PAGEPAGEI閩南師范大學畢業論文雙水楊醛乙二胺西佛堿鐵配合物與牛血清白蛋白相互作用模式的研究Researchtheinteractationmodebetweenferrous-BISsalicylideneethylenediamineandBSA姓名：學號：系別：化學與環境科學系專業：應用化學年級：10級指導老師：2014年1月摘要雙水楊醛乙二胺西佛堿和鐵（Ⅱ）-雙水楊醛乙二胺西佛堿配合物（配合物1）的合成，并對配合物1進行紅外表征。用熒光光譜及紫外吸收光譜方法，研究該配合物1與牛白蛋白（BSA）的相互作用。研究表明配合物1對BSA猝滅作用屬于靜態猝滅，根據Stern-Volmer方程,計算了配合物1與BSA間的結合常數Kq，用Van.tHoff方程計算了熱力學參數；乙醇和EDTA為探針以及透析法推測了配合物1-BSA復合物透析過程中生成新的物質。關鍵詞：雙水楊醛乙二胺西佛堿；亞鐵離子；熒光光譜；牛血清白蛋白；EDTAAbstractTheSynthesisofBISsalicylideneethylenediamineSchiffbaseandFe(Ⅱ)-BISsalicylideneethylenediamineSchiffbase.AndthestructuresofFe(Ⅱ)-BISsalicylideneethylenediamineSchiffbasewereconfirmedbyinfrared.WereseachedtheinteractationwiththecomplexesandBSAbyUVandmolecularfluorescenceanalysis.ThestudyshowsthatthequenchingeffectonBSAbelongstostaticquenching.WecalculatedthebindingconstantKqofthecomplexesandBSAaccordingtotheStern-VolmerequationandcalculatethethermodynamicparameterswiththeVan.THoffequation.WeusedEthanolandEDTAasprobetospeculatethenewsubstancesfromthedialysisprocess.Keywords:BISsalicylideneethylenediamineSchiffBase;Fe(Ⅱ);fluorescencespectrum;BSA;EDTA目錄中文摘要 I英文摘要 I前言 11實驗部分 11.1儀器與試劑 11.2亞鐵－雙水楊醛乙二胺西佛堿配合物（配合物1）的合成 11.3配合物1與牛血清白蛋白(BSA)相互作用熒光測定 21.3.1配合物1與BSA相互作用常溫熒光測定 21.3.2配合物1與BSA相互作用變溫熒光測定 1.3.3配合物1與BSA相互作用同步熒光測定 1.4配合物1與BSA相互作用紫外測定 21.5EDTA對配合物1-BSA復合物的相互作用的影響測定 21.5.1EDTA對配合物1-BSA復合物的作用紫外測定 1.5.2雙水楊醛乙二胺西佛堿與BSA相互作用的熒光測定 1.5.3EDTA對配合物1-BSA復合物的作用熒光測定 1.5.4Fe(edta)配合物對雙水楊醛乙二胺西佛堿-BSA復合物的作用熒光測定 1.6乙醇對配合物1-BSA復合物的作用熒光測定 31.7采用透析法對配合物1-BSA復合物的相互作用結果的測定 32結果與討論 42.1亞鐵－雙水楊醛乙二胺西佛堿配合物紅外光譜表征 42.2配合物1與BSA相互作用的熒光分析 42.2.1配合物1與BSA相互作用常溫熒光分析 42.2.2配合物1與BSA相互作用熒光猝滅方式分析 2.2.3用靜態猝滅法對配合物1與BSA的相互作用進行分析 2.2.4配合物1與BSA之間的作用力類型分析 82.2.5配合物1與BSA相互作用同步熒光分析 2.3配合物1與BSA相互作用紫外表征 92.4EDTA對配合物1-BSA復合物的相互作用的影響的分析 102.4.1EDTA對配合物1-BSA復合物的相互作用的影響的熒光分析 102.4.2EDTA對配合物1-BSA復合物的相互作用的影響的紫外分析 102.5乙醇對配合物1-BSA復合物的相互作用的影響的熒光分析 122.6配合物1與BSA相互作用模式圖 122.7采用透析法對配合物1-BSA復合物的相互作用結果的分析 132.7.1配合物1與BSA作用透析后產物紅外光譜表征2.7.2透析法對配合物1-BSA復合物的相互作用結果的分析3結論 15參考文獻 16致謝 18PAGE17前言蛋白質是生物體的重要組成部分，是生命活動的物質基礎。血清白蛋白常作為一種模型蛋白質用于生物醫用材料研究領域[1,2]，可與許多內源及外源性化合物結合起到存儲與轉運作用[3,4]，即在體內起著酸度保持、金屬離子、氨基酸、脂肪酸、藥物等的貯存、運載等重要的作用[5]，是基礎科學研究中最常用的藥物靶蛋白之一[6]。從不同角度研究以白蛋白為代表的蛋白質與具有生物活性小分子之間的相互作用，已成為一個非常活躍的研究課題[7]。牛血清白蛋白(BSA)肽鏈含有582個氨基酸殘基，在λex=280nm時，BSA的內源熒光主要來源于19個酪氨酸和2個色氨酸殘基。酪氨酸的熒光主要通過能量轉移給色氨酸而發出，2個色氨酸分別位于134位和212位，其發射峰特征、能量轉移及熒光壽命等指標可以對蛋白質分子中熒光生色基團的結構及其所處的微環境提供有效的信息[8,9]。本文利用熒光光譜法和紫外吸收光譜法研究了鐵（Ⅱ）—雙水楊醛乙二胺西佛堿配合物（配合物1）與牛血清白蛋白（BSA）相互作用的機理；利用透析法以及乙醇、EDTA為探針推測配合物與BSA相互作用模式。1實驗部分1.1儀器和試劑試劑：牛白蛋白(BSA)（生化試劑）國藥集團化學試劑有限公司水楊醛（AR）國藥集團化學試劑有限公司乙二胺（AR）廣東汕頭市西隴化工廠六水合硫酸亞鐵銨（AR）廣東汕頭市西隴化工廠EDTA（AR）國藥集團化學試劑有限公司乙醇（AR）西隴化工股份有限公司儀器：LS-55熒光分光光度計（美國PE公司）UV-2550紫外分光光度計（Shimadzu公司）1.2亞鐵-雙水楊醛乙二胺西佛堿配合物（1）的合成取乙二胺5.6mL和17mL水楊醛溶解于50mL甲醇中，在冷水浴中攪拌30min，靜置15min，減壓抽濾，用乙醇洗滌，在常溫下干燥6h，得亮黃色固體粉末，再取2.5g固體用40mL乙醇重結晶、抽濾，在常溫下干燥4h，得黃色晶體即為雙水楊醛乙二胺西佛堿。取雙水楊醛乙二胺西佛堿1.000g溶解于40mL甲醇中，再加入硫酸亞鐵銨1.000g，回流1h，冷卻，過濾，干燥，得淡粉色固體即為Fe（Ⅱ）—雙水楊醛乙二胺西佛堿配合物（配合物1）。1.3配合物1與BSA相互作用熒光測定1.3.1配合物1與BSA相互作用常溫熒光測定稱取0.048g配合物1溶解并定容于100mL容量瓶中，用HAc-NaAc緩沖溶液（pH=6.8）配制溶度為1×10-4mol/L的BSA溶液，然后于一系列10.00mL的容量瓶中加入1.00mL的BSA溶液，并加入不同體積的配合物1溶液，定容。以λ=292nm為激發波長，記錄300~450nm范圍的熒光光譜。1.3.2稱取0.048g配合物1溶解并定容于100mL容量瓶中，用HAc-NaAc緩沖溶液（pH=6.8）配制溶度為1×10-4mol/L的BSA溶液，然后于一系列10.00mL的容量瓶中加入1.00mL的BSA溶液，并加入不同體積的配合物1溶液，定容。將該系列溶液分別于25,30,35和40℃下，以λ=290nm為激發波長，記錄300~450nm范圍內的熒光光譜。1.3.3稱取0.049g配合物1溶解并定容于100mL容量瓶中，用HAc-NaAc緩沖溶液（pH=7.0）配制溶度為1×10-4mol/L的BSA溶液，然后于一系列10.00mL的容量瓶中加入1.00mL的BSA溶液，并加入不同體積的配合物1溶液，定容。以λ=292nm為激發波長，測定△λ=15nm和△λ=60nm時的同步熒光光譜。1.4配合物1與BSA相互作用紫外測定稱取0.024g配合物1溶解并定容于100mL容量瓶中，用HAc-NaAc緩沖溶液（pH=6.9）配制溶度為1×10-4mol/L的BSA溶液，然后于一系列10.00mL的容量瓶中加入1.00mL的配合物1溶液，并加入不同體積的BSA溶液，定容。以配合物1溶液為參比液，記錄200~500nm范圍內的紫外吸收光譜。1.5EDTA對配合物1-BSA復合物的相互作用的影響測定1.5.1EDTA對配合物1-稱取0.048g配合物1溶解并定容于100mL容量瓶中，稱取0.039gEDTA用HAc-NaAc緩沖溶液（pH=6.8）溶解并定容于100mL容量瓶中，用HAc-NaAc緩沖溶液（pH=6.8）配制溶度為1×10-4mol/L的BSA溶液，然后于一系列10.00mL的容量瓶中加入1.00mL的BSA溶液和3.00mL配合物1溶液，再加入不同體積的EDTA溶液，定容。以配合物1與BSA混合液為參比液，記錄200~500nm范圍內的紫外吸收光譜。1.5.2稱取0.032g雙水楊醛乙二胺西佛堿溶解并定容于100mL容量瓶中，用HAc-NaAc緩沖溶液（pH=6.8）配制溶度為1×10-4mol/L的BSA溶液，然后于一系列10.00mL的容量瓶中加入1.00mL的BSA溶液，并加入不同體積的雙水楊醛乙二胺西佛堿溶液，定容。以λ=280nm為激發波長，記錄300~450nm范圍的熒光光譜。1.5.3稱取0.048g配合物1溶解并定容于100mL容量瓶中，稱取0.039gEDTA用HAc-NaAc緩沖溶液（pH=6.8）溶解并定容于100mL容量瓶中，用HAc-NaAc緩沖溶液（pH=6.8）配制溶度為1×10-4mol/L的BSA溶液，然后于一系列10.00mL的容量瓶中加入1.00mL的BSA溶液和3.00mL配合物1溶液，再加入不同體積的EDTA溶液，定容。以λ=280nm為激發波長，記錄300~450nm范圍的熒光光譜。1.5.4稱取0.032g雙水楊醛乙二胺西佛堿溶解并定容于100mL容量瓶中，稱取0.016g六水合硫酸亞鐵銨和0.030gEDTA配制摩爾比為2:1的Fe(edta)配合物溶液，用HAc-NaAc緩沖溶液（pH=6.8）配制溶度為1×10-4mol/L的BSA溶液，然后于一系列10.00mL的容量瓶中加入1.00mL的BSA溶液和5.00mL雙水楊醛乙二胺西佛堿溶液，再加入不同體積的Fe(edta)配合物溶液，定容。以λ=280nm為激發波長，記錄300~450nm范圍的熒光光譜。1.6乙醇對配合物1-BSA復合物的作用熒光測定稱取0.049g配合物1溶解并定容于100mL容量瓶中，用HAc-NaAc緩沖溶液（pH=6.8）配制溶度為1×10-4mol/L的BSA溶液，然后于一系列10.00mL的容量瓶中加入1.00mL的BSA溶液和3.00mL配合物1溶液，再加入不同體積的乙醇溶液，定容。以λ=280nm為激發波長，記錄300~450nm范圍的熒光光譜。1.7采用透析法對配合物1-BSA復合物的相互作用影響的測定稱取0.050g配合物1和0.10gBSA，加入30mL蒸餾水溶解。用透析袋透析且每隔2天換一次水，每次換水前取1mL透析袋內的原液并稀釋25倍，以蒸餾水為參比，記錄200~500nm范圍內的紫外吸收光譜。2結果與討論2.1亞鐵－雙水楊醛乙二胺西佛堿配合物紅外光譜表征利用NicoLet360光譜儀對亞鐵－雙水楊醛乙二胺西佛堿配合物（配合物1）進行紅外光譜表征，結果如圖1所示。圖1雙水楊醛乙二胺西佛堿及配合物1紅外光譜圖a：雙水楊醛乙二胺西佛堿；b：配合物1如圖1所示，雙水楊醛乙二胺西佛堿（曲線a）及其配合物1（曲線b）。對比曲線a和曲線b，C-C振動由1498cm-1和1610cm-1移動至1491cm-1和1608cm-1，變化不明顯，說明水楊醛的基本骨架未變；C-N伸縮振動由原來的1635cm-1移動至1608cm-1，向低波數移動了27cm-1，說明N原子上的孤對電子可能與Fe(Ⅱ)發生配位作用；O-H在2500~3200cm-1出現寬而散的特征峰移動至3350cm-1左右，向高波數移動，說明O原子被Fe(Ⅱ)離子競爭走孤對電子。由此說明，Fe(Ⅱ)與雙水楊醛乙二胺西佛堿作用生成新的配合物。2.2配合物1與BSA相互作用的熒光表征2.2.1配合物1與BSA相互作用常溫熒光分析固定BSA的濃度為1×10-4mol/L，改變配合物1的濃度，并以λex＝292nm的激發波長分別激發BSA溶液及BSA與配合物1的混合溶液。然后分別記錄波長為300~450nm的熒光發射光譜，其熒光發射光譜的測定結果如圖2所示。圖2不同濃度配合物1對BSA溶液熒光光譜的影響[a~f：C[配合物1]/(×10-4mol/L)0，1.1，3.3，5.5，7.7，9.9]當激發波長為292nm時，配合物1在300~450nm范圍內無熒光發射，而BSA由于其本身的色氨酸殘基和絡氨酸殘基而產生內源熒光[10]。因此，固定BSA的濃度不變，依次加入不同濃度配合物1，隨著配合物濃度的逐漸增加，BSA在350nm附近的熒光發射峰強度有規律的減弱，其結果如圖2所示，該特征的出現初步表明配合物1與BSA發生了一定程度的作用。2.2.2熒光猝滅是猝滅劑與熒光體激發態分子之間的相互作用的結果，猝滅過程通常有動態和靜態猝滅之分，它們均遵從Stern-Volmer方程：F0/F=1+kqτ0CQ=1+ksvCQ式中，F0和F分別為未加入猝滅劑時BSA的相對熒光強度；kq為雙分子猝滅過程的速率常數；τ0為無猝滅劑存在時熒光分子的平均壽命，通常取值10-8s[11]；ksv為Stern-Volmer猝滅常數，是雙分子猝滅速率常數與單分子衰變速率常數的比率；CQ為猝滅劑的摩爾濃度[12,13]。而區分動態猝滅與靜態猝滅的主要依據之一是：動態猝滅主要依賴于分子的擴散，增加溫度導致擴散速度加快，猝滅常數將隨著溫度的升高而增大；而靜態催滅，溫度升高，將導致配合物的穩定性降低，靜態猝滅常數的值將隨著溫度的升高而減小。因此，根據Stern-Volmer方程，取BSA與配合物1的混合體系在不同溫度時熒光發射光譜的350nm處的相對熒光強度為F，以（F0/F-1）與所加入的配合物1濃度c0作圖，得到牛血清蛋白的Stern-Volmer猝滅曲線，其結果如圖3所示；由Stern-Volmer方程求的猝滅速率常數如表1所示。圖3配合物1-BSA在不同溫度時Stern-Volmer曲線表1配合物1-BSA在不同溫度的Stern-Volmer常數T/KKsv/(L·mol-1)Kq/(L·mol-1·s-1)R22982.32×1042.32×10120.9963032.30×1042.30×10120.9973082.23×1042.23×10120.9983132.13×1042.13×10120.995由圖3可以看出，在不同溫度時，配合物1-BSA體系的Stern-Volmer曲線基本上都具有較好的線性關系；而且隨著溫度的升高，Stern-Volmer常數逐漸減小，該現象說明配合物1對BSA的熒光猝滅過程為靜態猝滅。另外，由于各類猝滅劑對生物大分子的最大動態猝滅常數為2.0×1010L·mol-1·s-1[14]，而配合物1對BSA的熒光猝滅常數Kq約為2.24×1012L·mol-1·s-1，遠大于雙分子間最大動態猝滅常數，該結果也進一步說明配合物1對牛血清蛋白的猝滅過程為靜態猝滅。2.2.3在靜態猝滅過程中，熒光物質與猝滅劑分子間的結合常數可根據熒光強度與猝滅劑濃度的關系求出。設蛋白質大分子有n個相同并且相互獨立的結合位置，則有：lg(F0/F-1)=lgK+nlgcQ其中F0為未加入猝滅劑時BSA的熒光強度；F為加入猝滅劑后BSA的熒光強度；K為熒光體-猝滅劑的結合常數，c0為配合物的濃度[15]。在不同溫度下，將BSA與配合物1的混合體系的熒光發射光譜曲線的350nm處的F0及F代入上式，得到lg(F0/F-1)與lgc0的關系圖（如圖4），即求出在不同溫度下的配合物1與BSA得結合常數K，相關系數R2以及結合位點數n，如表2。圖4lg(F0/F-1)與lgc的關系曲線表2配合物1與BSA的結合常數k，R2及結合位點數nT/K方程k/(L·mol-1)R2n298lg(F0/F-1)=5.82+1.34x6.61×1050.9991.34303lg(F0/F-1)=5.68+1.31x4.79×1050.9991.31308lg(F0/F-1)=5.24+1.21x1.74×1050.9991.21313lg(F0/F-1)=5.19+1.20x1.55×1050.9981.20如表2所示，配合物1與BSA相互作用的結合常數K和結合位點數n（平均值為1.26）均隨著溫度的升高而逐漸降低，該結果表明一個配合物1分子與BSA分子中的一個位點進行相互作用，它們之間的結合常數K的平均值為3.67×105L·mol-1。而結合常數K的大小反映了配合物與BSA相互作用的難易程度，初步分析表明：當配合物1與BSA相互作用時，該配合物的空間構位或位阻對結合常數的大小有一定程度的影響。2.2.4配合物1與BSA之間的作用力類型分析有機小分子和蛋白質等大分子之間主要是通過分子間的氫鍵，范德華力，靜電引力等分子間作用力進行相互作用，這些分子間的作用力在發生相互作用時，反應前后體系的熱力學參數會發生一定程度的變化。因此，可以通過測定體系的熱力學參數的變化來判斷小分子與蛋白質分子鏈之間的主要作用力的類型[16]。表3的△H，△S以及△G的計算值是分別通過以下3個方程計算所得（其中由于溫度變化不大，體系的焓變看成一個常數）。lnk=-△rHm?/(RT)+C△G=-RTlnk△G=△H-T△SRoss[16]與Mohammed[17]等根據大量的實驗結果總結出判斷生物大分子與小分子結合性質的熱力學規律，即：△S＞0可能是疏水和靜電作用力；△S＜0可能為氫鍵和范德華力；△H＞0，△S＞0為典型的疏水作用力；△H≈0或者較小，△S＞0為靜電作用力；△H＜0，△S＜0為氫鍵和范德華力。表3配合物1與BSA相互作用時的熱力學參數的計算T/KK/(L·mol-1)△H/(kJ·mol-1)△S/(J·K-1)△G/(kJ·mol-1)2986.61×105-83.28-168.04-33.203034.79×105-83.28-166.10-32.953081.74×105-83.28-170.07-30.903131.55×105-83.28-166.71-31.10從表3數據中可以看出：配合物1與BSA間相互作用時，體系的△H＜0，△S＜0，該結果表明配合物1與BSA間相互作用時的主要作用力是氫鍵和范德華力。2.2.5固定激發波長和發射波長的間距△λ，同步掃描激發和發射單色器可得同步熒光光譜，這種光譜已被用于蛋白質構象變化的分析[18-20]。而蛋白質的熒光主要來于色氨酸、絡氨酸，所以一般通過對色氨酸或者絡氨酸的同步熒光的測定，探討色氨酸或絡氨酸的構象或周圍環境是否發生變化[21]。圖3分別為△λ=15nm與△λ=60nm時，配合物1與BSA相互作用時的同步熒光的測定結果。圖5配合物1與BSA相互作用時的同步熒光光譜A：△λ=15nm；B：△λ=60nm[a~f：C[配合物1]/(×10-4mol/L)：0，1.1，3.3，5.5，7.7，9.9]保持BSA的濃度為1×10-4mol/L不變，逐漸增加配合物1的濃度，隨著配合物濃度的增加，體系在292nm附近的同步熒光光譜強度均逐漸降低；在△λ=60nm的同步光譜中其最大發射波長有一定的紅移，在△λ=15nm的同步熒光光譜中，其最大發射波長沒有明顯變化。該結果表明配合物1與BSA相互作用時，主要通過改變牛血清蛋白中的絡氨酸殘基的構象或周圍環境，而對色氨酸殘基的構象或其周圍環境沒有明顯的影響。2.3配合物1與BSA相互作用紫外表征固定配合物1的濃度為5.7×10-4mol/L，改變BSA的濃度，并以配合物1為參比液，測定配合物1與BSA的混合溶液。然后分別記錄波長為240~400nm的紫外吸收光譜，其紫外吸收光譜的測定結果如圖6所示。圖6不同濃度BSA對配合物1溶液紫外光譜的影響[a~e：C[BSA]/(×10-5mol/L)1.0，2.0，3.0，4.0，5.0]配合物1在250~320nm范圍內基本不發生紫外吸收。由圖6可見，BSA在280nm處有一強吸收峰，是其肽鏈上的色氨酸和絡氨酸的苯雜環π-π*躍遷引起的[6]。隨著BSA濃度增大，在280nm的吸收峰逐漸增強，且峰位由280nm藍移到278nm，說明配合物1與BSA發生作用。2.4EDTA對配合物1-BSA復合物的相互作用的影響分析2.4.1EDTA對配合物1-BSA復合物的相互作用的影響紫外分析配合物1-BSA復合物加入EDTA后紫外吸收光譜如圖7所示。圖7不同濃度EDTA對配合物1-BSA復合物的相互作用的影響紫外光譜圖[a~e:C[EDTA]/(×10-5mol/L)1.4，4.2，5.6，8.4，42.0]EDTA在波長為200~300nm基本不發生紫外吸收。圖7可見在260nm左右有強吸收峰且峰發生藍移現象，表明EDTA對配合物1-BSA復合物的相互作用有影響。2.4.2有機小分子和蛋白質等生物大分子之間主要通過分子間的氫鍵，范德華力，靜電引力等分子間作用力進行相互作用。由2.2.4可知，配合物1與BSA之間是通過分子間氫鍵和范德華力進行相互作用，當加入其他的物質時會與BSA或配合物1相互作用，從而導致熒光強度發生變化。如圖8~10分別為雙水楊醛乙二胺西佛堿與BSA作用熒光光譜圖，Fe(edta)配合物對雙水楊醛乙二胺西佛堿-BSA影響熒光光譜圖和EDTA對配合物1-BSA復合物的相互影響的熒光光譜圖圖8雙水楊醛乙二胺西佛堿與BSA作用熒光光譜圖圖9Fe(edta)配合物對雙水楊醛乙二胺西佛堿-BSA影響熒光光譜圖圖10EDTA對配合物1-BSA復合物的相互影響的熒光光譜圖當激發波長為280nm時，雙水楊醛乙二胺西佛堿，配合物1與EDTA在300~450nm基本不發生熒光發射。由Stern-Volmer方程可得，圖8和9猝滅常數分別為1.18×1011L·mol-1·s-1，3.30×1011L·mol-1·s-1。由2.2.1可知，配合物1對BSA的猝滅常數為2.37×1011L·mol-1·s-1。由此得：雙水楊醛乙二胺西佛堿對BSA猝滅常數與Fe(edta)配合物對雙水楊醛乙二胺西佛堿-BSA猝滅常數合為4.48×1011＞2.37×1011L·mol-1·s-1，因此可知EDTA對配合物1-BSA復合物起到進一步的猝滅作用，所以隨著加入EDTA溶度的增大熒光強度逐漸減弱，如圖10所示。2.5乙醇對配合物1與牛血清蛋白體系作用熒光分析固定牛血清蛋白的濃度為1×10-4mol/L和配合物1的濃度3.6×10-4mol/L，改變乙醇的濃度，并以λ=280nm的激發波長分別激發BSA-配合物1溶液及BSA-配合物1與EDTA的混合溶液。然后分別記錄波長為300~450nm的熒光發射光譜，其熒光發射光譜的測定結果如圖11所示。圖11不同濃度乙醇對配合物1-BSA復合物的影響熒光光譜圖當激發波長為280nm時，乙醇在300~450nm范圍內無熒光發射，而BSA由于其本身的色氨酸殘基和絡氨酸殘基而產生內源熒光[10]。因此，固定BSA的濃度不變，依次加入不同濃度乙醇，隨著溶劑極性的降低，BSA在350nm附近有強的熒光發射峰但是規律不明顯，其結果如圖11所示。該特征表明溶劑的極性對配合物1-BSA復合物的相互作用基本沒有影響。2.6配合物1與BSA相互作用模式圖圖12配合物1與BSA相互作用模式圖2.7采用透析法對配合物1-BSA復合物的相互作用結果的分析2.7.1利用NicoLet360光譜儀對配合物1及配合物1-BSA透析產物進行紅外光譜表征，結果如圖12所示。圖13配合物1及配合物1-BSA透析產物紅外光譜圖a：配合物1；b：配合物1-BSA透析后析出的產物圖14牛血清白蛋白紅外光譜圖如圖13、14所示，配合物1（曲線a）、配合物1-BSA透析產物（曲線b）和牛血清白蛋白曲線。由曲線a和牛血清白蛋白與曲線b對比可知，曲線b在755.96cm-1，1245.79cm-1和1608.34cm-1處均沒有強的吸收峰，兩圖的紅外特征說明配合物1-BSA復合物出先與配合物1和BSA不同的結構，據此推測配合物1-BSA經透析后可能生成新的物質。2.7.用透析袋透析且每隔2天換一次水，每次換水前取1mL透析袋內的原液并稀釋25倍，以蒸餾水為參比，記錄200~500nm范圍內的紫外吸收光譜，其紫外吸收光譜測定結果如圖15所示。圖15不同時間配合物1-BSA復合物透析紫外吸收光譜圖圖15可看出，隨著透析天數延長，配合物1-BSA復合物溶液的紫外吸收逐漸增強，透析至9天后紫外吸收趨于穩定。結合2.7.1紅外光譜圖初步推測：配合物1-BSA復合物在透析中紫外吸收不斷3結論本文合成和表征鐵（Ⅱ）-雙水楊醛乙二胺西佛堿配合物，配合物1對BSA熒光猝滅為靜態猝滅過程；它們兩者之間主要通過范德華力或分子間氫鍵的作用力形式，通過改變BSA中絡氨酸殘基的構象進行相互作用，其結合常數的平均值為3.67×105L·mol-1。對配合物1與BSA相互作用時作用模式的探討。采用透析法研究表明配合物1-BSA復合物在透析過程中可能生成新物質。參考文獻[1]鄭彩虹,梁文權,虞和永.海藻酸-殼聚糖-聚乳酸羥乙醇酸復合微球的制備及其對蛋白釋放的調節[J].藥學學報,2005,40(2):182-186[2]ChaudhuriD,HorrocksWDJr,AmburgeyJG,etal.CharacterizationoflanthanideionbindingtotheEF-handproteinS100betabyluminescencespectroscopy[J].Biochem,1997,36(32):9674-80[3]馮小強,李小芳,楊聲,等.O-羧甲基殼聚糖稀土配合物的制備及與牛血清白蛋白的作用[J].分析試驗室,2010,11(29):5-8[4]魏永巨,李克安,童沈陽.溴甲酚綠與血清白蛋白的結合反應[J].分析化學,1996,24(4):387-391[5]李慧卿,趙亞琴,楊斌盛.TNS與牛血清白蛋白相互作用的熒光光譜研究[J].光譜實驗室,2007,1(24):1-5[6]玄光善,吳效楠,李玉平.熒光光譜法研究乙酰水楊醛和牛血清蛋白的相互作用[J].光譜實驗室,2005,22(7):861-864[7]黃波,鄒國林,楊天鳴.阿霉素與牛血清白蛋白結合作用研究[J].化學學報,2002,60(10):1867-1871[8]王峰,黃薇,唐波,等.蒂巴因與牛血清白蛋白的相互作用[J].分析化學,2006,34(S1):239-242[9]譚韜,黃銳,夏之寧.改進熒光光譜法研究藥物與血清白蛋白的相互作用[J].分析化學,2007,35(10):1415-1420[10]BrusteinEA,VedenkinaNS,IrkovaMN.FluorescenceandtheLocationofTryptophanResidesinProteinM