生物化學Biochemistry山東大學醫學院生物化學與分子生物學系田克立Spring20141.小分子

H2O（＞50%）

metalirons:Na+,K+,Cl-,Ca2+,P-….traceelement:Fe2+,Zn2+,Mg2+…..carbohydrates(糖類)lipids(脂類)aminoacids(氨基酸)vitamins(維生素類)andothers2.生物大分子proteins（蛋白質）(enzyme，酶)nucleicacids（核酸):DNAandRNApolysaccharides(多糖)glycoproteins(糖蛋白,糖+蛋白質)proteoglycan(蛋白聚糖)lipoproteins(脂蛋白,脂+蛋白質)nucleoproteins(核蛋白,核酸+蛋白質)構成生物體的生物分子蛋白質的結構與功能第一章StructureandFunctionofProteins

蛋白質(protein)是由許多氨基酸(aminoacids)通過肽鍵相連形成的高分子含氮化合物。

蛋白質是生物體重要組成成分：分布廣，含量高：蛋白質是細胞內最豐富的有機分子，占人體干重的45％，某些組織含量更高，例如脾、肺及橫紋肌等高達80％。

蛋白質具有重要的生物學功能作為生物催化劑（酶），代謝調節作用，免疫保護作用，凝血抗凝血，物質的轉運和存儲，運動與支持作用，參與細胞間信息傳遞，氧化供能等。第一節蛋白質的分子組成

蛋白質的元素組成

C(50~55%),H(6~7%),O(19~24%),N(13~19%),S(0~4%),P,metalelements,Ⅰ…蛋白質元素組成的特點*各種蛋白質的含氮量很接近，平均為16％。*體內的含氮物質主要為蛋白質，測定生物樣品中的含氮量，根據以下公式可推算出蛋白質的大致含量：

100克樣品中蛋白質的含量(g%)=每克樣品含氮克數×6.25×100

一.蛋白質的分子組成

——

氨基酸（aminoacids）是組成蛋白質的基本單位

存在自然界中的氨基酸有300余種，但組成人體蛋白質的氨基酸僅有20種，且均屬L-α-氨基酸（甘氨酸除外）。其他重要的氨基酸(如鳥氨酸,瓜氨酸,β-丙氨酸等)αName,Three-letterSymbol,andOne-letterSymbol丙氨酸精氨酸天冬酰胺天冬氨酸半胱氨酸谷氨酰胺谷氨酸甘氨酸組氨酸亮氨酸異亮氨酸賴氨酸蛋氨酸苯丙氨酸脯氨酸絲氨酸蘇氨酸色氨酸酪氨酸纈氨酸根據R側鏈基團的結構和性質不同：非極性脂肪族(疏水性)氨基酸極性中性氨基酸芳香族氨基酸酸性氨基酸堿性氨基酸二.氨基酸的分類(Classificationofaminoacids)(1)側鏈含烴鏈的非極性\疏水性脂肪族氨基酸非極性氨基酸R基團間可形成疏水作用力

(2)極性中性氨基酸(3)芳香族氨基酸——側鏈含芳香基團TrpTyr可吸收紫外光，最大吸收峰280nmHydrogenbonds氫鍵一些功能基團如–OH,-SH,-NH3+,H2O等之間可形成氫鍵(4)酸性極性氨基酸R基團帶負電荷（pH7.2）

(5)堿性極性氨基酸R基團帶正電荷（pH7.2）

帶相反電荷的氨基酸R側鏈基團之間的相互作用Ionicbonds(saltbonds)離子鍵（鹽鍵）

幾種特殊氨基酸

脯氨酸

Proline（亞氨基酸）-S-S-二硫鍵

半胱氨酸,

胱氨酸Disulfidebond胰島素(Insulin)依賴二硫鍵維持結構穩定性二硫鍵(Disulfidebond)

維持蛋白質結構穩定蘇氨酸絲氨酸酪氨酸-OH基的H可被其它化學基團，如磷酸基P取代.

其他分類方式側鏈含羥基的氨基酸蛋氨酸半胱氨酸含硫氨基酸胱氨酸α–NH2andα–COOH可解離：

–

COOH→COO-+H+

–NH2

+H+→NH3+R基團含可解離基團:

酸性和堿性AAs

氨基酸是兩性電解質，其解離程度取決于所處溶液的酸堿度(pH).α

三.氨基酸的理化性質(Propertiesofaminoacids)1.氨基酸具有兩性解離的性質pH=pI+OH-pH>pI+H++OH-+H+pH<pI氨基酸的兼性離子陽離子陰離子

等電點(isoelectricpoint,pI)

在某一pH的溶液中，氨基酸解離成陽離子和陰離子的趨勢及程度相等，成為兼性離子，分子所帶的凈電荷為零,

呈電中性。此時溶液的pH值稱為該氨基酸的等電點。pI=?(pK1+pK2)寫出電離式,取兼性離子兩邊的pK值的平均值2.紫外吸收

色氨酸、酪氨酸的最大吸收峰在280nm附近。大多數蛋白質含有這兩種氨基酸殘基，所以測定蛋白質溶液280nm的光吸收值是分析溶液中蛋白質含量的快速簡便的方法。3.茚三酮反應*肽鍵(peptidebond)是由一個氨基酸的-羧基與另一個氨基酸的-氨基脫水縮合而形成的化學鍵。四.蛋白質是由許多氨基酸殘基組成的多肽鏈（一）氨基酸通過肽鍵連接形成肽(peptide)peptidebondoramidebond(酰胺鍵)

+-HOH甘氨酰甘氨酸肽鍵Peptide肽殘基多肽鏈*肽是由氨基酸通過肽鍵縮合而形成的化合物。羧基末端C末端氨基末端N末端Backboneormain-chain主鏈骨架Side-chain側鏈

COO-CH2

CH2NH3+CH2CH2CH2Peptide肽

Dipeptide(二肽):twoAAresidues（2個AA殘基）

Tripeptide(三肽):threeAAresidues

Oligopeptide(寡肽):fewerthan10AAresidues

Polypeptide(多肽):fewerthan50AAresiduesProtein(蛋白質):morethan50AAresidues

Gly-Ala,Ala-Gly

Gly-Ala-Lys,Gly-Lys-Ala,Ala-Gly-Lys,Ala-Lys-Gly,Lys-Ala-Gly,Lys-Gly-Ala,

(1x2x3x4x5………xn)肽有多種形式20種氨基酸可排列組合形成種類繁多的蛋白質N末端C末端牛核糖核酸酶（二）重要生物活性肽1.谷胱甘肽(glutathione,GSH)

三肽

功能基團：-SHGSH過氧化物酶H2O22GSH

2H2OGSSG

GSH還原酶NADPH+H+NADP+Antioxidant2GSH+H2O2

→

GSSG+2H2OGSSH+NADPH+H+→2GSH+NADP

FunctionsofGSH

體內許多激素屬寡肽或多肽

神經肽2.多肽類激素及神經肽高級結構或空間構象(conformation)

第二節蛋白質的分子結構

StructureofProteins一級結構(primarystructure)二級結構(secondarystructure)三級結構(tertiarystructure)四級結構(quaternarystructure)一.蛋白質的一級結構(Primarystructureofprotein)

從N端至C端以肽鍵相連的氨基酸排列順序，包括二硫鍵的位置。

主要的化學鍵：肽鍵，有些蛋白質還包括二硫鍵。

翻譯轉錄蛋白質的氨基酸序列是由基因序列決定的一級結構是蛋白質空間構象和特異生物學功能的基礎R側鏈基團的相互作用二.蛋白質的二級結構(Secondarystructure)

蛋白質分子中某一段肽鏈的局部空間結構，即該段肽鏈主鏈骨架原子的相對空間位置，并不涉及氨基酸殘基側鏈的構象。主要化學鍵：氫鍵主鏈骨架

肽鍵特性

（一）

肽單元（平面）Peptideunit(plane)肽單元參與肽鍵的6個原子C1、C、O、N、H、C2位于同一平面，C1和C2在平面上所處的位置為反式(trans)構型，此同一平面上的6個原子構成了肽單元

(peptideunit)

。

與C1和C2連接的單鍵可自由旋轉，旋轉角度決定相鄰肽單元平面的相對空間位置，從而形成不同的二級結構形式。蛋白質二級結構的主要形式

-螺旋(-helix)

-折疊(-pleatedsheet)

-轉角(-turn)

無規卷曲(randomcoil)

(二)-螺旋

α-helixright-handhelixleft-handhelix

主鏈骨架形成右手螺旋

每3.6個氨基酸殘基螺旋上升一圈螺距0.54nmR側鏈伸向螺旋外側ModelofRight-HandedAlpha-HelixShowingH-Bondingα－螺旋結構

多肽鏈的主鏈圍繞中心軸有規律的螺旋式上升,螺旋走向為順時鐘,即右手螺旋;

氨基酸側鏈(R)伸向螺旋外側。每3.6個氨基酸殘基螺旋上升一圈,螺距為0.54nm;每個肽鍵的N－H和其氨基端第四個肽鍵的羰基氧(O=C)形成氫鍵,氫鍵的方向與螺旋長軸基本平行。肽鏈中的全部肽鍵都可形成氫鍵,以穩固α－螺旋結構。肌紅蛋白和血紅蛋白分子中有許多肽鏈段落呈α-螺旋結構。毛發的角蛋白、肌肉的肌球蛋白以及血凝塊中的纖維蛋白,它們的多肽鏈幾乎全長都卷曲成α－螺旋。雙性α－螺旋（三）-折疊（β-pleatedsheet）兩條以上多肽鏈構成，多肽鏈充分伸展,每個肽單元以Cα為旋轉點,依次折疊如扇面狀；通過肽鏈間的肽鍵羰基氧(O=C)和亞氨基氫形成氫鍵從而穩固β－折疊結構。

氨基酸殘基側鏈(R)交替位于折疊片層上下方

平行肽鏈走向有平行與反平行兩種方式。β-折疊兩條以上多肽鏈構成，多肽鏈充分伸展,每個肽單元以Cα為旋轉點,依次折疊如扇面狀；氨基酸殘基側鏈(R)交替位于折疊片層上下方；平行肽鏈走向有平行與反平行兩種方式。通過肽鏈間的肽鍵羰基氧(O=C)和亞氨基氫形成氫鍵從而穩固β－折疊結構。蠶絲蛋白幾乎都是β－折疊結構,許多蛋白質既有α-螺旋又有β－折疊。（四）-轉角(β－turn)和無規卷曲(randomcoil)無規卷曲是用來闡述沒有確定規律性的那部分肽鏈結構。*β－轉角常發生于肽鏈進行180°回折時的轉角上。*β一轉角通常由4個氨基酸殘基組成,其第一個殘基的羰基氧(O=C)與第四個殘基的氨基氫(H)可形成氫鍵。*β－轉角的第二個殘基常為脯氨酸,其他常見殘基有甘氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺和色氨酸。

在許多蛋白質分子中，可發現二個或二個以上具有二級結構的肽段，在空間上相互接近，形成一個有規則的二級結構組合，被稱為超二級結構(super-secondarystructures)。包括：αα，β

αβ

，β

β等。

模體(motif)

是具有特殊功能的超二級結構。（五）模體

(motif)Motif(模體)

在許多蛋白質分子中，可發現二個或三個具有二級結構的肽段，在空間上相互接近，形成一個特殊的空間構象，發揮特殊功能，被稱為模體(motif)。

一個模體有其特征性的氨基酸序列.常見模體motif：

αhelix－βturn(orloop)–αhelix

β-α-βChain-βturn–chainChain-βturn–αhelix-βturn–chain等鈣結合蛋白中結合鈣離子的模體

鋅指結構

有些模體也可僅由幾個氨基酸殘基（而非超二級結構）組成。e.g.RGD(Arg-Gly-Asp)motif（六）氨基酸殘基的側鏈對二級結構形成的影響蛋白質二級結構是以一級結構為基礎的。一段肽鏈其氨基酸殘基的側鏈適合形成-螺旋或β-折疊，它就會出現相應的二級結構。三、蛋白質的三級結構（Tertiarystructure）

整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對空間位置。即肽鏈中所有原子在三維空間的排布位置。主要的化學鍵:疏水作用、鹽鍵、氫鍵和VanderWaals力等.N端C端

結構域（Domain

）

分子量較大的蛋白質三級結構中常可折疊成多個結構較為緊密的區域，并各行使其功能，稱為結構域。球狀蛋白質的獨立折疊單位，有較獨立的三維結構。如：脂肪酸合酶有些蛋白質分子含有二條或多條多肽鏈，每一條多肽鏈都有完整的三級結構，稱為蛋白質的亞基(subunit)。蛋白質分子中各亞基的空間排布及亞基接觸部位的布局和相互作用，稱為蛋白質的四級結構。含有四級結構的蛋白質,單獨的亞基一般沒有生物學功能,只有完整的四級結構寡聚體才有生物學功能。亞基之間的結合力主要是氫鍵和離子鍵。四.蛋白質的四級結構（Quaternarystructure）血紅蛋白的四級結構

（一）一級結構是空間構象的基礎一、蛋白質一級結構是高級結構與功能的基礎牛核糖核酸酶的一級結構二硫鍵第三節蛋白質結構與功能的關系1peptidechain:124AAs4Disulfidebonds

天然狀態，有催化活性

尿素、β-巰基乙醇

去除尿素、β-巰基乙醇非折疊狀態，無活性一級結構是蛋白質空間構象和特異生物學功能的基礎。但不是決定蛋白質空間構象的唯一因素。多數多肽鏈的正確折疊和成熟不能自發完成，需要分子伴侶的參與。(二)一級結構相似的蛋白質具有相似的高級結構和功能胰島素氨基酸殘基序號A5A6A10A30人ThrSerIleThr豬ThrSerIleAla狗ThrSerIleAla兔ThrGlyIleSer牛AlaGlyValAla羊AlaSerValAla馬ThrSerIleAlaHomology(同源性)：由同一基因進化而來的一類蛋白質。大猩猩長臂猿獼猴鼠(三)氨基酸序列提供重要的生物進化信息關鍵氨基酸改變基因突變蛋白質結構功能改變導致分子?。ㄋ模┑鞍踪|關鍵氨基酸序列改變可引起疾病鐮刀形紅細胞性貧血N-val·his·leu·thr·pro·glu·glu·····C(146)HbSβ肽鏈HbAβ肽鏈N-val·his·leu·thr·pro·val

·glu·····C(146)

這種由蛋白質分子發生變異所導致的疾病，稱為“分子病”。僅此一個氨基酸之差,使水溶性的血紅蛋白，聚集成絲，相互粘著，紅細胞變形成為鐮刀狀而極易破碎，產生貧血。Sickle-cellanemia鐮刀型紅細胞貧血這種由蛋白質分子發生變異所導致的疾病，稱為“分子病”Crescent-shapederythrocytes(lackofblood)（一）肌紅蛋白亞基與血紅蛋白結構相似

二.蛋白質的功能依賴特定空間結構球狀蛋白；含血紅素輔基；均可結合氧Myoglobin(Mb)肌紅蛋白

單肽鏈,具有三級結構HisF8Hemoglobin(Hb)血紅蛋白4個亞基組成,α2β2(adult)，含4個血紅素輔基

具有四級結構四個亞基之間形成8個鹽鍵Hb與Mb一樣能可逆地與O2結合，Hb與O2結合后稱為氧合Hb。氧合Hb占總Hb的百分數（稱百分飽和度）隨O2濃度變化而改變。（二）血紅蛋白亞基構象變化可影響亞基與氧結合Hb與O2結合機制MbHb++O2O2MbO2HbO2O2-飽和度[HbO2][Hb]X100%Mb與Hb的O2飽和曲線Mb:對O2親和力高，直角雙曲線

Hb:對O2親和力低，

S形曲線肌紅蛋白(Mb)和血紅蛋白(Hb)的氧解離曲線

Hb緊張態(Tstate):4個亞基緊密結合，對O2親和力低；Hb松弛態(Rstate)：一個亞基結合O2后，鹽鍵斷裂，可明顯改變Hb其它亞基對O2的親和力。別構效應(Allostericeffect)

配體分子(O2)與蛋白質(Hb亞基)結合后,蛋白質空間構象發生變化,從而引起功能的變化，稱為別構效應。

別構效應劑:小分子，如，O2Cooperativity(協同效應)一個寡聚體蛋白質的一個亞基與其配體結合后，能影響此寡聚體中另一個亞基與配體結合能力的現象，稱為協同效應。如果是促進作用則稱為正協同效應(positivecooperativity)如果是抑制作用則稱為負協同效應(negativecooperativity)Hb

and

MbHb：4亞基，四級結構Mb：1亞基，三級結構Hb:運輸O2Mb:儲存O2

空間結構Hb：正協同效應Mb：無協同效應O2

結合特性

功能（三）蛋白質構象改變與疾病蛋白質構象疾病（折疊?。喝舻鞍踪|的折疊發生錯誤，盡管其一級結構不變，但蛋白質的構象發生改變，仍可影響其功能，嚴重時可導致疾病發生。蛋白質的錯誤折疊可造成致命后果蛋白質構象改變導致疾病的機理：有些蛋白質錯誤折疊后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉樣纖維沉淀，產生毒性而致病，表現為蛋白質淀粉樣纖維沉淀的病理改變。已發現20多種蛋白，包括Prion蛋白、Aβ等可形成與疾病有關的淀粉樣沉淀。多種疾病與蛋白質的錯誤折疊相關,神經退行性疾病如阿爾茨海默病(AD),帕金森病(PD),亨廷頓舞蹈病(HD),朊蛋白病(priondisease),家族性肌萎縮側索硬化癥(ALS)等均與錯誤折疊的蛋白質聚集并形成淀粉樣纖維沉淀或斑塊有關。是由朊病毒蛋白(prionprotein,PrP)引起的一組人和動物神經退行性病變。表現為進行性癡呆、小腦共濟失調、肌肉控制減弱、精神敏銳度下降、健忘和失眠等。又稱海綿狀腦病。具有傳染性、遺傳性或散在發病的特點。動物間的傳播是由朊病毒蛋白（Prionprotein,PrP）組成的傳染性顆粒（不含核酸）完成的，是一種蛋白質感染因子。朊蛋白病(priondisease)Prion蛋白研究揭示生物信息可直接在蛋白質間傳遞，改變了生物信息傳遞的傳統觀點。CJD:Creutzfeld-Jakobdisease學名：克羅伊茨費爾德—雅各布氏癥簡稱克-雅氏癥（人紋狀體脊髓變性病CJD）俗名：瘋牛病臨床癥狀：出現進行性癡呆或神經錯亂，視覺模糊，平衡障礙，肌肉收縮等。神經病理檢查：病人的腦神經組織發生海綿狀變性

病羊(羊瘙癢癥)神經組織的海綿狀損傷圖片來自http://vCJD病人大腦組織切片，左：海綿狀病變及周圍的沉淀斑，右：淀粉樣蛋白沉淀。引自StanleyB.Prusiner1997CJD的傳播方式主要方式為家族遺傳另外還可以傳染：①手術時接觸受朊病毒污染的器械②食用被瘋牛病污染了的牛肉或牛骨髓③移植攜帶CJD的器官卡里頓·加德賽克美國國立衛生研究院病毒和神經研究室主任，因發現神經性傳染性疾病的新病因和傳播新機制而獲得1976年諾貝爾醫學/生理學獎。

加德賽克在新幾內亞島發現了一種奇怪的疾病，當地的土著人稱之為“kuru”。由于找不到病因，被當地人稱為“終極巫術”。

Kuru在當地的含義是顫抖，因某種未知的寒冷或恐懼而顫抖。一旦Kuru的顫抖開始，就不可逆轉，詛咒會越來越烈，直至死亡為止。Kuru的詛咒非常殘酷：先是不可抑制的顫抖，然后喪失行走能力及無法言語，接著癱瘓。但中了巫術的人至死心智都很清醒，不會陷入昏睡狀態，因此格外痛苦。

經過加德賽克對死者腦部的解剖和進一步研究，在大腦的特定區域會檢查出細微的小孔，使腦組織看起來像一塊海綿。很快就將其與CJD聯系起來。但是CJD曾經一度被認為是一種遺傳病，它是否含有傳染性物質呢？

1968年，加德賽克將死于CJD病人的腦組織提取物注射到正常的實驗動物身上，該動物也會死于與kuru或CJD相似的癥狀。明顯地，這種提取物含有遺傳物質，在當時被推測為某種病毒。史坦利·布魯希納

美國加州大學舊金山分校教授。因其發現了朊病毒,并在其致病機理的研究方面做出了杰出貢獻，而獲得1997年諾貝爾生理醫學獎

朊病毒（Prion):不含核酸，完全由蛋白質構成的病毒。最初推測朊病毒是像普通病毒一樣的微粒，只是缺乏核酸。但是實際與預期的相反，朊病毒很快被證明可由細胞自身染色體的基因編碼。這個基因稱為PRNP，該基因位于人第20號染色體的短臂，小鼠第2號染色體。它可以表達于正常的腦組織并且編碼一種命名為PrPc的蛋白質，存在于神經細胞的表面，對蛋白酶和高溫敏感。PrPc精確的功能至今仍不清楚。但是這種蛋白質的變異形式目前在人腦中發現，這就是CJD。

具有致病作用的是PrPSc蛋白（scrapie-associatedprionprotein），是一種結構變異的蛋白質，對高溫和蛋白酶均具有較強的抵抗力,具有感染性。它能轉變細胞內的此類正常的蛋白PrPC，使PrPC發生結構變異，變為具有致病作用的PrPSc。因此是一種蛋白質感染因子。Prion的結構模型，左PrPc，右PrPSc

圖片來自http://

PrPSc與PrPc的一級結構相似，均由253-4個氨基酸組成，但PrPc的高級結構中只有極少的β折疊（＜3%），而PrPsc則具有45%的β折疊。動物被感染后，發生錯誤折疊的PrPSc蛋白堆積在腦組織中，形成不溶的淀粉樣蛋白沉淀，無法被蛋白酶水解，引起神經細胞凋亡（Apoptosis），PrPc與PrPSc的比較PrPcPrPSc分子狀態單體分子集合成纖維狀態溶解性可溶不溶對蛋白酶抗性弱，極易被破壞很強蛋白質穩定性穩定不穩定蛋白質三級結構幾乎全部由α-螺旋組成大約45%為β-折疊片層致病性正常致病第四節蛋白質的理化性質NH3+COOHNH3+COO-NH2COO-

+H++OH-

pI<pIpH=pIpH>pI一.蛋白質具有兩性電離性質

帶正電荷中性帶負電荷

體內大多數蛋白質的pI值為5.0左右，在體液中帶負電荷

Isoelectricpoint(pI)等電點在某一pH溶液中，蛋白質解離成正、負離子的趨勢相等，即成為兼性離子，凈電荷為零，此時溶液的pH稱為蛋白質的等電點。pH<pI：蛋白質帶正電荷

pH>pI：蛋白質帶負電荷

二.蛋白質的膠體性質

生物大分子

--MW:10,000～million--diameter:1～100nm蛋白質膠體穩定的因素顆粒表面電荷水化膜+++++++帶正電荷的蛋白質－－－－－－－－帶負電荷的蛋白質在等電點的蛋白質水化膜++++++++帶正電荷的蛋白質－－－－－－－－帶負電荷的蛋白質不穩定的蛋白質顆粒酸堿酸堿酸堿脫水作用脫水作用脫水作用溶液中蛋白質的聚沉（三）蛋白質空間結構破壞引起變性

在某些物理和化學因素(如加熱，強酸，強堿，有機溶劑等)作用下，蛋白質的特定空間構象被破壞，也即有序的空間結構變成無序的空間結構，從而導致其理化性質改變和生物活性的喪失。變性的本質:

破壞非共價鍵和二硫鍵，不改變蛋白質的一級結構

應用舉例臨床醫學上，變性因素常被應用來消毒及滅菌。防止蛋白質變性是有效保存蛋白質制劑（如酶,疫苗等）的必要條件(如低溫保存)。

若蛋白質變性程度較輕，去除變性因素后，蛋白質仍可恢復或部分恢復其原有的構象和功能，稱為復性(renaturation)。Renaturationofprotein

(蛋白質復性)天然狀態，有催化活性

尿素、β-巰基乙醇

去除尿素、β-巰基乙醇非折疊狀態，無活性變性復性Renaturationdenaturation*蛋白質沉淀(proteinprecipitation)

在一定條件下，蛋白疏水側鏈暴露在外，肽鏈相互纏繞聚集，從溶液中析出。變性的蛋白質易于沉淀，有時蛋白質發生沉淀，但并不變性。*蛋白質的凝固作用(proteincoagulation)蛋白質變性后的絮狀物加熱可變成比較堅固的凝塊，此凝塊不易再溶于強酸和強堿中。

四.蛋白質的紫外吸收由于蛋白質分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸，因此在280nm波長處有特征性吸收峰。蛋白質的OD280與其濃度呈正比關系，因此可作蛋白質定量測定。五.蛋白質的呈色反應可用于蛋白質溶液含量測定⒈茚三酮反應(ninhydrinreaction)

蛋白質經水解后產生的氨基酸也可發生茚三酮反應。⒉雙縮脲反應(biuretreaction)

蛋白質和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現紫色，此反應稱為雙縮脲反應，可用來檢測蛋白質含量和水解程度。Proteomics

蛋白質組學WilkinsMRetal:proteome=PROTEin+genOME(蛋白質組)

“一種基因組所表達的全套蛋白質”Swinbanks:“代表一完整生物的全套蛋白質”KahnP:“反映不同細胞的不同蛋白質組合”

“蛋白質組proteome”有不同的含義：

廣義上講，一個基因組、一種生物或一種細胞/組織所表達的全套蛋白質。

狹義：僅指特定的細胞或組織在特定的階段或與某一生理現象相關的所有蛋白質。具有時空性，比基因組研究更復雜。(1)Definition:蛋白質組學（proteomics)研究細胞、組織或生物體蛋白質組成及其變化規律的科學。差異蛋白質組學、細胞蛋白質組學、結構蛋白質組學、功能蛋白質組學、磷酸化蛋白質組學、糖基化蛋白質組學、臨床蛋白質組學、疾病蛋白質組學等。(2)蛋白質組學研究技術平臺(高效率,高通量)

雙向電泳分離樣品蛋白質蛋白質點的定位和切取蛋白質點的質譜分析(3)研究的科學意義生物學問題的提出實驗模型的設計實驗組和對照組樣品的制備蛋白樣品的IEF和PAGE電泳分離圖像掃描和初步分析感興趣蛋白點的切取胰酶對蛋白質的消化質譜的多肽指紋圖分析質譜結果的生物信息學分析和比對蛋白質的鑒定其它實驗的進一步驗證蛋白質組學流程圖蛋白質樣品的色譜分離Keyterms

模體(Motif)結構域(Domain)蛋白質的變性(Denaturationofprotein)蛋白質的等電點(pI)ThankYouIfyouhaveanyquestions,pleasedon’thesitatetoask!粗提

沉淀,離心等

分離

電泳，層析等純化–電泳，層析等鑒定HPLC,MS,NMR

第五節蛋白質的分離、純化與結構分析（一）透析及超濾法*透析(dialysis)利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。*超濾法

應用正壓或離心力使蛋白質溶液透過有一定截留分子量的超濾膜，達到濃縮蛋白質溶液的目的。透析

(Dialysis)（二）有機溶劑沉淀、鹽析及免疫沉淀*有機溶劑：常用丙酮、乙醇等沉淀，濃度不能太高，低溫*鹽析(saltprecipitation)是將高濃度中性鹽如硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質溶液，使蛋白質表面電荷被中和以及水化膜被破壞，導致蛋白質沉淀。agarose

bead

免疫沉淀法（IP）

是利用抗原蛋白質和抗體的特異性結合以及細菌蛋白質的“proteinA/G”能特異結合免疫球蛋白FC片段的現象而發展的方法。目前多用精制的proteinA/G預先結合固化在agarose

beads上，使之與含有抗原的溶液及抗體反應后，beads上的proreinA/G就能吸附抗原抗體達到沉淀抗原的目的。proteinA抗原抗體（三）電泳蛋白質在高于或低于其pI的溶液中為帶電的顆粒，在電場中能向正極或負極移動。這種通過蛋白質在電場中泳動而達到分離各種蛋白質的技術,稱為電泳(elctrophoresis)。根據支撐物的不同，可分為薄膜電泳、凝膠電泳等。

幾種重要的蛋白質電泳*SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS），

常用于蛋白質分子量的測定。*等電聚焦電泳（IEF