MALDI-TOF檢測(cè)樣品詳細(xì)操作過(guò)程MALDI-TOF檢測(cè)樣品1儀器名稱(chēng)：基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（簡(jiǎn)稱(chēng)MALDI-TOF）儀器外觀1.對(duì)生物大分子分子量的測(cè)定；

2.對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行高通量的鑒定(高純度單一蛋白）；

3.對(duì)有機(jī)小分子化合物分子量的測(cè)定；

4.對(duì)寡核苷酸的分析；

5.對(duì)基因的單核苷酸多態(tài)性的分析。

廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、分子生物學(xué)研究領(lǐng)域。主要功能與應(yīng)用型號(hào)：autoflex儀器名稱(chēng)：基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（簡(jiǎn)稱(chēng)MA21、線性模式飛行距離：1.22米；反射模式飛行距離：2.7米

2、質(zhì)量范圍：可高達(dá)300,000道爾頓或更高

3、分辨率：線性模式：ACTH18-39(m/z=2465.2)，激光打30次，分辨率>4,000反射模式：Somatostatin(m/z=3147),，激光打30次，分辨率>20,0004、靈敏度：1fmolACTH18-39(m/z=2465.2)，激光打20次線性模式信噪比大于10：1；反射模式信噪比大于10：15、質(zhì)量準(zhǔn)確度：線性模式質(zhì)量準(zhǔn)確度≤250ppm。反射模式質(zhì)量準(zhǔn)確度≤60ppm。主要性能指標(biāo)1、線性模式飛行距離：1.22米；反射模式飛行距離：2.73（一）準(zhǔn)備基質(zhì)溶液（Matrixpreparationprotocol）（說(shuō)明：根據(jù)樣品類(lèi)型選用合適的基質(zhì)，此處的HCCA適于肽類(lèi)和小分子蛋白）ProduceasaturatedsolutionofHCCAin(acetonitrile:0.1%TFA,1:2v/v)MixsolutioninultrasonicdeviceSpindownexcessmatrixinacentrifuge(5minat14000RpM)andusetheclearsupernatant一、樣品制備（一）準(zhǔn)備基質(zhì)溶液（Matrixpreparation4（二）手動(dòng)點(diǎn)靶（PreparationontoMALDITOF-Target）

干點(diǎn)法（Drieddropletmethod）：最為常用的一種方法MixequalvolumesofsamplewithHCCAApply1ulontothetarget按圖示模式點(diǎn)靶Dryatroomtemperature標(biāo)樣樣樣樣樣樣樣樣標(biāo)樣樣樣樣樣樣樣樣（二）手動(dòng)點(diǎn)靶（PreparationontoMALD5“自動(dòng)點(diǎn)靶設(shè)備樣品“靶”（MALDITOF-Target）“自動(dòng)點(diǎn)靶設(shè)備樣品“靶”（MALDITOF-Targe6飛行質(zhì)譜儀檢測(cè)樣品的詳細(xì)操作步驟課件7四、譜圖解析蛋白鑒定樣品：進(jìn)入下一步網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫(kù)檢索四、譜圖解析蛋白鑒定樣品：進(jìn)入下一步網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫(kù)檢索8下面介紹：“肽指紋譜”網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫(kù)檢索兩種方法：一、登陸mascot網(wǎng)站，直接調(diào)用.peaklist文件，進(jìn)行檢索。二、用biotools軟件，打開(kāi)樣品的原始譜圖，設(shè)定參數(shù)，重新標(biāo)峰，自動(dòng)鏈接mascot網(wǎng)頁(yè)，進(jìn)行檢索。將檢索到的結(jié)果與原始譜圖比對(duì)，檢查峰匹配情況。此法可以省略步驟（三、標(biāo)峰）

下面介紹：“肽指紋譜”網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫(kù)檢索兩種方法：9登陸網(wǎng)站點(diǎn)擊

第一種方法登陸網(wǎng)站點(diǎn)擊第一種方法10設(shè)定各參數(shù)調(diào)用.peaklist文件點(diǎn)擊開(kāi)始設(shè)定各參數(shù)調(diào)用.peaklist文件點(diǎn)擊開(kāi)始11網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫(kù)檢索結(jié)果分值>76的區(qū)域網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫(kù)檢索結(jié)果分值>76的區(qū)域12根據(jù)樣品來(lái)源確定目標(biāo)蛋白點(diǎn)擊選中的蛋白鏈接，則顯示氨基酸序列等詳細(xì)信息根據(jù)樣品來(lái)源確定目標(biāo)蛋白點(diǎn)擊選中的蛋白鏈接，則顯示氨基酸序列13蛋白序列信息理論與檢測(cè)值比較蛋白序列信息理論與檢測(cè)值比較14檢索結(jié)果檢索結(jié)果15選中目標(biāo)蛋白后，點(diǎn)擊gethit(s)選中目標(biāo)蛋白后，點(diǎn)擊gethit(s)16可通過(guò)譜圖，直觀地查看峰的匹配情況Gethit(s)后顯示的頁(yè)面可通過(guò)譜圖，直觀地查看峰的匹配情況Gethit(s)后顯示17五、校準(zhǔn)樣品譜圖校準(zhǔn)樣品有四種：1、peptidecalibrationstandard(~1000Da-~4000Da)簡(jiǎn)寫(xiě)為：pep_cal2、proteincalibrationstandard(~3000Da-~25000Da)簡(jiǎn)寫(xiě)為：proⅠ_cal3、proteincalibrationstandardⅡ(~20000Da-~70000Da)簡(jiǎn)寫(xiě)為：proⅡ_cal4、oligonucleotidecalibrationstandard(~3000Da-~10000Da)簡(jiǎn)寫(xiě)為：oligo_cal五、校準(zhǔn)樣品譜圖校準(zhǔn)樣品有四種：18pep_cal的譜圖pep_cal的譜圖19proⅠ_cal的譜圖proⅠ_cal的譜圖20proⅡ_cal的譜圖proⅡ_cal的譜圖21oligo_cal的譜圖oligo_cal的譜圖22以下幾張譜圖供大家參考。六、舉例以下幾張譜圖供大家參考。六、舉例23肽譜干凈無(wú)雜質(zhì)，清晰易準(zhǔn)確標(biāo)峰，檢索結(jié)果得分值高肽譜干凈無(wú)雜質(zhì)，清晰易準(zhǔn)確標(biāo)峰，檢索結(jié)果得分值高24肽譜干凈無(wú)雜質(zhì)，清晰易準(zhǔn)確標(biāo)峰，檢索結(jié)果得分值高肽譜干凈無(wú)雜質(zhì)，清晰易準(zhǔn)確標(biāo)峰，檢索結(jié)果得分值高25角蛋白污染嚴(yán)重角蛋白污染嚴(yán)重26一組間隔均勻的峰，為質(zhì)量較差的樣品容器導(dǎo)致的污染，并嚴(yán)重抑制了樣品的電離。一組間隔均勻的峰，為質(zhì)量較差的樣品容器導(dǎo)致的污染，并嚴(yán)重抑制27較臟的樣品，檢測(cè)不到肽峰較臟的樣品，檢測(cè)不到肽峰28七、特別說(shuō)明

就象DNA測(cè)序儀的檢測(cè)結(jié)果好壞與模板、測(cè)序純化反應(yīng)等有關(guān)一樣，MALDI-TOF檢測(cè)結(jié)果主要取決于樣品前期處理的好壞.一方面質(zhì)量較差的容器、溶劑和角蛋白污染等會(huì)導(dǎo)致譜圖中含有大量的假樣品峰.另一方面，樣品中鹽的存在會(huì)抑制樣品的離子化，最終導(dǎo)致檢測(cè)不到樣品峰，所以要嚴(yán)格操作過(guò)程，控制好樣品中的含鹽量。七、特別說(shuō)明就象DNA測(cè)序儀的檢測(cè)結(jié)果好壞與29質(zhì)譜專(zhuān)家建議：跑膠、切膠、酶切、除鹽等操作過(guò)程中，盡量戴上手套、口罩、頭帽等，并選用較好的實(shí)驗(yàn)材料；不要使用不揮發(fā)性鹽，揮發(fā)性鹽含量控制在20mM以下，最好做Ziptip除鹽處理。質(zhì)譜專(zhuān)家建議：跑膠、切膠、酶切、除鹽等操作過(guò)程中，盡量戴上手30MALDI-TOF檢測(cè)樣品詳細(xì)操作過(guò)程MALDI-TOF檢測(cè)樣品31儀器名稱(chēng)：基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（簡(jiǎn)稱(chēng)MALDI-TOF）儀器外觀1.對(duì)生物大分子分子量的測(cè)定；

2.對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行高通量的鑒定(高純度單一蛋白）；

3.對(duì)有機(jī)小分子化合物分子量的測(cè)定；

4.對(duì)寡核苷酸的分析；

5.對(duì)基因的單核苷酸多態(tài)性的分析。

廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、分子生物學(xué)研究領(lǐng)域。主要功能與應(yīng)用型號(hào)：autoflex儀器名稱(chēng)：基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（簡(jiǎn)稱(chēng)MA321、線性模式飛行距離：1.22米；反射模式飛行距離：2.7米

2、質(zhì)量范圍：可高達(dá)300,000道爾頓或更高

3、分辨率：線性模式：ACTH18-39(m/z=2465.2)，激光打30次，分辨率>4,000反射模式：Somatostatin(m/z=3147),，激光打30次，分辨率>20,0004、靈敏度：1fmolACTH18-39(m/z=2465.2)，激光打20次線性模式信噪比大于10：1；反射模式信噪比大于10：15、質(zhì)量準(zhǔn)確度：線性模式質(zhì)量準(zhǔn)確度≤250ppm。反射模式質(zhì)量準(zhǔn)確度≤60ppm。主要性能指標(biāo)1、線性模式飛行距離：1.22米；反射模式飛行距離：2.733（一）準(zhǔn)備基質(zhì)溶液（Matrixpreparationprotocol）（說(shuō)明：根據(jù)樣品類(lèi)型選用合適的基質(zhì)，此處的HCCA適于肽類(lèi)和小分子蛋白）ProduceasaturatedsolutionofHCCAin(acetonitrile:0.1%TFA,1:2v/v)MixsolutioninultrasonicdeviceSpindownexcessmatrixinacentrifuge(5minat14000RpM)andusetheclearsupernatant一、樣品制備（一）準(zhǔn)備基質(zhì)溶液（Matrixpreparation34（二）手動(dòng)點(diǎn)靶（PreparationontoMALDITOF-Target）

干點(diǎn)法（Drieddropletmethod）：最為常用的一種方法MixequalvolumesofsamplewithHCCAApply1ulontothetarget按圖示模式點(diǎn)靶Dryatroomtemperature標(biāo)樣樣樣樣樣樣樣樣標(biāo)樣樣樣樣樣樣樣樣（二）手動(dòng)點(diǎn)靶（PreparationontoMALD35“自動(dòng)點(diǎn)靶設(shè)備樣品“靶”（MALDITOF-Target）“自動(dòng)點(diǎn)靶設(shè)備樣品“靶”（MALDITOF-Targe36飛行質(zhì)譜儀檢測(cè)樣品的詳細(xì)操作步驟課件37四、譜圖解析蛋白鑒定樣品：進(jìn)入下一步網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫(kù)檢索四、譜圖解析蛋白鑒定樣品：進(jìn)入下一步網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫(kù)檢索38下面介紹：“肽指紋譜”網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫(kù)檢索兩種方法：一、登陸mascot網(wǎng)站，直接調(diào)用.peaklist文件，進(jìn)行檢索。二、用biotools軟件，打開(kāi)樣品的原始譜圖，設(shè)定參數(shù)，重新標(biāo)峰，自動(dòng)鏈接mascot網(wǎng)頁(yè)，進(jìn)行檢索。將檢索到的結(jié)果與原始譜圖比對(duì)，檢查峰匹配情況。此法可以省略步驟（三、標(biāo)峰）

下面介紹：“肽指紋譜”網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫(kù)檢索兩種方法：39登陸網(wǎng)站點(diǎn)擊

第一種方法登陸網(wǎng)站點(diǎn)擊第一種方法40設(shè)定各參數(shù)調(diào)用.peaklist文件點(diǎn)擊開(kāi)始設(shè)定各參數(shù)調(diào)用.peaklist文件點(diǎn)擊開(kāi)始41網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫(kù)檢索結(jié)果分值>76的區(qū)域網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫(kù)檢索結(jié)果分值>76的區(qū)域42根據(jù)樣品來(lái)源確定目標(biāo)蛋白點(diǎn)擊選中的蛋白鏈接，則顯示氨基酸序列等詳細(xì)信息根據(jù)樣品來(lái)源確定目標(biāo)蛋白點(diǎn)擊選中的蛋白鏈接，則顯示氨基酸序列43蛋白序列信息理論與檢測(cè)值比較蛋白序列信息理論與檢測(cè)值比較44檢索結(jié)果檢索結(jié)果45選中目標(biāo)蛋白后，點(diǎn)擊gethit(s)選中目標(biāo)蛋白后，點(diǎn)擊gethit(s)46可通過(guò)譜圖，直觀地查看峰的匹配情況Gethit(s)后顯示的頁(yè)面可通過(guò)譜圖，直觀地查看峰的匹配情況Gethit(s)后顯示47五、校準(zhǔn)樣品譜圖校準(zhǔn)樣品有四種：1、peptidecalibrationstandard(~1000Da-~4000Da)簡(jiǎn)寫(xiě)為：pep_cal2、proteincalibrationstandard(~3000Da-~25000Da)簡(jiǎn)寫(xiě)為：proⅠ_cal3、proteincalibrationstandardⅡ(~20000Da-~70000Da)簡(jiǎn)寫(xiě)為：proⅡ_cal4、oligonucleotidecalibrationstandard(~3000Da-~10000Da)簡(jiǎn)寫(xiě)為：oligo_cal五、校準(zhǔn)樣品譜圖校準(zhǔn)樣品有四種：48pep_cal的譜圖pep_cal的譜圖49proⅠ_cal的譜圖proⅠ_cal的譜圖50proⅡ_cal的譜圖proⅡ_cal的譜圖51oligo_cal的譜圖oligo_cal的譜圖52以下幾張譜圖供大家參考。六、舉