a及b地中海貧血遺傳篩查及產(chǎn)前診斷a及b地中海貧血遺傳篩查及產(chǎn)前診斷a及b地中海貧血遺傳篩查及產(chǎn)前診斷地中海貧血是全球最大的單基因遺傳病之一中國(guó)南方不同高發(fā)地區(qū)人群攜帶率1~23%研究背景2020/12/182a及b地中海貧血遺傳篩查及產(chǎn)前診斷a及b地中海貧血遺傳篩查及1Thalassemia地中海貧血是全球最大的單基因遺傳病之一中國(guó)南方不同高發(fā)地區(qū)人群攜帶率1~23%研究背景2020/12/182Thalassemia地中海貧血是全球最大的單基因遺傳病之一中國(guó)南方α和β地貧的人群攜帶率

地區(qū)攜帶率(%)

地貧β地貧

廣東8.532.54

廣西14.956.78

四川1.922.18

貴州—4.72

臺(tái)灣4.201.10

香港5.023.412020/12/183中國(guó)南方α和β地貧的人群攜帶率地區(qū)攜帶率(%)地珠海韶關(guān)廣州汕頭湛江廣東省五個(gè)地區(qū)地中海貧血遺傳流行病學(xué)調(diào)查西南東北中JournalofClinicalPathology,2004;57(5):517-22.2020/12/184珠海韶關(guān)廣州汕頭湛江廣東省五個(gè)地區(qū)地中海貧血遺傳流行病學(xué)調(diào)查

遺傳變異Allele數(shù)%

地貧染色體4788.53(--SEA)Deletion2324.14(-α3.7)Deletion1743.10(-α4.2)Deletion530.95(-αCS)Mutation100.18(--THAI)Deletion20.04(-αQS)Mutation20.04(--11.1)Deletion10.02

2CD118(+TCA)10.02

-

-genedeletion10.02Undetermined20.04廣東省人群中地貧的攜帶者頻率2020/12/185遺傳變異Allele數(shù)%地貧染色體478遺傳變異Allele數(shù)%β地貧染色體1982.54DeletionofCTTTatcodons41-42720.92C→Tatposition654inIVS2480.62A→Gatnucleotide-28330.42G→Aatcodon26100.13A→Tatcodon1780.09InsertionofAatcodons71-7270.09G→Tatcodon4370.09A→Gatnucleotide-2940.05InsertionofAatcodons27-2840.05

-genedeletion10.01Undetermined30.06廣東省人群中β地貧的攜帶者頻率2020/12/186遺傳變異Allele數(shù)%β地貧染色體1982.54廣東省年高風(fēng)險(xiǎn)妊娠預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)（95%CI）

重型或中間型β地貧：645（480，835）

Bart’s胎兒水腫綜合征：1714（1498，1945）

血紅蛋白（Hb）H病：1677（1467，1901）2020/12/187廣東省年高風(fēng)險(xiǎn)妊娠預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)（95%CI）2020/12/1排序出生缺陷分析例數(shù)發(fā)生頻率(/10,000)1先天性心臟病26019.662重型

地貧20815.733多指20015.124肢體短縮1118.395唇裂/腭裂1098.24廣州市主要出生缺陷的發(fā)生率(1998-2001)2020/12/188排序出生缺陷分析例數(shù)發(fā)生頻率1先天性心臟病26019.662地貧純合子：致死性出生缺陷重型地貧:胎兒水腫綜合征

早產(chǎn)死胎或出生前后死亡

可導(dǎo)致嚴(yán)重產(chǎn)科并發(fā)癥

無(wú)理想治療方法重型地貧

出生后1年內(nèi)發(fā)病

多于未成年前因嚴(yán)重貧血而夭折

輸血和去鐵治療可維持,代價(jià)昂貴2020/12/189地貧純合子：致死性出生缺陷重型地貧:胎兒水腫綜合征重型地研究地中海貧血的意義

重癥地貧患兒的出生是世界公認(rèn)的公共衛(wèi)生問(wèn)題

通過(guò)產(chǎn)前診斷阻止重癥患兒出生是首選預(yù)防措施

WHO優(yōu)先推薦在發(fā)展中國(guó)家實(shí)施預(yù)防的遺傳性疾病

預(yù)防地貧是中國(guó)南方高發(fā)區(qū)減少出生缺陷的戰(zhàn)略需求研究背景2020/12/1810研究地中海貧血的意義研究背景2020/12/1810應(yīng)用于地貧控制的人群篩查策略

基于醫(yī)院水平的預(yù)防計(jì)劃

基于社區(qū)水平的預(yù)防計(jì)劃擴(kuò)展的家系篩查計(jì)劃

2020/12/1811應(yīng)用于地貧控制的人群篩查策略2020/12/1811中國(guó)南方地貧人群預(yù)防的首個(gè)前瞻性篩查計(jì)劃

時(shí)間：1993.01.01~2003.12.31

基于醫(yī)院的預(yù)防計(jì)劃:廣州市婦嬰醫(yī)院占廣州市出生數(shù)的1/17

策略：孕期雜合子篩查

結(jié)合現(xiàn)行的孕期健康產(chǎn)科檢查實(shí)施2020/12/1812中國(guó)南方地貧人群預(yù)防的首個(gè)前瞻性篩查計(jì)劃時(shí)間：19地貧攜帶者篩查及產(chǎn)前診斷流程被檢對(duì)象（婚前或孕中期）血液學(xué)分析（MCV

，HbA2變化）排除地貧地貧攜帶者遺傳咨詢，配偶檢查血液學(xué)分析（MCV

HbA2變化）地貧攜帶者排除地貧遺傳咨詢雙親基因分析胎兒產(chǎn)前診斷2020/12/1813地貧攜帶者篩查及產(chǎn)前診斷流程被檢對(duì)象（婚前或孕中期）血液學(xué)分篩查結(jié)果

2020/12/1814篩查結(jié)果2020/12/1814異常血紅蛋白

陽(yáng)性病例數(shù)孕婦配偶總數(shù)頻率‰HbE463490.91HbH212230.43HbCS153180.34HbG*141150.28HbQ*132150.28HbN*121130.24HbD*101110.20HBNewYork8080.15Total139131522.83異常血紅蛋白篩查結(jié)果2020/12/1815異常血紅蛋白陽(yáng)性病例數(shù)頻率HbE年份篩查廣州總篩查孕婦數(shù)孕婦數(shù)丈夫數(shù)

篩查發(fā)現(xiàn)的檢測(cè)出的完成的產(chǎn)前陽(yáng)性孕婦數(shù)陽(yáng)性夫婦數(shù)診斷數(shù)α地貧

(%)β地貧(%)α地貧(%)β地貧(%)α/β地貧(%)α地貧(%)β地貧(%)1993398968393350232(5.8)129(3.2)13(3.7)8(2.3)10(2.9)12(92.3)7(87.5)1994456471617421265(5.8)164(3.6)18(4.3)8(1.9)9(2.1)16(88.9)8(100)1995390271751361227(5.8)142(3.6)17(4.7)7(1.9)12(3.3)15(88.2)7(100)1996499474460464285(5.7)181(3.6)19(4.1)8(1.7)12(2.6)17(89.5)8(100)1997439271989401250(5.7)158(3.6)21(5.2)7(1.7)10(2.5)18(85.7)7(100)1998453275378425263(5.8)172(3.8)17(4.0)8(1.9)12(2.8)17(100)8(100)1999501680141465285(5.7)186(3.7)24(5.2)8(1.7)14(3.0)23(95.8)8(100)廣州市婦嬰醫(yī)院1993-2003篩查計(jì)劃的結(jié)果2020/12/1816篩查發(fā)現(xiàn)的檢測(cè)出的年份篩查廣州總篩查孕婦數(shù)孕婦數(shù)丈夫數(shù)

篩查發(fā)現(xiàn)的檢測(cè)出的完成的產(chǎn)前陽(yáng)性孕婦數(shù)陽(yáng)性夫婦數(shù)診斷數(shù)α地貧

(%)β地貧(%)α地貧(%)β地貧(%)α/β地貧(%)α地貧(%)β地貧(%)2000449281817418256(5.7)172(3.8)21(5.0)7(1.7)16(3.8)21(100)7(100)2001452180152411254(5.6)164(3.6)17(4.1)8(1.9)12(2.9)17(100)8(100)2002469580667415260(5.6)163(3.4)16(3.9)8(1.9)11(2.7)16(100)8(100)2003412486393372227(5.5)152(3.6)15(4.0)6(1.6)13(3.5)15(100)6(100)Total49221

860758

4503

2804(5.7)

1783(3.6)

198(4.4)

83(1.8)

131(2.9)

187(95.8)

82(98.8)

(cont’d)2020/12/1817篩查發(fā)現(xiàn)的檢測(cè)出的完

篩查發(fā)現(xiàn)的陽(yáng)性孕婦或陽(yáng)性夫婦

地貧1

β地貧

地貧β地貧

5.7%3.6%4.4%1.8%Totalof4503couplesscreened54例Bart’s水腫兒和HbH病

18例重型β地貧

28041783198對(duì)83對(duì)產(chǎn)前診斷：187例

地貧82例β地貧廣州市婦嬰醫(yī)院1993-2003篩查計(jì)劃的結(jié)果2020/12/1818篩查發(fā)現(xiàn)的陽(yáng)性孕婦或陽(yáng)性夫婦Totalo產(chǎn)前診斷結(jié)果2020/12/1819產(chǎn)前診斷結(jié)果2020/12/1819地中海貧血的產(chǎn)前診斷

胎兒取樣技術(shù)

DNA診斷技術(shù)

-地貧的診斷

-地貧的診斷2020/12/1820地中海貧血的產(chǎn)前診斷胎兒取樣技術(shù)2020/12/1820羊膜穿刺(amniocentesis)

抽取胎兒樣品示意圖2020/12/1821羊膜穿刺(amniocentesis)抽取胎兒樣品示意圖DNA診斷技術(shù)

多重PCR（multiplexPCR）

等位基因特異性性寡核苷酸雜交（ASO）

反向點(diǎn)雜交（RDB）

變性高效液相色譜（DHPLC）

多重引物延伸DHPLC（multiplex

PE/

DHPLC）2020/12/1822DNA診斷技術(shù)多重PCR（multiplexPCR）年份主要診斷技術(shù)

產(chǎn)前診斷例數(shù)

α地貧β地貧總數(shù)PNDs1993–2003胎兒血分析126–1261999–2003超聲診斷(DNA:Gap-PCR)61–611993.1–1993.12DNA:ASO雜交–771994–2002DNA:反向點(diǎn)雜交–70702003.1–2003.12PE/DHPLC–66

用于α和β地貧產(chǎn)前診斷的方法(1993-2003)2020/12/1823年份主要診斷技術(shù)產(chǎn)前診斷例數(shù)總數(shù)PNDs19胎兒臍帶血血紅蛋白電泳圖譜Patient1Patient2Patient3FetalAdultoriginA2FABart’sDiagnosisPatient1Bart’shydropsfetalisPatient2HbHdiseasePatient3thaltrait2020/12/1824胎兒臍帶血血紅蛋白電泳圖譜Patient1Patient2P本實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用的主要技術(shù)

技術(shù)名稱

應(yīng)用對(duì)象Gap-PCRα地貧常見(jiàn)突變RDBα地貧／β地貧半變性DHPLC*α地貧／β地貧SBE/FP*β地貧常見(jiàn)突變PE/DHPLCβ地貧5種常見(jiàn)突變

-鏈ELISAassayα地貧

SEA缺失突變2020/12/1825本實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用的主要技術(shù)技術(shù)名稱應(yīng)用對(duì)象Ga

-50kb-10kb0kb10kb20kb30kb

(--SEA)Deletion(-

4.2)Deletion(-

3.7)Deletion21導(dǎo)致α地貧的不同類型的基因缺失2020/12/1826-50kb-10kb采用Gap-PCR進(jìn)行--SEAα地貧基因缺失的基因分型2020/12/1827采用Gap-PCR進(jìn)行--SEAα地貧基因缺失的基因分型20--SEAα地貧缺失的基因分型結(jié)果2020/12/1828--SEAα地貧缺失的基因分型結(jié)果2020/12/1828三個(gè)α地貧家庭的產(chǎn)前診斷結(jié)果MNPBFaMoFeFaMoFe

FaMoFe

NormalHeterozygoteHomozygoteFamily1Family2Family3NormalMutant2020/12/1829三個(gè)α地貧家庭的產(chǎn)前診斷結(jié)果MNPBFaM與美國(guó)商品化UBI試劑盒的對(duì)比研究2020/12/1830與美國(guó)商品化UBI試劑盒的對(duì)比研究2020/12/18302020/12/18312020/12/1831TranscriptionRNAsplicingInitiatorcodonFrameshiftNonsensecodonDoubleheterozygote中國(guó)南方β地貧突變的變異類型和位置EXON1IVS1

EXON2EXON3

IVS22020/12/1832TranscriptionRNAsplicingIniti

Fragmentsize:

A=453bp

B=364bp

C=423bp

OnesetofPCRconditionsDHPLC分析人β珠蛋白基因:三個(gè)PCR片段擴(kuò)增IVS15’UTR123IVS23’UTRABC2020/12/1833Fragmentsize:A=453bDHPLC的三種操作模式

非變性分析（50

C

）雙鏈DNA大小測(cè)定

半變性分析（52-78

C

）突變鑒定

全變性分析（78-80

C

）

Oligo和RNA分析2020/12/1834DHPLC的三種操作模式2020/12/1834PCR產(chǎn)物的半變性分析（52-78

C

）

Wildtype Mutant Heteroduplexes Homoduplexes

Reference

Samples

PCRProducts2020/12/1835PCR產(chǎn)物的半變性分析（52-78C） Wil2020/12/18362020/12/1836DHPLC檢測(cè)β地貧突變的結(jié)果CD2/N-29/NCD2/CD14-15CD17/NCD2/CD27-28-28/CD27-28/CD2/-98CD26/NCD27-28/N-73/N-73/N-28/NFragmentA2020/12/1837DHPLC檢測(cè)β地貧突變的結(jié)果CD2/N-29/NCD2/CD71-72/IVS-Ⅱ-16N/NCD41-42/IVS-Ⅱ-16CD71-72/NIVS-Ⅱ-16/NCD41-42/N？CD38/NCD71-72/NCD41-42/CD41-42FragmentBDHPLC檢測(cè)β地貧突變的結(jié)果2020/12/1838CD71-72/IVS-Ⅱ-16N/NCD41-42/IVSN/NIVS-Ⅱ-654/NIVS-Ⅱ-654/654IVS-Ⅱ-666/NIVS-Ⅱ-654/666FragmentCDHPLC檢測(cè)β地貧突變的結(jié)果2020/12/1839N/NIVS-Ⅱ-654/NIVS-Ⅱ-654/654IVSRDBanalysis:applicationtorapidprenataldiagnosisforeightβthalassaemiamutations.GenotypeFatherCDs41-42(

CTTT)/NMotherIVS-2-654(C

T)/NFetusCDs41-42/IVS-2-654NormalcontrolN/N2020/12/1840RDBanalysis:applicationtor診斷結(jié)果基因型例數(shù)正常

30雜合子(total)35CDs41-42(

TCTT)/N14IVS-2-654(C>T)/N8-28(A>G)/N5CD17(A>T)/N3CD26(G>A)/N2-29(A>G)/N1CDs27-28(+C)/N1Unknown/NorNormal183例

地貧高風(fēng)險(xiǎn)胎兒產(chǎn)前診斷結(jié)果2020/12/1841診斷結(jié)果基因型例數(shù)正常30雜合子診斷結(jié)果基因型例數(shù)純合子或雙重雜合子(總數(shù))18CDs41-42(

TCTT)/IVS-2-654(C>T)6CDs41-42(

TCTT)/-28(A>G)4CDs41-42(

TCTT)/CD17(A>T)2IVS-2-654(C>T)/CD17(A>T)2CDs41-42(

TCTT)/CDs41-42(

TCTT)1CDs41-42(

TCTT)/CDs27-28(+C)1IVS-2-654(C>T)/CDs71-72(+A)1IVS-2-654(C>T)/CD43(G>T)1總數(shù)83(cont’d)2020/12/1842診斷結(jié)果基因型例數(shù)純合子或雙重雜合子(總數(shù))18C胎兒診斷

產(chǎn)前診斷例數(shù)

α地貧β地貧

總數(shù)

(%)正常413069(25.6)攜帶者9235125(46.3)受累胎兒*541872(26.7)胎兒流產(chǎn)213(1.11)誤診000.0總數(shù)(%)187(69.3)83(30.7)270(100)266例高風(fēng)險(xiǎn)妊娠的產(chǎn)前診斷結(jié)果

*ThreeHbHdiseaseinvolved2020/12/1843胎兒診斷產(chǎn)前診斷例數(shù)

49221例被篩查的孕婦4587(9.3%)地貧特征/病例

2804(5.7%)

地貧

1783(3.6%)β地貧139例其他異常Hb個(gè)體44495例正常表型個(gè)體4503(98.2%)陽(yáng)性孕婦的配偶被篩查281(6.2%)例高風(fēng)險(xiǎn)妊娠

198重型

地貧

83重型β地貧84(1.8%)例配偶未接受篩查281(100%)例高風(fēng)險(xiǎn)妊娠孕婦進(jìn)入跟蹤隨訪4222例非風(fēng)險(xiǎn)妊娠2020/12/184449221例被篩查的孕婦4587(9.3%)地269(95.7%)孕婦實(shí)施產(chǎn)前診斷

187

地貧

83β地貧(1雙胞胎)72(26.7%)孕婦要求終止妊娠

54重型

地貧

18重型β地貧(1雙胞胎)69重型地貧被預(yù)防

51水腫胎

18重型β地貧(1雙胞胎)12孕婦不接受產(chǎn)前診斷197例孕婦繼續(xù)妊娠3例HbH病出生2例水腫胎出生2020/1