微生物實驗室的質量保證第一頁，共四十三頁，2022年，8月28日微生物實驗室的質量控制實驗室的規范化管理制定嚴格的管理度制定規范化操作程序

影響微生物試驗結果的重要因素包括：培養基的質量和規范化操作菌種的保藏及實驗結果的正確判斷等。第二頁，共四十三頁，2022年，8月28日

微生物實驗室的質量控制環境保證培養基保證無菌性檢查適用性檢查有效的方法方法驗證SOP操作有效的結果可靠的結論結果判斷第三頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養基的配制及質量控制

第四頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養基的配制

培養基可按處方制備也可使用按處方生產的符合規定的商品

化成品培養基，脫水培養基除附有處方和使用說明外還應注明

有

效期、貯存條件、適用性試驗的質控菌株和用途。

配制時應按使用說明上的要求操作，受潮結塊不能使用，確

保培養基的質量符合要求。

第五頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養基的配制

使用容器

-配制培養基使用的容器應是玻璃器皿或搪瓷器皿。

-使用的器皿應用蒸餾水或純化水完全沖洗。-配制培養基最常用的溶劑是純化水，特殊情況下需要用去離子水和蒸餾水.

第六頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養基的配制

對配制培養基的過程作詳細的記錄

記錄內容

配制日期、培養基名稱、成分、配制數量、

質量監控結果等進行全面詳細記錄。第七頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養基的制備方法

稱量

按照產品說明書的規定稱量，各稱量物的重量應記錄。對培養基的組分應準確稱量，并要求有一定的精確度。第八頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養基的制備方法

配制將準確稱量的各組分或脫水培養基加入溶劑中，完全

溶解，如需要可適當加熱。

所有的培養基對熱都或多或少的敏感，因此當培養基需要

加熱溶解時，應注意不要加熱過度，否則會使培養基顏色變

深。配制培養基所用的器具應能方便控制加熱和不斷攪拌。

當培養基需要添加其它組分時，添加后也應將其充分混勻。第九頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養基的制備方法

分裝配制的培養基根據試驗需要分裝試管、傾注平皿、

制備斜面。經滅菌的培養基分裝，應在無菌環境下操作，避免污染。第十頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養基的制備方法

對熱敏感的培養基分裝容器

應預先進行滅菌，以保證培養基的無菌性。第十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養基的制備方法

矯正pH

配制培養基必須矯正pH，干燥培養基也必須對pH進行驗證，高壓滅菌前的pH應比最終pH值高0.2左右。

矯正pH后的培養基應加熱、過濾，使培養基澄清。第十二頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養基的滅菌

滅菌方法及條件不當可直接影響培養基質應通過無菌

性試驗和促生長試驗進行驗證.驗證方法同《中國藥典2010年版》附錄滅菌法。

第十三頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養基的滅菌

培養基的滅菌應按照生產商提供或使用者驗證的

參數進行。商品化的成品培養基必須附有所用滅菌方

法的資料。第十四頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養基的滅菌

不同種類培養基應采用不同的滅菌方法，配制好的培養基滅菌一般多用流通蒸汽滅菌和濾膜過濾除菌。

流通蒸汽滅菌

是最常用的最有效的滅菌法，121℃，15min(121℃，30min)或116℃，40min可殺死所有的細菌芽孢。第十五頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養基的滅菌

濾膜過濾除菌

如配制的培養基含有不耐熱成分可采用濾膜過濾除菌和血清凝固器除菌。

-濾膜過濾除菌采用孔徑0.22um的濾膜過濾器.-濾膜材質依過濾物品的性質及目的而定。

不得對被濾過成分有吸附作用，不得有物質釋放

和纖維

的脫落，也不得使用含有石棉的濾器。-濾器和濾膜在使用前應進行驗證，并進行滅菌。血清凝固器80～100℃、30min，連續三天，間歇滅菌。第十六頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養基的貯藏

-商品化培養基應根據使用說明書上的要求進行儲存。-培養基標簽上應標有批號，生產日期、有效期及培

養基的有關特性。-所采用的保藏和運輸條件應使培養基最低限度失去

水分并提供機械保護。第十七頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養基的貯藏

脫水培養基或單獨配方組分應在適當的條件下貯存，

如低溫、干燥和避光，所有的容器應密閉，尤其是盛

有脫水培養基的容器.第十八頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養基的貯藏

配制好的培養基應驗證的條件下貯藏-保存在2～25℃避光的環境。

-若保存于非密閉容器中，一般在三周內使用，-若保存于密閉容器中，一般在一年內使用。

第十九頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養基的貯藏-瓊脂培養基不得在0℃或0℃以下存放，防止冷凍破

壞凝膠特性。

-瓊脂平板最好現配現用，如置冰箱保存，一般不超

過一周，且應密閉包裝，若延長保存，保存期需經

驗證確定。

-培養基滅菌后應立即取出，不得儲藏在高壓滅菌器

中，避免影響培養基的質量。

第二十頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養基的貯藏-固體培養基滅菌后的再融化應在加熱的水浴中或采

用流通蒸汽進行，只允許一次，融化的培養基應放在45～50℃的水浴中，不得超過8小時。

-使用過的培養基（包括失效的培養基）應按照國家

污染廢物處理相關規定進行。第二十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養基的質量控制

所有配制好的培養基均應進行驗證，驗證方法參照《中國藥典2010年版》附錄無菌檢查或微生物限度檢

查項下有關規定進行。第二十二頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養基的質量控制

實驗室配制的培養基監控項目

外觀、性狀、pH、促生長試驗、定期的穩定性檢查

以及培養基有效期的確定。第二十三頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養基的質量控制

驗證時間

-由同一批脫水培養基配制培養基時，若采用已驗證的配制和滅菌程序，那么可不進行批批促生長試驗。-如果培養基制備的方法未經驗證，那么，配制的每一批培養基必須進行促生長試驗。

試驗方法

-根據培養基的用途參照《中國藥典2010年版》附錄

無菌檢查或微生物限度檢查項下有關規定進行。

第二十四頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養基的質量控制

培養基的有效期是指已通過促生長試驗的培養基在整個

有效期內均需符合這些相應的標準。

每批培養基儲存的時間將取決于一定存放條件（包括容器

和密封性）的培養基組成成分的穩定性。第二十五頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養基的質量控制

試驗結果處理

-當批培養基不符合促生長試驗，應尋找造成不合格的原因。

-這個調查包括采取適當的行動以防止問題的重復出現。

-如果未找到原因或還沒有解決有關培養基的促生長問題，

任何不符合要求的批次均不能使用。第二十六頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養基的質量控制

鑒定微生物的診斷試劑

如

革蘭染色、氧化酶試驗試劑等。質量控制試驗與培養基質量控制試驗相似。

試劑用于未知樣品鑒定-選擇正確的標準質控菌-按使用說明上的要求進行質控試驗。第二十七頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養基的質量控制

用于環境監控的培養基應特別小心防護。尤其是用

于關鍵區域監控的培養基最好是終端滅菌，如果不能

采用終端滅菌的培養基，那么在使用前應進行100%

的預培養。防止將外來的污染帶到環境中及避免出現假陽性結果。第二十八頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養基的質量控制

測定PH值每批培養基滅菌后均應測定PH值；在冷卻至室溫

（25℃）進行測定。

除非經驗證表明培養基的PH允許的變化范圍很寬，

否則，培養基的PH的范圍不得超過規定的±0.2。第二十九頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養基的質量控制

一般性狀

-制成平板或分裝于試管的培養基應檢查；容器和蓋

子的破裂，裝量。

-固體培養基因水分流失而造成表面產生裂縫或漣漪。

-其他如溶血，可能冷藏溫度下形成的結晶，大量的汽泡，微生物污染，氧化還原指示劑的狀況，批數

量和有效期的檢查和記錄，培養基的無菌檢查等。第三十頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養基的質量控制

-液體培養基應觀察培養基的顏色，是否有沉淀，

微生物污染，氧化還原指示劑的狀況，批數量

和有效期的檢查和記錄等。第三十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養基的質量控制

培養基的促生長和抑制性能試驗

無菌檢查用培養基使用前應進行適用性試驗

適用性試驗

無菌性試驗

靈敏度檢查第三十二頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養基的質量控制

培養基的靈敏度檢查

菌種金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]

銅綠假單胞菌[CMCC(B)10104]

枯草芽胞桿菌[CMCC(B)63501]

生孢梭菌[CMCC(B)64941]

白色念珠菌[CMCC(F)98001]

黑曲霉[CMCC(F)98003]

第三十三頁，共四十三頁，2022年，8月28日靈敏度檢查培養基接種量試驗菌培養溫度培養基培養時間接種管數裝量

(℃)(天)（支）（支）

金黃色葡萄球菌30～35硫乙醇酸鹽流體3212銅綠假單胞菌3212生孢梭菌3212白色念珠菌23～28改良馬丁529黑曲霉39

①每種菌液接種量含菌小于100cfu②同時做1支空白對照培養基的質量控制第三十四頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養基的質量控制

結果判定空白對照管應無菌生長。

-若加菌的培養基管均生長良好，判該培養基的靈敏度

檢查符合規定。

-若加菌的培養基管不生長或生長不好，判培養基的靈

敏度檢查不符合規定，不能用于無菌試驗，并尋找造

成不合格的原因。培養基的適用性檢查可在供試品的無菌檢查前或與供

試品的無菌檢查同時進行。第三十五頁，共四十三頁，2022年，8月28日

微生物限度檢查(計數培養基)培養基的適用性檢查

微生物限度檢查(計數培養基)

使用前應進行適用性試驗，適用性試驗包括促生長、抑制及指示能力檢查。第三十六頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養基的適用性檢查菌種大腸埃希菌[CMCC（B）26003]金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]白色念珠球菌[CMCC（B）98001]黑曲霉[CMCC（F）98003]第三十七頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養基的適用性檢查

檢查方法菌種培養基加入菌數培養溫度培養時間（cfu）（℃）（h）大腸埃希菌金黃色葡萄球菌營養瓊脂50~10030~3548

枯草芽孢桿菌黑曲霉玫瑰紅鈉瓊脂50~10023~2872

白色念珠球菌白色念珠球菌酵母浸出粉胨50~10023~2872

葡萄糖瓊脂

第三十八頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養基的適用性檢查

-菌懸液制備后在室溫下放置應在2小時內使用。-保存在2～8℃可以在24小時內使用。-黑曲霉孢子懸液可保存在2～8℃，在驗證過

的貯存期內使用。第三十九頁，共四十三頁，2022年，8月28日

結果判定

被檢培養基上的菌落平均數不得小于對照培養基菌落平均數的70%，且菌落形態、大小應與對照培養基上的菌落一致。判該培養基的適用性檢查符合規定。第四十頁，共四十三頁，2022年，8月28日⑶控制菌檢查用培養基的適用性檢查控制菌檢查用培養基的促生長、抑制及指示能力檢查控制菌檢查培養基特性試驗菌株大腸埃希菌膽鹽乳糖促生長能力大腸埃希菌抑制能力金黃色葡萄球菌

MUG促生長能力+指示能力大腸埃希菌曙紅亞甲藍或麥康凱促生長能力+指示能力大腸埃希菌大腸菌群乳糖膽鹽促生長能力大腸埃希菌抑制能力金黃色葡萄球菌乳糖發酵促生長能力+指示能力大腸埃希菌曙紅亞甲藍或麥康凱促生長能力+指示能力大腸埃希菌

第四十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養基的適用性檢查沙門菌營養肉湯促生長能力乙型付傷寒沙門菌四硫磺酸鈉亮綠促生長能力乙型付傷寒沙門菌抑制能力金黃色葡萄球菌膽鹽硫乳瓊脂或沙門、志賀氏屬瓊脂培養基促生長能力+指示能力乙型付傷寒沙門菌曙紅亞甲藍瓊脂或麥康凱瓊脂培養基促生長能力+指示能力乙型付傷寒沙門菌