGCGGGCCAAACTGCTGGGTGCGGAAGAGAAAGAA143.L858R（T→G）GATTTTGGGCTGGC14154.L861Q(T→A)

GATTTTGGGCTGGCCAAACTGCTGGGTGCGGAAGAGAAAGAAGATTTTGGGCTGGCCAAACAGCTGGGTGCGGAAGAGAAAGAA154.L861Q(T→A)GATTTTGGGCTGGCC15165.S749S2244(A→G)雜合子突變

TGGCAGCTGCTCTGCTCTAGACCCTGCTCATCTCCACATCCTTGGCAGCTGCTCTGCTCTAGACCCTGCTCGTCTCCACATCCT165.S749S2244(A→G)雜合子突變TGGCA16176.S749S2244(A→G)純合子突變

TGGCAGCTGCTCTGCTCTAGACCCTGCTCATCTCCACATCCTTGGCAGCTGCTCTGCTCTAGACCCTGCTCGTCTCCACATCCT176.S749S2244(A→G)純合子突變TGGCA1718Table3.RelationshipbetweenEGFRmutationandtheclinicalcharactersofNSCLCpatients

Itemmutation(case，%)wildtype(case，%)PvalueExon19exon21totalGenderFemal8/25(32.0%)7/25(28.0%)15/25(60.0%)10/25(40.0%)0.000Male8/65(12.3%)6/65(9.2%)14/65(21.5%)51/65(78.5%)PathologyADC7/34(20.6%)6/34(17.6%)13/34(38.2%)21/34(61.8%)0.000BAC7/10(70.0%)2/10(20.0%)9/10(90.0%)1/10(10.0%)SCC2/46(4.3%)5/46(10.9%)7/46(15.2%)39/46(84.8%)SmokingYES5/54(9.3%)6/54(11.1%)11/54(20.4%)43/54(79.6%)0.003NO11/36(30.6%)7/36(19.4%)18/36(50.0%)18/36(50.0%)StageⅠ2/31(6.5%)5/31(16.1%)7/31(22.6%)24/31(77.4%)0.106Ⅱ8/40(20.0%)4/40(10.0%)12/40(30.0%)28/40(70.0%)Ⅲ6/18(33.3%)3/18(16.7%)9/18(50.0%)9/18(50.0%)Ⅳ0/1(0%)1/1(100%)1/1(100%)0/1(0%)age<70yr11/61(18.0%)9/61(14.8%)20/61(32.8%)41/62(67.2%)0.868>=70yr5/28(17.2%)4/29(13.8%)9/29(31.1%)20/29(69.0%)18Table3.Relationshipbetween1819Table4.CorrelationbetweenEGFRexon19samesensemutationandtheclinicalcharacterofNSCLC

ItemTotalNoMutationNo.Positiverate(%)PvalueGenderMale251144.00.333

Female653655.4SmokingYES542851.90.931

NO361952.8PathologyADC341544.10.017

BAC10220.0SCC463065.2StageⅠ311754.80.193

Ⅱ402460.0Ⅲ18633.3Ⅳ100age<70yr613455.7

0.333>=70yr291344.819Table4.Correlationbetween1920分析從統(tǒng)計(jì)表中看,結(jié)果表明四種經(jīng)典突變的突變率與患者的性別、病理類型、吸煙狀態(tài)相關(guān)，而與年齡、TNM分期無關(guān)。本研究中，我們發(fā)現(xiàn)47例患者發(fā)生了Exon19上的同義突變S749S2244(A→G),總突變率為52.2%，此為全球首次報(bào)道。統(tǒng)計(jì)分析顯示該突變與病理類型相關(guān),多發(fā)生于鱗狀細(xì)胞癌中，與其他因素沒發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。有關(guān)同義突變的生物遺傳學(xué)效應(yīng)有待進(jìn)一步深入研究。20分析從統(tǒng)計(jì)表中看,結(jié)果表明四種經(jīng)典突變的突變率與患者的性20討論12345EGFR-TK突變類型EGFR突變與EGFR-TKI療效的關(guān)系EGFR突變與患者臨床特征的關(guān)系各種突變類型與EGFR靶向藥物療效的關(guān)系同義突變及其生物遺傳學(xué)效應(yīng)探討12即往的分子生物學(xué)理論都認(rèn)為最終得到的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能也不會產(chǎn)生變化日前在《科學(xué)》雜志上報(bào)告說，這種沉默突變并不“沉默”，在某種情況下可以決定蛋白質(zhì)的最終表現(xiàn)*。3同義突變可能是使偏愛密碼子變成非偏愛密碼子，從而導(dǎo)致相應(yīng)的tRNA由多數(shù)型轉(zhuǎn)為少數(shù)型，結(jié)果使該密碼子的表達(dá)大大減低，影響蛋白質(zhì)的合成＃。討論12345EGFR-TK突變類型EGFR突變與EGFR-21主要突變類型

delE746-A750delS752-I759delL747-T751insSdelL747-P753insSdelL747-A750

S768、V769、R776、T790S768I、G719S,、S768I/G719S、D761-E762insEAFQL858RL861QL833VH835LQ852Exon19exon21exon2046%5%41%主要突變類型delE746-A750S768、V7692223結(jié)論1、90例NSCLC患者檢測到29例突變，突變率達(dá)32.2%。其中Exon19和Exon21各占總突變的55.2%和44.8%。2、EGFR基因Exon19及Exon21的突變主要見于腺癌，尤其是細(xì)支氣管肺泡癌、女性、非吸煙患者；突變與患者年齡及TNM分期無相關(guān)性。3、檢測到了兩種經(jīng)典的Exon19缺失突變和兩種Exon21