急性肝損傷動物模型研究進展目前，國內外對肝損傷的防治仍是一個嚴峻課題。選擇合適的肝損傷模型是做好防治肝損傷研究的前提。通過建立實驗性肝損傷動物模型，研究肝病的發生機制，篩選保肝藥物，探索保肝作用原理，具有十分重要的現實意義。本綜述將目前應用較多的模型做一列舉分析。一、化學性肝損傷1.四氯化碳肝損傷CCl4是一種常用的誘發化學性肝損傷模型的劇毒類化學藥物之一，因其接觸后發病率高。易在動物實驗中復制，能準確反映肝細胞的形態學變化，在研究保肝降酶藥的實驗中經常使用[1]。CCl4引起肝損害的主要機制是CCl4經肝微粒體細胞色素P450(Cyt1P450)活化后生成三氯甲基自由基(·CC13)，在其啟動的過氧化連鎖反應中，生毒性作用更強的二氯甲基自由基(·CC12)及過氧化甲基自由基(·OOCC13),這些自由基攻擊肝細胞膜的多不飽和脂肪酸(polyunsaturatedfattyacid,PUFA)引發脂質過氧化[2]。CCl4溶于植物油，配制0.1%-0.2%濃度，按10ml/kg小鼠腹腔注射，或灌胃0.1%～0.2%，或皮下注射0.5%，12～24h內處死動物。測定血清谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)等反應肝功能的指標；肝勻漿超氧化物歧化酶(SOD)，脂質過氧化物(LPD)或丙二醛(MDA)等反映脂質過氧化的指標，肝臟取同一部位進行組織病理學檢查。此模型是肝損傷的經典模型，應用最多，能準確反映肝細胞的功能、代謝及形態學變化，重復性好。但缺點是CCl4還同時損害動物的其他多種臟器，此外，CCl4揮發性較大，可經人體多種途徑吸收，故對實驗人員具有一定的中毒危險性。2.D-半乳糖胺肝損傷D-半乳糖胺（D-GalN），又名D-氨基半乳糖，是一種肝細胞磷酸尿嘧啶核苷干擾劑，可造成肝彌漫性壞死和炎癥，與臨床病毒性肝炎的肝臟病理變化相似。D-氨基半乳糖(D-galactosamine,GalN)通過消耗肝臟尿嘧啶三磷酸核苷酸，抑制肝細胞RNA合成。GalN與微量細菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)共處理后，小鼠對LPS敏感性明顯增強，引起小鼠急性肝臟損傷，伴有嚴重肝臟充血和壞死，甚至出現死亡[3]。另外D-GalN還可以引起肝細胞內Ca2+增多，Mg2+減少，Mg2+/Ca2+的比例失調[4]，這可能也是D-GalN導致肝細胞不可逆損害的因素之一。用無菌生理鹽水配制成100g/L的D-氨基半乳糖溶液，并用1mol/LNaOH調節其pH值至7.0。大鼠或小鼠腹腔注射600-900mg/kg和LPS10μg/kg，造成急性肝損傷模型，染毒24-48h內處死動物，檢查肝功能、脂質過氧化指標及組織病理學。該模型肝臟組織病理學改變和生物化學的變化均與人類病毒性肝炎極為相似，也能發展為肝性腦病，其可逆性和重復性均較好[4]。而且D-GalN肝毒性的專一性較其他肝毒物較好，對實驗人員也無危險。因此，D-GalN性肝損傷模型是目前公認的比較好的研究病毒性肝炎的發病機制及有效治療藥物的實驗動物模型。3.對乙酰氨基酚肝損傷對乙酰氨基酚亦名醋氨酚、撲熱息痛(acetaminophen,paracetamol,AP,APAP)，是替代阿司匹林的解熱鎮痛藥，大劑量或長期服用時，可導致嚴重毒性效應，尤以肝臟小葉中央型壞死為常見。AP造成的肝損傷是目前國際上常用的模型。AP致肝損傷機理主要是其代謝過程中產生N-乙酰-對苯醌亞氨(NAPQI)，耗竭肝細胞還原型谷胱甘肽，降低肝細胞抗氧化能力，繼而使肝細胞產生氧化應激性損傷。NAPQI還可以與生物大分子共價結合，導致蛋白質巰基被氧化和芳基化而影響它們的功能。此外，對AP在肝內代謝過程中產生自由基可引起肝細胞膜脂質過氧化，并通過破壞鈣穩態而產生細胞毒性。雖然在AP誘導的肝損傷模型中氧化損傷是導致肝細胞亞顯微結構破壞而引起肝細胞壞死是肝損傷的主要原因，但細胞凋亡也參與肝損傷過程[5]。加熱下溶于生理鹽水，給小鼠300-500mg/kg一次性腹腔注射[6]，也可配成質量濃度為2.5%的混懸液經口灌胃，制成急性肝損傷模型，染毒24h后處死動物，眼眶取血，檢查肝功、病理及脂質過氧化等有關指標。王憲齡[7]等通過該模型比較柴胡和黃芩不同劑量比例配伍對小鼠肝損傷的保護作用。模型組灌胃給予撲熱息痛混懸液(500mg/kg,1%CMC-Na配成2.5%的混懸液)20ml/kg，24h后脫頸椎處死小鼠，測定各種指標。結果顯示模型組的ALT、AST含量均較空白組有明顯升高，血清和肝勻漿中GSH明顯下降。AP為臨床常用的解熱鎮痛藥，每日25mg治療劑量下較安全，AP所致肝損傷，主要導致肝臟對AP代謝能力受限，最終導致肝細胞變性壞死，過量或長期使用可使肝臟產生不同程度的損害，故AP制備的肝損傷模型不及前兩模型常用。4.其他化學損傷雷公藤多苷片、異煙肼、四環素等所致的肝損傷[8]。二、免疫性肝損傷肝臟內免疫反應是引起病毒性肝損傷的主要機制之一，因此以免疫學機制誘導的肝損傷模型建立，為肝損傷研究開辟了新途徑，對研究病毒性肝炎防治具有重要意義。1、卡介苗加脂多糖誘導法模型的機理在于預先給動物注射卡介苗，可使多核中性粒細胞或巨噬細胞聚集于肝，繼后再用脂多糖攻擊注射，可激發這些細胞釋放對肝細胞有毒性作用的可溶性因子，造成免疫性肝損傷。給小鼠尾靜脈注射卡介苗(BCG)漿液0.2ml/只(含5×106個菌以上)，致敏后10d，再尾靜脈注射脂多糖(LPS)7.5μg/只，16h后測定肝功、病理、脂質過氧化及TNF-α等有關指標[9]。肖柳英[10]等通過該模型研究荔枝核對小鼠急性肝損傷的保護作用，模型小鼠iv卡介苗(BCG)5×106個菌/鼠，11天后末次給藥前16h再iv脂多糖(LPS)7.5μg/只，眼眶取血測指標，實驗結果表明小鼠卡介苗加脂多糖誘導法造模成功。該動物模型與用化學物質造成的肝損傷模型比較，在病理機致上更接近人體的肝炎。2.刀豆蛋白A誘導法刀豆蛋白A（ConA）是一種植物血凝素，具有強力的促有絲分裂作用，有較好的促淋巴細胞轉化反應的作用，還能選擇性激活抑制性T細胞（Ts）細胞，對調節機體免疫反應具有重要作用。ConA誘導的肝損傷模型依賴于有免疫活性的細胞引起肝損傷，其效應細胞是細胞和單核巨噬細胞，當給動物靜脈注射ConA后，ConA與循環中的常駐巨噬細胞成分組合，然后活化肝細胞中的T細胞，對肝細胞造成損傷，因此ConA對肝臟有器官特異性。在ConA誘導的肝損傷模型中,淋巴細胞或者單核細胞以及肝臟中的kuppffercells通過炎癥反應參與了損傷過程，它們進一步激活腫瘤壞死因子TNF-α，繼而通過調亡機制損壞實質細胞[11]。小鼠直接一次性尾靜脈注射ConA20mg/kg制成急性免疫性肝損傷模型，2-8h后取樣測定肝功能、病理及脂質過氧化指標[12]。蔡欣[13]等利用刀豆蛋白A致小鼠急性肝損傷模型，分析并評價模型效果。模型組尾靜脈注射生理鹽水，6h后按每克體重10μg尾靜脈注射ConA，16h及32h后取血處死檢測各種指標。實驗結果表明，與對照組比較16、32h后，模型組小鼠血清ALT及AST值顯著升高。病理切片結果表明，模型組小鼠注射ConA16h后，與對照小鼠相比，肝細胞受到損傷，胞質腫脹。模型組小鼠注射ConA32h后，肝臟幾乎完全水腫壞死，伴炎性細胞浸潤，且可見大量肝細胞核破裂、凋亡小體等。該模型發病迅速，肝臟損害明顯，短期內即可快速地誘導臨床和組織學的肝炎。，三、酒精性肝損傷乙醇及其在肝細胞內代謝產生的毒性代謝產物所引起的代謝紊亂是導致酒精性肝損傷的主要原因[14]。乙醇所致肝損傷的重要機制之一是激活氧分子產生氧自由基導致肝細胞膜的脂質過氧化。體內依賴性抗氧化系統中以GSH在抵抗酒精所致的肝損傷中起關鍵作用，酒精在體外和體內均可使肝臟GSH含量顯著降低，GSH含量的減少可能是酒精導致肝臟脂質過氧化增強的原因之一[15]。1、急性酒精損傷小鼠或大鼠體積分數為50%～60%的乙醇一次性或連續幾天經口灌胃4.0-6.0ml/kg，2-24h內處死動物，檢查肝功能、脂質過氧化、病理形態學指標。郭科南[16]等利用急性酒精損傷模型，研究苦碟子注射液對急性肝損傷大鼠的影響，模型組每天禁食不禁水，6h后按7.0ml/kg給大鼠灌胃50%乙醇，1h后重復1次，連續5d。末次造模16h后取血檢測。結果發現模型組大鼠灌胃后出現醉酒癥狀，大約2h后轉醒。較空白組情況差，食欲下降，毛發光澤度差，體重增緩慢；與空白組比較，模型組血清ALT、AST水平均有明顯升高，血清GSH含量明顯降低，肝勻漿SOD水平明顯降低，肝勻漿MDA顯著升高。2.慢性酒精損傷大白鼠以50-60度白酒或50%-60%的乙醇經口灌胃2.4-5.0g/kg，每日1次，連續2個月。每天同時喂飼造模飼料，即營養不良飼料(面粉∶次粉∶草粉∶豆粉2∶1∶1∶1比例配方，另加少量豆油及食鹽)，正常對照組喂飼常規飼料，末次染毒后24h取樣測定有關指標。慢性酒精性肝損傷的診斷主要靠病理學檢查[17]。張宇[18]等通過慢性肝損傷實驗，觀察茶多酚對該模型所致肝損傷大鼠的影響，模型組以56%體積分數白酒折算成酒精灌胃1次/d，大鼠于灌胃4周末、12周末和24周末稱重后，取血處死測指標。結果表明，模型組肝體積增大，質地較空白組粗硬，色澤較暗淡；模型組血清ALT、AST水平均較空白組有明顯升高；肝細胞漿出現不同程度的空泡變性，重者胞體腫大氣球樣變。實驗通過不同時間造模，還發現酒精組大鼠肝臟病理檢查顯示了不同程度的脂肪變性和炎癥改變表現。早期以酒精性脂肪肝為主，可見部分大鼠肝小葉中心帶部位的肝細胞中出現大小不等的脂肪滴而后期以酒精性肝炎的表現為主，大鼠的肝小葉均可見肝細胞點狀或灶狀壞死。應用大鼠酒精性肝病模型，必須考慮大鼠與人類種屬的3個不同特點：大鼠對酒精天生的反感；大鼠體內對酒精的代謝速度較人類快3-4倍；大鼠對酒精的耐受性高。四、其他損傷1.高強度聚焦超聲該方法是治療實體腫瘤如肝癌的一種新方法，其治療的機理目前尚不完全清楚，可能與聚焦超聲在體內產生的高熱效應、空化效應和機械效應及對腫瘤血管的破壞有關[19]。2.鎘鎘是環境中廣泛存在的重金屬毒物之一，急性鎘暴露可以損害機體多種靶器官組織，如腎臟和肝臟等。鎘對肝、腎的損害與氧化損傷、氧化應激密切相關[20]發的自由基損傷密切相關[21]。鎘致急性肝損傷與鎘誘導的氧化應激，從而引。綜上所述，近幾年來國內外有關肝損傷模型的研究取得了很大進展，但上述肝損傷動物模型都各具優缺點，還需進一步完善，且急性肝損傷機制復雜，選擇較適合的研究模型，尚需深入研究。參考文獻[1]鄒麗宜,吳鐵,崔燎．四氯化碳對大鼠肝毒性的時量關系研究[J]．中國臨床藥理學與治療學，2003，8(2)：158—162.[2]何萍,黃仁彬,林軍,等.乙肝轉陰散對小鼠四氯化碳急性肝損傷的保護作用[J].廣西醫科大學學報,2006,23(5):732-733.[3]DeckerK,KepplerD.Galactosaminehepatitis:keyroleofthenucleotidedeficiencyperiodinthepathogenesisofcellinjuryandcelldeathRevPhysiol[J].BiochemPharmacol,1974,71:77–105.[4]KepplerD,LeschR,ReutterW,etal.ExperimentalhepatitisinducedbyD-galactosamine.ExpMolPathol,1968,9:279-290.[5]呂正兵,李謙,等.鯊肝活性肽對對乙酰氨基酚致小鼠急性肝損傷的保護作用[J].藥學學報,2004,39(1):17–21.[6]MacridesTA,NaylorLM,KalafatisN,etal.Hepatoprotectiveeffectsofthesharkbilesalt5beta-scymnolonacetaminophen-inducedliverda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