本科畢業(yè)論文論文題目：紅簍菌屬一株光合細菌的分離與鑒定姓名：陳婷學號：2011151213院（系、部）：化學工程與生物技術(shù)學院專業(yè)：生物科學班級：11級生科本1指導教師：李冰講師完成時間：2015年4月邢臺學院2015屆本科畢業(yè)論文⑤通過瓊脂糖凝膠電泳鑒定克隆DNA大小并記錄結(jié)果3.6測序公司測序及16sDNA序列的比對將克隆菌液送往上海生工測序公司測序，然后將測序結(jié)果用MEGA5.10軟件完成分子系統(tǒng)學分析。4實驗結(jié)果與分析4.1基因組DNA、PCR產(chǎn)物DNA目的片段回收凝膠電泳結(jié)果紅簍菌提取的DNA經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳的檢測結(jié)果：2000100075020001000750500250100bp1234圖1.XY-1基因組DNA凝膠電泳圖2000200015000750500250100圖2.二16SsrDNA擴增凝膠電泳圖20001200015000750800500700250500300200100圖三3.DNA目的片段回收凝膠電泳圖20001200015000750500250100圖4.四菌落PCR凝膠電泳圖從電泳結(jié)果中得知，提取DNA的大小及擴增后產(chǎn)物與標準分子量比對顯示，確認條帶為所需條帶。4.216srDNA序列測定分析及系統(tǒng)發(fā)育學地位的確定測序結(jié)果在EZTaxon網(wǎng)站進行比對，從數(shù)據(jù)庫檢出與所測序列同源性較高的序列，初步鑒定基因結(jié)果。根據(jù)對比結(jié)果，用MEGA5.10軟件中的Neighbor-joining完成分子系統(tǒng)學分析，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹體現(xiàn)菌株間的親緣關(guān)系，鑒定了菌種為紅簍菌屬。圖5.16SrDNA序列比對部分結(jié)果從比對結(jié)果我們可以得到與供試菌相似性最高的前8種菌，系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系如下：圖6.菌株XY-1的16SrDNA全序列分析系統(tǒng)發(fā)育樹5討論紅簍菌屬細胞形狀為弧形至螺旋形，與許多其他弧形菌和螺旋形菌形狀相似，很難辨別。但通過PCR技術(shù)與測序技術(shù)相結(jié)合，測序結(jié)果與BLAST已知序列進行比對分析，達到鑒定的目的；由于細菌的16srDNA的保守性非常高，所以分辨出相近種或是同一種內(nèi)的不同菌株還是有一定的難度。從16SrDNA序列比對結(jié)果可以知道，YX-1菌株為紅簍菌株光合細菌。目前，紅簍菌屬只有兩種菌，分別為世紀紅簍菌與北京紅簍菌。從系統(tǒng)發(fā)育樹上看，YX-1與北京紅簍菌（Rhodocistapekingensis）聚為一簇，二者親緣關(guān)系最近，16SrDNA序列相似性達到99.42%。本研究比對結(jié)果顯示，該菌與世紀紅簍菌的相似性最高，達到%，但試驗過程中發(fā)現(xiàn)菌株二者XY-1與北京紅簍菌3-p(T)在碳源及生長因子利用上存在一定差異。由于時間有限，該菌株是和北京紅簍菌同種，還是否為紅簍菌屬中一新的模式種，還有待進一步研究。若想鑒定到具體種類，還需進行核酸雜交，并結(jié)合菌株的生理生化特性如碳源、氮源、有機酸，生長因子等進行近一步探究。參考文獻[1]張德民，黃志勇，楊惠芳.紫色非硫細菌Rhodocista屬一新分離株的鑒定及其系統(tǒng)學研究[J].微生物學報，2000，40（1）：14-20[2]張信娣，史永軍，陳銀科.光合細菌和有機肥對土壤主要微生物類群的影響[J].中國土壤與肥料，2007（3）：59-62[3]王淑玲，徐賀.光合細菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應用[J].黑龍江水產(chǎn)，2014（3）：14-17[4]崔戰(zhàn)利.光合細菌基本特性及應用價值[J].黑龍江八一農(nóng)墾大學學報，1993，11（1）：20-25[5]沈德新，封志純，杜江.細菌DNA提取方法比較[J].中原醫(yī)刊，2004，31（10）：20-22[6]魏群.分子生物學指導（第二版）[M].北京：高等教育出版社，2007.79-80[7]王威，楊華.大腸桿菌感受態(tài)制備與轉(zhuǎn)化實驗[J].畢節(jié)學院學報，2009，4（27）：83-87謝辭隨著本科論文的落筆，我的大學生活也即將結(jié)束。畢業(yè)論文是我大學四年學習成果的結(jié)晶，也是這四年各方面能力的匯報。我的畢業(yè)論文能夠順利完成，得益于許多人的幫助，在此我由衷的感謝。首先是我的指導老師李冰老師，在實驗進行的時候，她不惜自己的時間陪我一起做實驗，失敗時她安慰我，幫我分析失敗的原因，幫我改變方案等等，在實驗思路、方法和操作上給了我很多的指導和幫助，如果沒有李老師的這般指導我不可能這么順利完成論文實驗。在論文寫作期間，老師耐心的指導，給與了很多的經(jīng)驗與意見。在此我向親愛的李冰老師表示衷心的感謝和無比的敬意！另外，在進行試驗的過程中，我的同學李開全、劉