（優選）章微生物鑒定崗位當前第1頁\共有49頁\編于星期四\10點技能目標1.學會微生物生化試驗的接種方法。2.學會正確觀察微生物生化試驗的結果。3.復習微生物常用的接種方法。當前第2頁\共有49頁\編于星期四\10點崗位描述

該崗位的任務是利用不同微生物對外界物質不同的代謝作用和所產生代謝產物的不同，進行微生物的鑒定和分型，提供疾病的輔助診斷、療效評估、預后判斷及藥品、食品、化妝品菌檢判斷所需的重要生物學參數。該崗位的從業人員除了要有微生物培養、接種技術外，還必須具備一定的微生物生物化學知識，能根據一定的生化反應現象進行結果判斷。當前第3頁\共有49頁\編于星期四\10點任務一

認識微生物的新陳代謝當前第4頁\共有49頁\編于星期四\10點概念:微生物在其生理活動過程中，一方面不斷從外界環境吸收營養物質，經過一系列復雜的生化反應過程，轉化為細胞生理活動過程中有用的物質；另一方面又不斷向外界排泄出廢物，以維持細胞的正常生長和繁殖，這就是微生物的新陳代謝。

物質代謝（分解代謝、合成代謝）能量代謝（產能代謝、耗能代謝）一、微生物新陳代謝的特點

當前第5頁\共有49頁\編于星期四\10點分解代謝（異化作用）：復雜有機物→

簡單化合物→釋放能量合成代謝（同化作用）：簡單化合物→復雜有機物→消耗能量一、微生物新陳代謝的特點

攝取的營養物質細胞組成物質

自身細胞內復雜的細胞物質及環境中大分子營養物質當前第6頁\共有49頁\編于星期四\10點初級代謝：合成細胞生長、繁殖必需的物質，如：氨基酸、蛋白質、核酸、維生素次級代謝：合成細胞生長、繁殖無顯著作用的物質如：抗生素、色素等一、微生物新陳代謝的特點

當前第7頁\共有49頁\編于星期四\10點細菌產生的酶部位分：胞內酶胞外酶（與細菌毒力有關）生成條件分：固有酶（與遺傳有關）誘導酶特點：溫和性、高效性、專一性一、微生物新陳代謝的特點

當前第8頁\共有49頁\編于星期四\10點一、微生物新陳代謝的特點

微生物新陳代謝有三個突出的特點：

①新陳代謝十分活躍；

②新陳代謝類型多樣化；

③新陳代謝途徑靈活

當前第9頁\共有49頁\編于星期四\10點二、微生物的新陳代謝產物

微生物新陳代謝產物主要有：

1.熱原質2.侵襲性酶及毒素3.色素4.抗生素5.細菌素6.維生素注入人體或動物體內可引起發熱反應。耐高溫特性，不被121℃高壓滅菌所破壞，可用吸附法、蒸餾法、濾過法、熱破壞法（250℃干熱45min）、強酸強堿處理法去除。某些微生物在代謝過程中產生的微量就能選擇性的抑制或殺滅其它微生物或腫瘤細胞的物質某些細菌菌株產生的,僅能對一些與其產生菌密切相關的細菌有作用的一類具有抗菌作用的蛋白質或蛋白質與脂多糖的復合物。當前第10頁\共有49頁\編于星期四\10點透明質酸酶（利于擴散）鏈激酶（利于擴散）鏈道酶（利于擴散）血漿凝固酶（抗吞噬）當前第11頁\共有49頁\編于星期四\10點當前第12頁\共有49頁\編于星期四\10點二、微生物分解代謝的類型

微生物的分解代謝主要是對糖、蛋白質和脂肪的代謝過程：

1.糖類的分解2.蛋白質的分解3.脂肪的分解當前第13頁\共有49頁\編于星期四\10點任務二認識生化檢測原理、用途及方法當前第14頁\共有49頁\編于星期四\10點一、原理及用途

由于各種不同種類的微生物具有各自獨特的酶系統，因而新城代謝過程中對底物的分解能力不同，其代謝產物也必定有所差異。用一些生物化學反應測定這些具有不同特性的分解或合成代謝產物，可作為區別和鑒定微生物種類的重要依據之一。這就是微生物的生物化學鑒定試驗。現已有數百種獨立的生化測試可供選用，每一種測試都可檢測某種特定的酶或生理活性是否存在。只要將這些生理生化測試中的某幾項聯合使用就可以描述出某種特定細菌的特征。

當前第15頁\共有49頁\編于星期四\10點生化檢驗的目的：

通過生化反應現象的不同，區別和鑒定微生物種類。當前第16頁\共有49頁\編于星期四\10點二、常用的生化反應試驗

微生物的分解代謝主要是對糖、蛋白質和脂肪的代謝過程：

1.糖類發酵試驗2.甲基紅試驗3.VP試驗4.枸櫞酸鹽利用試驗5.吲哚試驗6.硫化氫試驗當前第17頁\共有49頁\編于星期四\10點1.糖類發酵試驗

微生物利用單糖、雙糖、多糖、醇類、有機酸等各種碳源的能力不同，發酵狀況可通過倒置試管中收集的氣泡看出。當前第18頁\共有49頁\編于星期四\10點二、常用的生化反應試驗（一）、糖發酵試驗葡萄糖大腸桿菌傷寒桿菌產酸、產氣產酸、不產氣乳糖大腸桿菌傷寒桿菌產酸、產氣不分解區別大腸與傷寒桿菌檢測pH通過在倒置試管中收集的氣泡看出當前第19頁\共有49頁\編于星期四\10點空白對照傷寒桿菌大腸桿菌糖發酵試驗氣泡變黃色當前第20頁\共有49頁\編于星期四\10點二、常用的生化反應試驗色氨酸產氣桿菌吲哚不產生吲哚大腸桿菌二甲基氨基苯甲醛紅色陽性陰性（二）吲哚試驗（I）

：二甲基氨基苯甲醛無色

試驗原理：常可用于大腸埃希菌與產氣腸桿菌、肺炎克雷伯菌和產酸克雷伯菌等腸桿菌科的鑒別。當前第21頁\共有49頁\編于星期四\10點吲哚試驗陽性陰性大腸桿菌：+產氣桿菌：-當前第22頁\共有49頁\編于星期四\10點葡萄糖產氣桿菌小分子酸乙酰甲基甲醇大腸桿菌甲基紅紅色陽性陰性（三）甲基紅試驗（M）：甲基紅橙色

試驗原理：二、常用的生化反應試驗常用于腸桿菌科內某些屬種的鑒別當前第23頁\共有49頁\編于星期四\10點甲基紅試驗陽性陰性大腸桿菌：+產氣桿菌：-當前第24頁\共有49頁\編于星期四\10點葡萄糖產氣桿菌小分子酸乙酰甲基甲醇大腸桿菌精氨酸無色陽性陰性（四）乙酰甲基甲醇試驗（V）：紅色pH?7精氨酸pH?7

試驗原理：二、常用的生化反應試驗本試驗常與甲基紅試驗一起使用，一般情況下，VP試驗為陽性的細菌，甲基紅試驗常為陰性，反之亦然。當前第25頁\共有49頁\編于星期四\10點V-P試驗陰性陽性大腸桿菌：-產氣桿菌：+當前第26頁\共有49頁\編于星期四\10點枸櫞酸鈉產氣桿菌不生長培養基呈中性生長使培養基pH?7大腸桿菌不變色陽性陰性（五）枸櫞酸鹽利用試驗（C）：藍色溴麝香草酚藍溴麝香草酚藍

試驗原理：在以枸櫞酸鈉為惟一碳源的培養基上接種二、常用的生化反應試驗可用此試驗作細菌種屬間鑒定，當前第27頁\共有49頁\編于星期四\10點枸櫞酸利用試驗大腸桿菌：-產氣桿菌：+陽性陰性當前第28頁\共有49頁\編于星期四\10點二、常用的生化反應試驗IMVC試驗

符號表示：I：代表吲哚試驗M：代表甲基紅試驗V：代表乙酰甲基甲醇試驗C：代表枸櫞酸鹽利用試驗當前第29頁\共有49頁\編于星期四\10點IMVC試驗

試驗用途：常用于大腸桿菌和產氣桿菌的鑒別。二、常用的生化反應試驗當前第30頁\共有49頁\編于星期四\10點IMVC試驗

大腸桿菌與產氣桿菌鑒別結果：IMVC大腸桿菌++——產氣桿菌——++二、常用的生化反應試驗當前第31頁\共有49頁\編于星期四\10點（六）、硫化氫試驗

試驗用途：常用來鑒別腸道桿菌的種類：如:沙門菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬、愛德華菌屬為陽性大腸桿菌、產氣桿菌為陰性二、常用的生化反應試驗當前第32頁\共有49頁\編于星期四\10點

試驗原理：培養基中的含硫氨酸沙門菌屬H2S醋酸鉛硫酸亞鐵黑色陽性大腸桿菌產氣桿菌不產生H2S陰性?所屬類型：氨基酸和蛋白質試驗（六）、硫化氫試驗二、常用的生化反應試驗當前第33頁\共有49頁\編于星期四\10點硫化氫試驗乙型副傷寒桿菌：+大腸桿菌：-陽性陰性當前第34頁\共有49頁\編于星期四\10點三、微生物快速檢測技術

微生物快速檢測法是近年來不斷取得進展的一種新型的檢測方法，常見的有：

1.快速測試片法2.選擇、鑒定用培養基法3.生物化學技術4.微生物快速鑒定和自動化分析系統當前第35頁\共有49頁\編于星期四\10點（一）快速測試片法

是指以紙片、紙膜、膠片等作為培養基載體，將特定的培養基和顯色物質附著在上面，通過微生物在上面的生長、顯色來測定受檢樣品中微生物的方法。快速檢測紙片產品，可以檢測乳酸桿菌、沙門菌、葡萄球菌等。

快速檢測法與傳統檢測方法之間的相關性非常好，如用大腸菌群快速檢測紙片的特異性和敏感性與發酵法符合率均較高。有些快速檢測法中還加入了染色劑、顯色劑，增強了菌落的目視效果。當前第36頁\共有49頁\編于星期四\10點（二）選擇、鑒定用培養基法

在培養基中加入特異性的生化反應底物、抗體、熒光反應底物、酶反應底物等，可使目標培養物的選擇、分離、鑒定一次性完成。

如生物一梅里埃公司的BP+RPF(兔血漿+纖維蛋白原)培養基，可在24h內鑒定金黃色葡萄球菌。Merk公司的培養基上，大腸桿菌可為墨綠色至紫色菌落，沙門菌為淡綠色至藍綠色菌落。檸檬酸桿菌和克雷伯桿菌為橙紅色至紅色菌落，其他腸道菌為無色菌落。當前第37頁\共有49頁\編于星期四\10點（三）生物化學技術1.PCR技術PCR技術采用體外酶促反應合成特異性DNA片段，再通過擴增產物來識別細菌。優點：靈敏度高，節約了大量時間缺點：增菌培養基成分和其他微生物DNA對Taq酶具有抑制作用，可能導致檢驗結果假陰性2.基因探針技術

利用具有同源性序列的核酸單鏈在適當條件下互補的原理，采用特異性基因片段制備基因探針來識別細菌。優點：減少了基因片段長度多態性所需要分析的條帶數缺點：不能鑒定目標菌以外的其他菌當前第38頁\共有49頁\編于星期四\10點（四）微生物快速鑒定和自動化分析系統1.微量多項試驗鑒定系統

也稱為數碼分類鑒定法和簡易診檢技術，基本原理是通過數學的編碼技術，將細菌的生化反應模式轉換成數學模式，給每種細菌的反應模式賦予一組數碼，建立對應的數據庫或編成檢索本。其計算步驟分為出現頻率的計算、對照檢索本數據譜得出結果、結果解釋三個部分。當前第39頁\共有49頁\編于星期四\10點（四）微生物快速鑒定和自動化分析系統2.自動化的微生物鑒定系統（1）半自動化細菌鑒定1.BBL

Crystal半自動細菌鑒定系統2.AutoScan-4半自動細菌鑒定系統3.VITEK-ATB半自動細菌鑒定系統4.AutoReader半自動細菌鑒定系統當前第40頁\共有49頁\編于星期四\10點（四）微生物快速鑒定和自動化分析系統2.自動化的微生物鑒定系統（2）全自動化微生物鑒定1.VITEK

AMS系統2.MicroScan系統3.PHOENIXTM

系統4.Biolog系統當前第41頁\共有49頁\編于星期四\10點（四）微生物快速鑒定和自動化分析系統3.使用自動化鑒定系統的注意的問題1.自動化鑒定系統自身數據庫資料有待完善2.用戶應及時更新鑒定系統數據庫3.將自動化鑒定儀的結果和細菌的其他生物性狀（如標本來源、菌落特征及其它的生理生化特征）進行核對，盡量避免錯誤的鑒定。當前第42頁\共有49頁\編于星期四\10點【知識檢測】1.對鑒別細菌有意義的細菌代謝產物是

A.維生素B.色素C.侵襲性酶D.抗生素E.毒素

2.內毒素的毒性部位在A.特異性多糖B.脂多糖C.核心多糖D.類脂Ａ

E.脂蛋白3.關于外毒素的敘述不正確的是A.主要化學成分是蛋白質B.可以經甲醛脫去毒性變成類毒素C.所引起的毒性反應基本相似

D.化學性質不穩定性

E.大多數由革蘭陽性菌產生和分泌當前第43頁\共有49頁\編于星期四\10點4.下列不屬于細菌生化反應試驗的是A.吲哚試驗B.半固體試驗