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文檔簡介
PCR技術(shù)原理
什么是PCR技術(shù)？PCR反應(yīng)如何進(jìn)行？PCR技術(shù)優(yōu)勢(shì)？PCR概念的提出①1953年，Watson和Crick提出DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)及半保留復(fù)制模型。引物引物Mullis的構(gòu)思DNA聚合酶DNA聚合酶特定DNA片段Mullis最初使用的DNA聚合酶是大腸桿菌DNA聚合酶I的Klenow片段。不耐高溫。1989年美國《Science》雜志列PCR為十余項(xiàng)重大科學(xué)發(fā)明之首,比喻1989年為PCR爆炸年,Mullis榮獲1993年度諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。什么是PCR技術(shù)？PCR技術(shù)又稱聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerasechainreaction)，是通過模擬體內(nèi)DNA復(fù)制的方式，在體外選擇性地將DNA某個(gè)特殊區(qū)域擴(kuò)增出來的技術(shù)。PCR反應(yīng)如何進(jìn)行？模板DNA模板DNA的高溫變性：模板DNA經(jīng)加熱至95℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；反應(yīng)階段一：高溫變性模板DNA引物3’5’模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合；反應(yīng)階段二：低溫退火5’3’3’3’5’5’中溫延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTPs為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條與模板DNA鏈互補(bǔ)的新鏈。反應(yīng)階段三：中溫延伸5’5’5’5’3’3’3’3’模板DNA引物DNA聚會(huì)酶一個(gè)PCR循環(huán)結(jié)束，模板DNA放大一倍模板DNA模板DNANo.of No.AmpliconCycles CopiesofTarget1 22 43 84 165 326 6420 1,048,57630 1,073,741,8241cycle=2Amplicon2cycle=4Amplicon3cycle=8Amplicon4cycle=16Amplicon5cycle=32Amplicon6cycle=64Amplicon7cycle=128Amplicon
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