純鈦不同的表面處理后與成纖維細胞的結合情況分析,口腔科學論文種植體修復已經成為牙列缺失、缺損的常用修復方式方法。植入患者口內的種植體想要獲得良好的穩定性，長期行使功能，不僅需要其與骨組織嚴密整合，還要與軟組織構成牢固的生物學封閉屏障。Puckettetal[1]通過實驗證明采用不同方式方法處理種植體外表會影響成纖維細胞的黏附、增殖。然而，當前國內的研究基本集中在鈦種植體與骨組織的結合，與軟組織結合的研究較少。該實驗通過對純鈦進行不同的外表處理后進行成纖維細胞與材料的共培養，研究細胞在不同處理外表的生長情況，進而討論更有利于與軟組織結合的種植體外表形態。1材料與方式方法1.1實驗材料和設備純鈦棒〔TA2,寶雞和信泰金屬有限公司〕；L-929小鼠成纖維細胞〔南京凱基生物科技發展有限公司〕；-甘油磷酸二鈉鹽五水〔國藥集團化學試劑有限公司〕；乙酸鈣〔南京凱基生物科技發展有限公司〕；優質胎牛血清〔杭州四季青生物工程材料有限公司〕；DMEM〔美國Gibco公司〕；DMSO〔美國Sigma公司〕；微弧氧化相關設備〔西安理工大學自制〕；S-3400NⅡ掃描電子顯微鏡〔日本日立公司〕；超凈工作臺〔SW-CJ-1FD,蘇州凈化設備有限公司〕；CO2培養箱〔日本SANYO公司〕；生物倒置顯微鏡〔日本Olympus公司〕；臺式低速離心機〔中國上海醫療器械股份有限公司醫療設備廠〕；酶標儀〔美國BioTek公司〕。1.2方式方法1.2.1純鈦片的制備及分組將純鈦棒線性切割成直徑為10mm,厚為1mm的圓形鈦片試件，在流水下用耐水砂紙逐級打磨至1200#后，打磨膏拋光，依次用丙酮、無水乙醇、去離子水超聲清洗30min后枯燥備用。根據不同處理方式方法將純鈦片隨機分為光滑組、雙重酸蝕噴砂組〔先在0.5Mpa氣壓下將直徑為200m的Al2O3顆粒對鈦片外表進行均勻的垂直噴射，距離鈦片1cm;噴砂后用去離子水超聲清洗后浸入66%HNO3與40%HF的混合液溶液中10min,取出后去離子水清洗〕、氫氟酸酸蝕噴砂組〔噴砂方式方法與雙重酸蝕噴砂組一樣，試件噴砂后去離子水超聲清洗后浸入質量百分比為0.5%的HF溶液中10min,取出后去離子水清洗〕、微弧氧化組〔以純鈦為陽極，不銹鋼鍋為陰極，以0.04mol/L-甘油磷酸二鈉鹽五水和0.2mol/L乙酸鈣的去離子水溶液為電解液，采用脈沖直流電源進行微弧氧化處理。所有試件在制備完成后經過高溫高壓消毒備用。處理參數為：電壓300V,頻率500Hz,占空比12%,處理時間為3min.處理好后的試件立即用去離子水沖洗、吹干〕。1.2.2試件外表形態觀察將不同處理外表的鈦片置于掃描電子顯微鏡下觀察外表形態。1.3成纖維細胞在不同處理外表生長情況1.3.1成纖維細胞在不同試件外表的黏附將存有L-929小鼠成纖維細胞的凍存管從液氮罐中取出，立即放入37℃恒溫水浴箱中，快速晃動凍存管1~2min后，取出凍存管，用吸管吸出細胞懸液，參加到含培養液的離心管中并以1000r/min離心5min后棄上清液，調整細胞密度，接種于培養瓶中培養。成纖維細胞復蘇后按1∶3的比例進行傳代，選取快速生長期的第4代細胞，0.25%胰蛋白酶消化細胞系后制成1.0105個/ml濃度的單細胞懸液。從4組中各取5片試件分別置于24孔培養板內，接種單細胞懸液，每孔200參加DMEM培養液〔含10%胎牛血清〕2ml,37℃、95%濕度、5%CO2條件下分別培養1、2、4h停止；PBS輕輕漂洗數次，然后每孔參加200lMTT〔5mg/ml〕和800l的DMEM培養液置于37℃條件下孵育4h后，棄掉孔內上清液；參加1ml的DMSO振蕩10min,取24孔培養板內液體按原順序轉移至96孔培養板內，酶標儀在490nm光波長處測其光吸收值。計算各組吸光度均值，進行統計學分析，以x珋s表示。1.3.2成纖維細胞在不同試件外表的增殖效果每組分別取5個試件分別置于24孔培養板內，取第4代成纖維細胞，制成2.0105個/ml濃度的單細胞懸液，接種于試件外表，每孔200l,參加DMEM培養液〔含10%胎牛血清〕2ml,37℃、95%濕度、5%CO2條件下分別培養1、3、5d停止。用MTT法檢測細胞吸光度值。詳細方式方法同1.3.1.1.3.3成纖維細胞在不同試件外表的鋪展從4組中各取3片試件分別置于24孔培養板內，取第4代成纖維細胞，制成4.0105個/ml濃度的單細胞懸液，接種于試件外表，每孔200參加DMEM培養液〔含10%胎牛血清〕2ml,37℃、95%濕度、5%CO2條件下培養24h后取出。掃描電子顯微鏡觀察各組試件外表細胞的鋪展形態。1.4統計學處理使用SPSS20.0軟件對數據進行單因素方差分析，SNK-q檢驗比擬組間差異。2結果2.1掃描電子顯微鏡下觀察各組外表形態光滑組試件外表無明顯凹陷；雙重酸蝕噴砂組試件外表構成不規則的微孔構造，試件外表可見Al2O3顆粒，顆粒形態不規則；氫氟酸酸蝕噴砂組外表構成不規則淺凹坑，少量Al2O3顆粒嵌于外表之中，凹坑的邊緣較銳利，坑壁不規則；微弧氧化組經微弧氧化處理后，外表構成多孔樣構造，構成的孔隙孔徑較均勻，向內凹陷，四周隆起，類似于火山口狀。見圖1.2.2MTT法檢測細胞的黏附結果細胞在培養1、2、4h各時間點，經過外表處理的粗糙外表的吸光度大于光滑外表，差異均有統計學意義〔P0.05〕。粗糙外表的吸光度氫氟酸酸蝕噴砂組雙重酸蝕噴砂組微弧氧化組，差異均有統計學意義〔P0.05〕。2.3MTT法檢測細胞的增殖結果細胞在培養1、3、5d各時間點，經過外表處理的粗糙外表的吸光度大于光滑外表，微弧氧化組的吸光度最高，差異均有統計學意義〔P0.05〕。在1、3d時間點吸光度氫氟酸酸蝕噴砂組雙重酸蝕噴砂組，差異有統計學意義〔P0.05〕；在5d時，雙重酸蝕噴砂組、氫氟酸酸蝕噴砂組的吸光度類似，差異無統計學意義。見圖3.2.4各組試件外表成纖維細胞生長形態光滑組試件外表成纖維細胞呈圓形或橢圓形，偶可見細胞伸出細小偽足；雙重酸蝕噴砂組試件外表成纖維細胞呈圓形或橢圓形，胞體飽滿，伸展良好，有較多偽足伸出，試件外表可見細胞外基質；氫氟酸酸蝕噴砂組試件外表細胞形態與雙重酸蝕噴砂組相類似；微弧氧化組試件外表可見成纖維細胞胞體飽滿，在試件外表良好鋪展，細胞之間伸出大量偽足并互相融合，細胞伸出的偽足伸入試件外表的孔隙之中，錨定在試件外表，與試件嚴密附著，試件外表存在大量細胞外基質。見圖4.3討論隨著技術的不斷改良，當前純鈦種植體修復10年的成功率已到達98.5%[2].人們將研究的重點主要集中于怎樣提高純鈦種植體與骨組織之間的結合[3],忽略了純鈦種植體與軟組織結合的重要性。研究[4]表示清楚種植體與軟組織結合構成良好的生物學封閉能夠保證種植體獲得長久的穩定性。怎樣促進種植體與軟組織之間的結合，進一步提高種植修復的成功率已成為當前研究的熱門之一。本實驗通過比擬純鈦外表不同處理方式方法對成纖維細胞生長的影響，討論更利于軟組織結合的外表處理方式方法。本實驗中外表處理采用噴砂酸蝕法和微弧氧化法，華而不實噴砂酸蝕外表已經成為使用最廣泛的種植體外表。經過噴砂酸蝕處理過的種植體外表可有效促進成骨細胞的黏附與增殖[5].經過微弧氧化處理不僅能夠獲得均勻的氧化膜，而且構成的膜有更好的耐腐蝕性，與試件外表結合更嚴密，不易脫落[6].研究[7]表示清楚微弧氧化有良好地生物相容性，能夠與骨組織構成良好地結合。本實驗通過MTT法檢測顯示微弧氧化較噴砂酸蝕更能促進成纖維細胞早期在試件外表黏附、增殖，進而利于軟組織與種植體的結合。掃描電鏡下觀察，發現成纖維細胞在微弧氧化外表擁有更好的鋪展形態。揣測可能是由于一些不可控因素[8]影響了噴砂酸蝕外表與細胞的結合。微弧氧化技術不僅能夠通過調整工藝參數、電解液的成分制備出具備不同特性的涂層，而且微弧氧化涂層本身所具備的多孔樣構造能夠為其他生物活性因子提供附著空間，使微弧氧化外表具備新的功能。已有學者[9]將抗菌劑鹵代呋喃酮化合物嵌于微弧氧化的微孔中來預防種植體可能出現的相關感染，促進種植體與軟組織的結合。除此之外微弧氧化技術所需操作設備成本較低、操作方式方法簡單、制備效率高，能夠同時制備多個試件，合適商業化大規模生產。這使經微弧氧化處理的種植體應用于臨床成為了可能。當然負荷、冠修復、感染及全身狀況等因素都會影響種植體與軟組織構成良好結合，只要臨床醫師綜合考慮各方面因素才能有效提高使種植體的成功率及長期使用率。以下為參考文獻[1]PuckettSD,LeePP,CiomborDM,etal.Nanotexturedtitaniumsurfacesforenhancingskingrowthontranscutaneousosseointegrat-eddevices[J].ActaBiomater,2018,6〔6〕：2352-62.[2]ManganoFG,ShibliJA,SammonsRL,etal.Short〔8-mm〕loc-king-taperimplantssupportingsinglecrownsinposteriorregion:aprospectiveclinicalstudywith1-to10-yearsoffollow-up[J].ClinOralImplantsRes,2020,25〔8〕：933-40.[3]孫敏，唐旭炎，吳占傲，等。鈦酸鈣涂覆的純鈦片對成骨細胞生長的影響[J].安徽醫科大學學報，2020,48〔11〕：1324-05.[4]InubushiT,TanakaE,RegoEB,etal.Effectsofultrasoundontheproliferationanddifferentiationofcementoblastlineagecells[J].JPeriodontal,2008,79〔10〕：1984-90.[5]賈彥，鄧嘉胤。鈦種植體外表改性的研究現在狀況及應用進展[J].中國組織工程研究與臨床康復，2018,13〔12〕:2321-4.[6]馬臣，王穎慧，曲立杰，等。鈦合金微弧氧化技術的研究現在狀況及瞻望[J].中國陶瓷工業，2007,14〔1〕：46-9.[7]WuJ,LiuZM,ZhaoXH,etal.Improvedbiologicalperformanceofmicroarc-oxidizedlow-modulusTi-24Nb-4Zr-7.9Snalloy[J].JBiomedMaterResBApplBiomater,2018,92〔2〕：298-306.[8]MartinDC,ORyanFS,IndresanoAT,etal.Characteristicsofimplantfailuresinpatientswithahistoryoforalbisphosphonatetherapy[J].JOralMaxillofacSurg,2018,68〔3〕：5