細(xì)胞工程第二清洗與消毒詳解演示文稿當(dāng)前1頁，總共36頁。（優(yōu)選）細(xì)胞工程第二清洗與消毒當(dāng)前2頁，總共36頁。方法：物理滅菌法+化學(xué)消毒法1.物理滅菌法：A：紫外線法：無菌室、超凈工作臺大面積消毒。B：高壓蒸汽法：玻璃器皿、濾器、膠塞、解剖用具及耐熱液體。C：過濾除菌法：含不耐熱成分培養(yǎng)基、試劑等。2.化學(xué)消毒法：實(shí)驗(yàn)室、無菌室、物體表面消毒。當(dāng)前3頁，總共36頁。1.玻璃器皿清洗：玻璃器皿用于培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)胞凍存、培養(yǎng)用液的存放等。提供細(xì)胞生長的玻璃表面不但要清洗干凈，而且要帶適當(dāng)?shù)碾姾伞？列詨A清洗劑會使玻璃表面帶的電荷不適于細(xì)胞附著。需以HCl或H2SO4中和。當(dāng)前4頁，總共36頁。一般玻璃器皿的清洗分為4個(gè)步驟。A：浸泡：首先清水浸泡，用以軟化和溶解；再采用5%鹽酸浸泡過夜；新的玻璃器皿在生產(chǎn)過程中常使玻璃表面呈堿性，并帶有一些如鉛和砷等對細(xì)胞有毒的物質(zhì)，采用酸處理可消除。當(dāng)前5頁，總共36頁。B:刷洗：一般多用毛刷和洗滌劑或洗衣粉洗滌，以去除器皿內(nèi)外表面的雜質(zhì)（防止損傷器皿表面，不留死角）。C:浸酸：清潔液由濃硫酸、重鉻酸鉀及蒸餾水配制而成。具有很強(qiáng)的氧化作用，去污能力很強(qiáng)，對玻璃器皿無腐蝕作用。清潔液：紅棕色（有效）--綠色（失效）當(dāng)前6頁，總共36頁。D：沖洗：玻璃器皿經(jīng)浸泡后，第一步，使用流水徹底沖洗，每個(gè)器皿用流水灌滿、倒掉，須重復(fù)十次以上，直至清潔液全部沖洗干凈，不留任何殘跡為止。當(dāng)前7頁，總共36頁。清潔液配制比例當(dāng)前8頁，總共36頁。細(xì)胞培養(yǎng)物品清洗所需配制的清潔液強(qiáng)度通常為次強(qiáng)液。新配制的清潔液呈棕紅色，經(jīng)多次使用、水分增多或遇有機(jī)溶劑時(shí)變?yōu)榫G色，此時(shí)表示清潔液已失效，應(yīng)廢棄而重新配制。

當(dāng)前9頁，總共36頁。當(dāng)前10頁，總共36頁。安全：配制過程中，應(yīng)先將重鉻酸鉀完全溶解于蒸餾水中(必要時(shí)可加熱幫助溶解)，然后緩慢加入濃硫酸。由于加入濃硫酸時(shí)將產(chǎn)生熱量，因此配制的容器宜用陶瓷或塑料器皿。一般浸泡過夜，或至少為6h以上。當(dāng)前11頁，總共36頁。2.玻璃濾器：玻璃濾器以燒結(jié)玻璃為濾板，固定在玻璃漏斗上。主要用于各種培養(yǎng)用液的過濾除菌，不宜單獨(dú)過濾血清等粘稠液體，容易堵塞濾板小孔。此種濾器只能連接真空泵在負(fù)壓條件下抽濾，不能施加正壓。

當(dāng)前12頁，總共36頁。a．自來水漂洗：用洗衣粉掠洗(不得使用毛刷)過夜。b．自來水抽濾3—5遍至無白沫，水滴濾過夜。c．清潔液抽濾1遍，清潔液滴濾過夜。d．自來水漂洗抽濾5遍，水滴濾過夜。e.蒸餾水抽濾3遍，蒸餾水滴濾過夜。f．二蒸水抽濾2遍，三蒸水滴濾過夜，漂洗。g．烤干備用。當(dāng)前13頁，總共36頁。3.膠塞、蓋子等雜物：

清洗過程中，初次使用的膠塞因帶有滑石粉，應(yīng)先用自來水沖洗于凈，再進(jìn)行常規(guī)清洗；使用后的膠塞、蓋子應(yīng)及時(shí)浸泡在清水中，然后用洗滌劑刷洗。用蒸餾水漂洗2—3次,最后三蒸水漂洗1次。晾干備用。

當(dāng)前14頁，總共36頁。4.塑料器皿：用后立即以流水沖洗干凈或浸入清水中，防止干涸。超聲波清洗機(jī)內(nèi)加入少量洗滌劑清洗30min,流水徹底沖洗干凈；清潔液浸泡過夜，流水徹底將殘留清潔液沖洗干凈，蒸餾水漂洗2—3次．三蒸水漂洗2次，晾干備用。

當(dāng)前15頁，總共36頁。5.包裝：一般用皺紋包裝紙、硫酸紙、牛皮紙、棉布等作為包裝材料；對培養(yǎng)瓶、濾器、存放培養(yǎng)液用貯液瓶、吸管和膠塞(或培養(yǎng)瓶蓋子)等物品的容器瓶口部分做局部包裝密封，再用牛皮紙、玻璃紙或布包起來備用。當(dāng)前16頁，總共36頁。

二、消毒玻璃培養(yǎng)瓶，移液管，試管等玻璃器皿？超凈工作臺臺面？金屬手術(shù)器械？不耐熱的液體培養(yǎng)基和胰蛋白酶等？橡膠塞和塑料瓶蓋等？細(xì)胞培養(yǎng)室？操作人員的手部？實(shí)驗(yàn)室桌面、地面等？當(dāng)前17頁，總共36頁。（一）重要概念1.消毒：殺死物體上病原微生物的方法；并不一定能殺死含芽胞的細(xì)菌或非病原微生物2.滅菌：殺死物體上所有微生物的方法。3.防腐：防止或抑制微生物生長繁殖的方法。4.無菌：不存在活的微生物。5.無菌操作：防止微生物進(jìn)入機(jī)體或局部環(huán)境的操作技術(shù)。消毒與滅菌當(dāng)前18頁，總共36頁。（二）消毒滅菌的方法根據(jù)材料的要求可采用不同的消毒滅菌方法。總的說來有物理方法及化學(xué)方法兩大類。培養(yǎng)用品的消毒滅菌當(dāng)前19頁，總共36頁。1.物理消毒a.火焰：可直接用酒精火焰加熱的實(shí)驗(yàn)器械。b.射線消毒（電離輻射消毒）：鈷60（60Co）；量大和不適用高壓和過濾的培養(yǎng)用品；用于牛血清、塑料制品、玻璃制品；不適用于活的生物材料。

c.紫外線消毒：空氣、操作臺表面。紫外燈距地面2.5米。作用原理。d.干熱消毒：玻璃器皿；160度保持2小時(shí)e.濕熱消毒：布類、膠塞、金屬器械、玻璃器皿某些液體;物品不宜過滿；液體和橡膠制品10磅（65KPa115℃）10分鐘；布類、金屬器械、玻璃器皿15磅℃）20分鐘。f.濾過消毒：培養(yǎng)用液；0.22μm微孔濾膜當(dāng)前20頁，總共36頁。2.化學(xué)消毒：消毒劑：2%來蘇爾（煤酚皂）、甲醛、環(huán)氧乙烷、氯已定、戊二醛、碘伏、0.5%過氧乙酸、0.1%新潔爾滅（常用）

、70％（或75％）酒精（常用）。3.抗生素消毒：青霉素、鏈霉素。4.氣體消毒：37％甲醛加熱沸騰后，加適量高錳酸鉀，關(guān)門窗1～3天。當(dāng)前21頁，總共36頁。（三）消毒劑的主要種類及應(yīng)用當(dāng)前22頁，總共36頁。當(dāng)前23頁，總共36頁。（四）影響消毒滅菌效果的因素（1）消毒劑的性質(zhì)、濃度與作用時(shí)間（2）微生物的污染程度（3）微生物的種類和生活狀態(tài)（4）環(huán)境中有機(jī)物（5）溫度、濕度、酸堿度（6）化學(xué)拮抗物當(dāng)前24頁，總共36頁。三、過濾除菌法負(fù)壓？正壓？

用于遇熱易發(fā)生變性而失效的試劑或培養(yǎng)用液當(dāng)前25頁，總共36頁。過濾除菌裝置

當(dāng)前26頁，總共36頁。常用的濾器有以下幾種①zeiss濾器：這種濾器為不銹鋼的金屬結(jié)構(gòu)。中間央有一層石棉制成的一次性纖維濾板。濾板有一定的厚度，可承受一定的壓力，因此是過濾血清等粘稠液體較理想的濾器。當(dāng)前27頁，總共36頁。當(dāng)前28頁，總共36頁。培養(yǎng)液過濾除菌裝置當(dāng)前29頁，總共36頁。②玻璃濾器；這種濾器為玻璃結(jié)構(gòu)，以燒結(jié)玻璃為濾板固定于玻璃漏斗上，可用于過濾除血清等粘稠液體以外的各種培養(yǎng)液體，只能采用抽濾式。根據(jù)濾板孔徑的大小，分G1-G6六種規(guī)格型號，其中只有G5及G6可用以濾過除菌，一般都使用G6型。其缺點(diǎn)是速度較慢。當(dāng)前30頁，總共36頁。當(dāng)前31頁，總共36頁。微孔濾膜濾器：這種濾器的基本結(jié)構(gòu)與Zeiss濾器相同，其中間為一種一次性的特制混合纖維素脂濾膜。濾膜的規(guī)格很多，主要根據(jù)濾器的直徑大小而劃分其型號，可按待濾過的液體的量來選擇適當(dāng)?shù)男吞枴．?dāng)前32頁，總共3