2006?2007學年第二學期（A卷）一、名詞解釋（每題4分，5小題，共20分）Blotting：Blottingistheprocessofidentityingspecificbandsofintrerestamongstallthebandsboundtothenitrocellulose.Donewithspecificprobesorantibodies.Probe：ProbeisaspecificDNAorRNAfragmentwhichcanbindwiththesampleDNAorRNAfordection.Cosmid：Plasmidshavebeenconstructedwhichcontainafragmentof入DNAincludingthecossite.Theseplasmidshavebeentermedcosmidsandcanbeusedasgene-cloningvectorsinconjunctionwiththeinvitropackingsystem.SDSequence:ThespecialDNAsequencewhichbindsto3'endof16SrRNAandinitiatessynthesisofprotein.Inclusionbody:“Inclusionbodies"typicallyreferstoaggregatesofproteininbacterialcytoplasm.Inclusionbodiesareclassicallythoughttobecomprisedofmisfoldedprotein二、填空題（每題2分，5小題，共10分）：RACE:ori:復制原點（復制起始位點）MCS:多點隆位點PCR:聚合酶鏈式反應cccDNA:共價閉合環狀DNA三、單選題（每題1分，25小題，共25分）Prokaryotesandeukaryotesuseseveralmethodstoregulategeneexpression,butthemostTOC\o"1-5"\h\zcommonmethodis（）translationalcontrolB.transcriptionalcontrolC.posttranscriptionalcontrolD.controlofmRNApassagefromthenucleusWhateffectwouldtheadditionoflactosehaveonarepressedlacoperon?（）TheoperatorsiteontheoperonwouldmoveB.ItwouldreinforcetherepressionofthatgeneC.ThelacoperonwouldbetranscribedD.ItwouldhavenoeffectwhatsoeverCuttingcertaingenesoutofmoleculesofDNArequirestheuseofspecial（）A.degradingnucleasesB.restrictionendonucleasesC.eukaryoticenzymesD.viralenzymesADNAlibraryis（）ageneralcollectionofallgenessequencedthusfar.acollectionofDNAfragmentsthatmakeuptheentiregenomeofaparticularorganism.aDNAfragmentinsertedintoavector.allDNAfragmentsidentifiedwithaprobe.TOC\o"1-5"\h\zAprobeisusedinwhichstageofgeneticengineering?（）AcleavingDNAB.recombiningDNAC.cloningD.screeningTheenzymeusedinthepolymerasechainreactionis（）A.restrictionendonucleaseB.reversetranscriptaseC.DNApolymeraseD.RNApolymerase下列對DNA聚合酶的描述哪一種是錯誤的（）具有5'-3'外切活性B.具有5'-3、聚合活性C.具有3'-5'外切活性D.具有3'-5、聚合活性大腸桿菌mRNA上起始密碼子上游的SD序列可與某種RNA的3'端配對，然后啟動多肽鏈合成，這種RNA是（）A.tRNAB.SnRNAC.16sRNAD.23srRNA反轉錄酶是一種（）

依賴DNA的DNA聚合酶C.依賴RNA的依賴DNA的DNA聚合酶C.依賴RNA的DNA聚合酶依賴DNA的RNA聚合酶D.依賴RNA的DNA聚合酶基因誘變B.分子克隆C.DNA重組D.基因無性繁殖下列五個DNA片段中含有回文結構的是（）GAAACTGCTTTGACB.GAAACTGGAAACTGGAAACTGGTCAAAGD.GAAACTGCAGTTTCT4-DNA連接酶是通過形成磷酸二酯鍵將兩段DNA片段連接在一起，其底物的關鍵基團是（）A.2'-OH和5'-PB.2'-OH和3'-PC.3'-OH和2'-PD.3'-OH和5'-P若某質粒帶有lacZ標記基因，那么與之相匹配的篩選方法是在篩選培養基中加（）A.半乳糖B.葡萄糖C.蔗糖D.X-gal和IPTG核酸分子雜交的化學原理是形成（）A.共價鍵B.離子鍵C.氫鍵D.配位鍵有利于基因的蛋白質產物分泌的元件是（）A.核糖體B.信號肽C.終止子D.多聚腺苷酸基因工程菌中重組質粒的丟失機制是（）A.重組質粒被細胞內核酸酶降解B.重組質粒滲透至細胞外C.重組質粒在細胞分裂時不均勻分配D.重組質粒殺死受體細胞下列哪種克隆載體對外源DNA的容載量最大（）A.質粒B.柯斯質粒（Cosmid）C.酵母人工染色體D.久噬菌體同一種質粒DNA，以三種不同的形式存在，電泳時，它們的遷動速率是：（）A.OCDNA>SCDNA>LDNAB.SCDNA>LDNA>OCDNAC.LDNA>OCDNA>SCDNAD.SCDNA>OCDNA>LDNA用下列方法進行重組體的篩選，只有（）能證明外源基因進行了表達。A.SouthernblottingB.NorthernblottingC.WesternblottingD.insituhybridization強化mRNA翻譯的元件是（）A.啟動子B.復制起始區C.SD序列D.回文序列基因工程操作的三大基本元件是：（I供體II受體III載體IV抗體V配體）（）A.I+II+IIIB.I+III+IVC.II+III+IVD.II+IV+V限制性核酸內切酶是由細菌產生的，其生理意義是（）A.修復自身的遺傳缺陷C.強化自身的核酸代謝23下列哪一項不是產生星號活性的主要原因？A.甘油含量過高C.A.修復自身的遺傳缺陷C.強化自身的核酸代謝23下列哪一項不是產生星號活性的主要原因？A.甘油含量過高C.含有非Mg2+的二價陽離子.24.下列對cosmid描述中不正確的是（A.它具有cos位點，因而可進行體外包裝。.進入受體細胞后，可引起裂解反應促進自身的基因重組提高自身的防御能力（）反應體系中含有有機溶劑D.酶切反應時酶濃度過低）它具有質粒DNA的復制特性。.進入受體細胞后，可引起溶源化反A.根據外源基因的表達B.根據載體基因的表達C.根據mRNA同DNA的雜交D.根據DNA同DNA的雜交三、單選題（每題1分，25小題，共25分）B2.C3.B4.B5.D6.C7.D8.C9.C10.AD12.D13.D14.C15.B16.B17.A18.B19.C20.C21.A22.D23.D24.C25.B四、問答題（30分）簡要途述藍白斑篩選的原理及其有基因克隆中的應用。（7分）答：許多載體（如PUC系列）帶有一段大腸桿菌的DNA片段，為p-半乳糖苷酶（LacZ）的調控序列和N端146個氨基酸的編碼序列（編碼LacZ的a肽）。某些特定的宿主菌可表達LacZ的C端（即3肽）。單獨存在的a肽和3肽都沒有活性，但當它們同時在宿主細胞表達時，可互補產生LacZ的活性，將底物X-gal水解，形成藍色化合物，這種現象稱為a互補。由a-互補而產生的LacZ+細菌在誘導劑IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在時產生藍色菌落，因而易于識別。然而，當外源DNA插入到質粒的多克隆位點后，幾乎不可避免地導致無a-互補能力的氨基端片段，使得帶有重組質粒的細菌形成白色菌落。這種重組子的篩選，又稱為藍白斑篩選。如用藍白斑篩選則經連接產物轉化的鈣化菌平板37r溫箱倒置培養12-16hr后，有重組質粒的細菌形成白色菌落。概括典型原核生物啟動子的基本結構和功能，并解釋什么是保守序列。（7分）答：啟動子是與RNA聚合酶結合和轉錄起始的特殊序列。典型的原核啟動子大約長40個核苷酸并有兩個重要的序列：（1）-35區：位于復制起點（+1）上游35個核苷酸處的6核苷酸序列，能被RNA聚合酶全酶識別并結合。（2）Pribnow框或-10區：另一個位于-10處的6核苷酸序列。Pribnow框具有的保守序列：5'-TATAAT-3'。保守序列指所有啟動子的該部位都有這一序列或十分相似的序列；僅在極少數啟動子中，Pribnow框有1個或2個核苷酸不同。與此相似，-35區有TTGACA的保守序列。影響原核生物基因表達效率的因素有哪些？（9分）答：影響外源基因原核表達效率的主要因素如下：1、啟動子的結構對表達效率的影響：啟動子區域有兩段保守序列，即-35區的5'-TTGACA-3'和-10區的5'-TATAAT-3'序列，啟動子序列與上述保守序列相似程度越高，表達能力越強，且，-35區和-10區間距離為17bp，啟動子活性最強。2、啟動子與克隆基因間距離：翻譯起始點和S-D序列必須接近到一定程度，S-D序列與起始密碼子距離為5-9bp較合適。3、轉錄終止子：轉錄終止區的存在保證載體不會轉錄非必須基因，不必浪費資源和能量、不會干擾正常表達。4、載體拷貝數及穩定性：增加拷貝數可以提高表達效率。5、外源蛋白在菌體中的穩定性：菌體蛋白酶會降解表達產物，以下途徑可解決這一問題：（1）融合表達；（2）分泌表達；（3）使用蛋白酶缺陷型表達菌株。6、外源基因結構及密碼子偏愛性。原核表達載體必須具備哪些基本結構？（7分）答：原核表達載體必須具備如下結構：起始序列；多克隆位點；選擇標記；可調控的啟動子；轉錄終止子；翻譯起始序列；核糖體結合位點。五、應用分析題（15分）甲型流感病毒是一種RNA病毒，血凝素是該病毒的重要保護性抗原之一，試設計原核表流感病毒血凝素基因的基本程序。佛山科學技術學院2006?2007學年第二學期B一名詞解釋(每題4分，5小題，共20分)Palindromes：Asegmentofdouble-strandedDNAinwhichthenucleotidesequenceofonestrandreadsinreverseordertothatofthecomplementarystrand.Imcompatibilityofplasmids:Plasmidincompatibilityistheinabilityoftwodifferentplasmidstocoexistinthesamecellintheabsenceofselectionpressure.Consensussequence：Ifthetranscriptionstarpointisassignedtheposition+1thenthisconsensussequenceconsistsofthe-35region(TTGACA)andthe-10region,orPribnowbox(TATAAT).RNApolymerasemustbindtobothsequencestoinitiatetranscription.cDNALibrary：AcDNAlibraryisthesetofallthemRNAscontainedwithinacell.ReferredtoascDNAthesereversetranscribedmRNAsarecollectivelyknownasthelibrary.Promotor:PromotorisaregionofDNAwhichbindstoRNApolymeraseandinitiatessynthesisofprotein.二、填空題（每題2分，5小題，共10分）：1．ORF:開放閱讀框2.YAC:_酵母人工染色體3.SDS:SD變性聚丙烯酰胺凝膠電泳4.RT-PCR:—反轉錄-聚合酶鏈式反應5.ocDNA:開環DNA三、單選題（每題1分，20小題，共20分）A（n）isapieceofDNAwithagroupofgenesthataretranscribedtogetherasaunit.A.promoterB.repressorC.operatorD.operonWhateffectwouldtheadditionoflactosehaveonarepressedlacoperon?（）TheoperatorsiteontheoperonwouldmoveThelacoperonwouldbetranscribedItwouldreinforcetherepressionofthatgeneItwouldhavenoeffectwhatsoeverAtypeofDNAsequencethatislocatedfarfromagenebutcanpromoteitsexpressionisa（n）（）A.promoterB.activatorC.enhancerD.TATAboxTOC\o"1-5"\h\z4．Whichofthefollowingcannotbeusedasavector?（）A．phageB．plasmidC．bacteriumD．AllcanbeusedasvectorsProkaryotesandeukaryotesuseseveralmethodstoregulategeneexpression,butthemostcommonmethodis（）A．translationalcontrolB．transcriptionalcontrolC．posttranscriptionalcontrolD．controlofmRNApassagefromthenucleus.Whichofthefollowingisnotanapplicationofgeneticengineeringinplants?（）A．nitrogenfixationB．DNAvaccinesC．resistancetoglyphosateD．productionofinsecticidalproteinsinplants第一個由重組大腸桿菌生產的人類蛋白（多肽）藥物是（）A.生長激素（Growthhormone）B.胰島素（Insulin）C.生長激素釋放抑制素（Somatostatin）D.干擾素（Interferon）用堿變性分離質粒DNA時，染色體DNA之所以可以被除去，是因為：（）A.染色體DNA斷成了碎片B.染色體DNA分子量大，而不能釋放染色體變性后來不及復性D.染色體未同蛋白質分開而沉淀下列哪一個不是Southernblotting的步驟？（）A.DNA片段轉移至硝酸纖維素膜上B.DNA與載體連接用凝膠電泳分離DNA片段D.用一個標記的探針與膜雜交在利用lacZ失活的顯色反應篩選中，IPTG的作用是（）A.誘導宿主的a肽合成B.誘導宿主的3肽合成作為酶的作用底物D.作為顯色反應的指示劑基因工程操作的三大基本元件是：（I供體II受體III載體IV抗體V配體）（）A.I+II+IIIB.I+III+IVC.II+III+IVD.II+IV+V限制性核酸內切酶是由細菌產生的，其生理意義是（）A.修復自身的遺傳缺陷B.促進自身的基因重組C.強化自身的核酸代謝D.提高自身的防御能力13.A.C.14.15.A.B.C.D.16.下列哪一種不是產生星號活性的主要原因？（甘油含量過高含有非Mg2+的二價陽離子第一個作為重組DNA載體的質粒是A.pBR322B.ColE1下列對cosmid描述中不正確的是（它具有cos位點，因而可進行體外包裝它具有質粒DNA的復制特性進入受體細胞后，可引起裂解反應進入受體細胞后，可引起溶源化反應下列篩選重組體的方法中，不屬于遺傳學的方法是（）反應體系中含有有機溶劑酶切反應時酶濃度過低B.D.)C.pSC101)）。A-插入失活法B.顯色反應選擇法C.噬菌斑選擇法D.限制性酶切分析法17.啟動子的特征之一是）。D.PUC18A.TATABoxB.GC富積區C.轉錄起始位點D.含有某些稀有堿基18.下列mRNA5'端序列中，具有典型的原核生物Shne-Dalgarno序列特征的是(A.5'UAUAAG3'B.5'AGGAGG3'C.5'AUAUCU3'D.5'CCUCCA3'）。19.高等哺乳類動物基因在大腸桿菌中高效表達時，其產物往往失去水溶性，原因是（A.表達產物濃度過高B.C.表達產物不能正確折疊D.表達產物不含糖基側鏈表達產物難以形成二硫鍵）。20.A.C.21.A.B.C.D.）。B.信號肽D.多聚腺苷酸一般而言，分子量小的蛋白質更不穩定，其原因是（有利于基因的蛋白質產物分泌的元件是（核糖體終止子）。分子量越小分子量越小分子量越小分子量越小形成良好空間構象的可能性越低表達效率越高越容易被加工修飾分泌效果越佳某一重組DNA（6.2kb）的載體部分有兩個SmaI酶切位點。用SmaI酶切后凝膠電泳上出現四條長度不同的帶子，其長度總和與已知數據吻合，SmaI酶切位點共有A.4個在基因工程中A.氫鍵的形成C.疏水鍵的形成該重組分子插入片段上的（）。B.3個C.2個外源基因表達產物的重折疊通常是指（B.離子鍵的形成D.二硫鍵的形成D.至少2個）。下列能區分期望重組子的篩選方法是（A.抗藥性篩選法B.菌落原位雜交法C.顯色篩選法D.營養缺陷篩選法包涵體是一種（）。）。A.受體細胞中難溶于水的蛋白顆粒C.噬菌體或病毒DNA的體外包裝顆粒三、單選題（每題1分，25小題，共25分）1.D2.B3.C4.C5.B6.BB.大腸桿菌的亞細胞結構D.用于轉化動物細胞的脂質體7.B8.C9.B10.A11.A12.D13.D14.C15.D16.D17.A18.B19.C20.B21.A22.D23.D24.B25.A四、問答題（30分）提高目的基因在原核生物中表達效率的策略有哪些？（10分）答：1.選擇強啟動子，如tac或T7啟動子;2.調整S-D序列與AUG間的距離（一般為5-9bp）；3.改變起始密碼下面的幾組密碼子，能提高翻譯起始效率；4.增加mRNA的拷貝數和穩定性，在外源基因的下游插入重復性基因外回文序列，防止mRNA受到核酸外切酶攻擊；5.減輕宿