設備清洗分析方法驗證王昭瓊2013.06設備清洗分析方法驗證王昭瓊1問題：設備清潔分析方法驗證主要用到的用具、溶劑、儀器？為保證結果準確，這些需不需要驗證？最先應該從哪開始驗證？問題：設備清潔分析方法驗證主要用到的用具、溶劑、儀器？2總論：設備清潔驗證過程中使用的儀器、試劑、檢驗方法必須是經過驗證或確認，并符合要求。總論：設備清潔驗證過程中使用的儀器、試劑、檢驗方法必須是經過3清潔分析方法回收率驗證清潔分析方法回收率驗證4設備清洗分析方法回收率驗證主要包括兩大類取樣方法驗證檢驗方法驗證設備清洗分析方法回收率驗證主要包括兩大類取樣方法驗證5取樣方法驗證設備清洗劑的選擇原則：1.清洗劑應能有效溶解殘留物，不腐蝕設備且本身易清除。2.應考慮安全無毒害，能用低毒溶解的絕不用高毒或劇毒（如，可以用醇溶解的殘留，在清洗劑的選擇上，一般首選乙醇，不能首選甲醇或其他醇類溶劑）3.在考慮環境安全的基礎上，應選擇對環境無污染或易被無害處理的清洗劑。4.選擇的清洗劑的成分應明確，單一。（家用清洗劑一般不要用，因七成分復雜，未知成分太多）4.滿足以上要求的前提下應盡量廉價。取樣方法驗證設備清洗劑的選擇原則：6取樣方法驗證棉簽取樣方法驗證1.首先是確定取樣棉簽、溶解用溶劑、取樣員操作。2.以上情況確定后，制定一定的取樣操作方法進行回收率試驗，以證明用指定品牌的棉簽和溶劑按規定的擦拭方法進行取樣回收率驗證，符合要求。棉簽的品牌和產地應在驗證方案中明確，溶劑應根據需清洗的殘留成分而定，（如，在酸堿中能溶解的殘留，一般可以采用用水或酸堿作為擦拭溶劑）取樣方法驗證棉簽取樣方法驗證7取樣方法驗證3.棉簽取樣回收率驗證步驟第一步：先做溶劑溶解待測組分的回收率（待測組分的濃度應參照與待測主成分相同的對照溶液的濃度確定）第二部：做棉簽吸附回收率的驗證（將已知濃度的對照溶液的一定體積（100ul）滴定至待選擇的棉簽上的，干燥后，將棉簽放置于含一定體積（5ml）的試劑中，超聲以加速溶出，然后取該溶液進行化驗，計算棉簽的吸附回收率試驗。）備注：這里的取一定體積的標準溶液，溶解到一定體積的溶液中，這個參數的確定應在滿足分析方法的線性范圍內。取樣方法驗證3.棉簽取樣回收率驗證步驟8取樣方法驗證第三部：擦拭次數的驗證（去經驗證符合要求的棉簽用選定的擦拭溶劑潤濕擦拭棉簽，按擦試圖進行擦拭，次數可定為1次、2次、3次。每個擦拭次數一個樣品）【準備一個與設備表面材質相同的板材；在板材上劃出100mm×100mm的區域；將5倍限度量的待檢測物溶液，定量裝入經校驗的微量注射器中（一般選用經校驗的氣相進樣針）；將其盡量均勻地涂布在100mm×100mm的區域內；自然干燥或用電吹風吹干板材；用選定的擦拭溶劑濕潤擦拭棉簽按擦拭圖進行擦拭次數取樣。重復上述操作1次、2次、3次；將擦拭棉簽分別放入棉簽管中，加入預定溶劑5ml，超聲溶解；用經驗證或確認的檢驗方法檢驗，計算回收率和回收率的RSD】4.接受標準：總回收率一般不低于70%（企業可以根據實際情況確定），多次取樣回收率的標準偏差應不大于20%取樣方法驗證第三部：擦拭次數的驗證（去經驗證符合要求的棉簽用9取樣方法驗證取樣方法驗證10取樣方法驗證淋洗取樣方法驗證1.首先確定淋洗溶劑或淋洗水、淋洗速度：淋洗溶劑的溶解度：選取淋洗溶劑時，保證最大程度的能使待測組分全部溶解到淋洗溶劑中。淋洗溶劑不與設備表面發生相溶，而且易于清除；淋洗速度的確認：主要以生產長期積累經驗而定。2.以上情況確定后，制定一定的取樣操作方法進行回收率試驗，以證明用指定淋洗溶劑會淋洗水按規定的淋洗方法進行取樣回收率驗證，符合要求。3.樣品一般是濃縮后按分析方法處理后測定。但要注意待測組分的熱敏感性。取樣方法驗證淋洗取樣方法驗證11取樣方法驗證4.最終淋洗法取樣回收率驗證步驟第一步：選擇同生產設備材質相同，形態相似的管道。第二步：在管道內表面涂抹一定量（涂抹量取決于分析方法測量范圍的標準化合物，待干燥后，使用一定體積的淋洗溶劑采用一定的速度沖洗管路。第三步：在管道的下游末端出口處置一干凈的體積足夠大的容器，收集最后一次的全部淋洗液，待沖洗完成后，吸取一定體積的均勻的淋洗液樣品測試，并計算回收率。5.接受標準：5.1回收率通常應不低于95%。5.2外觀檢查即清洗后的淋洗溶液樣品同淋洗前的淋洗溶液做視覺比較檢查，確定是否有顏色差異和異物存在；如果有上述現象發生，可直接判定樣品不合格。取樣方法驗證4.最終淋洗法取樣回收率驗證步驟12檢驗方法驗證限度方法驗證定量方法驗證在清洗分析方法驗證中一并開展檢驗方法驗證限度方法驗證13清潔分析方法的驗證清潔分析方法的驗證14分析方法：是為完成某一檢測項目而設定和建立的測試方法，一般包括分析儀器及儀器參數、試劑、系統適用性試驗、供試品溶液制備、對照品溶液制備、測定、計算及測試結果的報告等。分析方法：是為完成某一檢測項目而設定和建立的測試方法，一般包15分析放驗證的前提條件：儀器、人員、物料、方法、環境。分析放驗證的前提條件：儀器、人員、物料、方法、環境。16分析方法的驗證內容：根據不同的分析方法，主要包括以下內容。1.專屬性：因活性成分在樣品中含量很低，在進行專屬性驗證時，無需考慮正常樣品中的雜質、降解產物的影響，只需考慮輔料及空白溶劑的影響。1.1專屬性檢查需要注意的問題：1.1.41波長的選擇1.1.2每次試驗時必須運行空白樣品1.1.3試劑、玻璃容器、流動相和過濾介質可能會影響方法的專屬性。1.1.4HPLC進樣順序空白溶劑→輔料混合物→標準溶液空白溶劑→標準溶液→進樣系統清洗→輔料混合物分析方法的驗證內容：根據不同的分析方法，主要包括以下內容。171.2接受標準1.2.1潛在的干擾成分不會對方法的性能產生負作用。對于色譜檢測方法，雜志之間、雜質與主峰之間的分離度≥1.01.2.2空白對照應無干擾。1.2接受標準182線性：系指在設計的測定范圍內，檢測結果與供試品中被分析物的濃度直接呈線性關系的程度。線性是定量測定基礎，所以定量分析方法需要進行線性驗證而定性清洗分析方法無需做線性驗證。2.1線性驗證一般制備5個濃度的溶液（通常選取限度的50%、80%、100%、120%和150%5個濃度，每個濃度制備三個樣品）2.2線性的接受標準：線性的相關系數不低于0.98.2線性：系指在設計的測定范圍內，檢測結果與供試品中被分析物的193.范圍：系指能達到一定精密度、準確度和線性，測試方法使用的高低限濃度或量的區間；3.1范圍一般采用線性等試驗的數據結果進行統計分析計算。3.2范圍的接受標準：通常定量清洗分析方法范圍為測試濃度的50%-150%。3.范圍：系指能達到一定精密度、準確度和線性，測試方法使用的204.精密度：系指在規定的條件下，從同一均勻樣品中，經多次取樣測定所的結果之間的接近程度。一般用偏差（d）、標準偏差（SD）、相對標準偏差（RSD）。4.1精密度一般用重復性、中間精密度和重現性表示4.精密度：系指在規定的條件下，從同一均勻樣品中，經多次取樣21精密度4.1.1重復性：系指在同樣的操作條件下，在較短時間間隔（當天之內），由同一分析人員測定所得結果的接近程度。在方法規定的線性范圍內至少做3個濃度9個樣品（80%、100%和120%）或在100%的試驗濃度，至少測試6次。4.1.2中間精密度：系指同一實驗室不同日期、不同儀器、不同人員對同一樣品、采用同一方法處理樣品所得結果之間的接近程度。（同一批樣品每位分析員準備6份進行測量，計算兩人之間平均值的差異）精密度4.1.1重復性：系指在同樣的操作條件下，在較短時間間22精密度4.1.3重現性：（清潔驗證試驗采取的方法不做，因此方法一般不作為法定分析方法收載。4.2精密度接受標準4.2.1重復性：定量清洗分析方法驗證時，活性成分的RSD≤10%。4.2.2中間精密度：定量清洗分析方法驗證時，平均六份樣品的RSD≤10%。兩人之間的平均值之差的相對值≤10%。精密度4.1.3重現性：（清潔驗證試驗采取的方法不做，因此方235.檢測限和定量限5.1檢測限系指在確定的試驗條件下，試樣中被測物能被檢測出的最小量；定量限系指在確定的試驗條件下，試樣中被測物能被準確測定的最小量，其測定結果應具有一定的準確度和精密度。5.檢測限和定量限245.2雜質限度檢查是應驗證其方法的檢測限；雜質定量檢查時應驗證其方法的定量限。2.5.3檢測限和定量限用信噪比表示。信噪比的測定時通過比較含已知低濃度被分析物的樣品與空白樣品的測試信號，確定被分析物可被確切地檢測的最小濃度，典型的信噪比為3:1；對于定量限典型的信噪比為10:1.5.2雜質限度檢查是應驗證其方法的檢測限；雜質定量檢查時應驗256.樣品溶液的穩定性：通常樣品室溫或5℃冰箱冷藏放置24-72小時，測定結果應不低于初始值的90%6.1試驗方法：6.1.1按照待驗證的清洗分析方法中規定的標準品溶液制備方法，平行制備六份，進樣分析其含量。6.1.2室溫或冰箱冷藏一定時間后，重新配置兩份標準品溶液，將放置一段時間的標準品當作樣品進行分析，以確定其降解度。6.樣品溶液的穩定性：通常樣品室溫或5℃冰箱冷藏放置24-726設備清洗分析方法驗證王昭瓊2013.06設備清洗分析方法驗證王昭瓊27問題：設備清潔分析方法驗證主要用到的用具、溶劑、儀器？為保證結果準確，這些需不需要驗證？最先應該從哪開始驗證？問題：設備清潔分析方法驗證主要用到的用具、溶劑、儀器？28總論：設備清潔驗證過程中使用的儀器、試劑、檢驗方法必須是經過驗證或確認，并符合要求。總論：設備清潔驗證過程中使用的儀器、試劑、檢驗方法必須是經過29清潔分析方法回收率驗證清潔分析方法回收率驗證30設備清洗分析方法回收率驗證主要包括兩大類取樣方法驗證檢驗方法驗證設備清洗分析方法回收率驗證主要包括兩大類取樣方法驗證31取樣方法驗證設備清洗劑的選擇原則：1.清洗劑應能有效溶解殘留物，不腐蝕設備且本身易清除。2.應考慮安全無毒害，能用低毒溶解的絕不用高毒或劇毒（如，可以用醇溶解的殘留，在清洗劑的選擇上，一般首選乙醇，不能首選甲醇或其他醇類溶劑）3.在考慮環境安全的基礎上，應選擇對環境無污染或易被無害處理的清洗劑。4.選擇的清洗劑的成分應明確，單一。（家用清洗劑一般不要用，因七成分復雜，未知成分太多）4.滿足以上要求的前提下應盡量廉價。取樣方法驗證設備清洗劑的選擇原則：32取樣方法驗證棉簽取樣方法驗證1.首先是確定取樣棉簽、溶解用溶劑、取樣員操作。2.以上情況確定后，制定一定的取樣操作方法進行回收率試驗，以證明用指定品牌的棉簽和溶劑按規定的擦拭方法進行取樣回收率驗證，符合要求。棉簽的品牌和產地應在驗證方案中明確，溶劑應根據需清洗的殘留成分而定，（如，在酸堿中能溶解的殘留，一般可以采用用水或酸堿作為擦拭溶劑）取樣方法驗證棉簽取樣方法驗證33取樣方法驗證3.棉簽取樣回收率驗證步驟第一步：先做溶劑溶解待測組分的回收率（待測組分的濃度應參照與待測主成分相同的對照溶液的濃度確定）第二部：做棉簽吸附回收率的驗證（將已知濃度的對照溶液的一定體積（100ul）滴定至待選擇的棉簽上的，干燥后，將棉簽放置于含一定體積（5ml）的試劑中，超聲以加速溶出，然后取該溶液進行化驗，計算棉簽的吸附回收率試驗。）備注：這里的取一定體積的標準溶液，溶解到一定體積的溶液中，這個參數的確定應在滿足分析方法的線性范圍內。取樣方法驗證3.棉簽取樣回收率驗證步驟34取樣方法驗證第三部：擦拭次數的驗證（去經驗證符合要求的棉簽用選定的擦拭溶劑潤濕擦拭棉簽，按擦試圖進行擦拭，次數可定為1次、2次、3次。每個擦拭次數一個樣品）【準備一個與設備表面材質相同的板材；在板材上劃出100mm×100mm的區域；將5倍限度量的待檢測物溶液，定量裝入經校驗的微量注射器中（一般選用經校驗的氣相進樣針）；將其盡量均勻地涂布在100mm×100mm的區域內；自然干燥或用電吹風吹干板材；用選定的擦拭溶劑濕潤擦拭棉簽按擦拭圖進行擦拭次數取樣。重復上述操作1次、2次、3次；將擦拭棉簽分別放入棉簽管中，加入預定溶劑5ml，超聲溶解；用經驗證或確認的檢驗方法檢驗，計算回收率和回收率的RSD】4.接受標準：總回收率一般不低于70%（企業可以根據實際情況確定），多次取樣回收率的標準偏差應不大于20%取樣方法驗證第三部：擦拭次數的驗證（去經驗證符合要求的棉簽用35取樣方法驗證取樣方法驗證36取樣方法驗證淋洗取樣方法驗證1.首先確定淋洗溶劑或淋洗水、淋洗速度：淋洗溶劑的溶解度：選取淋洗溶劑時，保證最大程度的能使待測組分全部溶解到淋洗溶劑中。淋洗溶劑不與設備表面發生相溶，而且易于清除；淋洗速度的確認：主要以生產長期積累經驗而定。2.以上情況確定后，制定一定的取樣操作方法進行回收率試驗，以證明用指定淋洗溶劑會淋洗水按規定的淋洗方法進行取樣回收率驗證，符合要求。3.樣品一般是濃縮后按分析方法處理后測定。但要注意待測組分的熱敏感性。取樣方法驗證淋洗取樣方法驗證37取樣方法驗證4.最終淋洗法取樣回收率驗證步驟第一步：選擇同生產設備材質相同，形態相似的管道。第二步：在管道內表面涂抹一定量（涂抹量取決于分析方法測量范圍的標準化合物，待干燥后，使用一定體積的淋洗溶劑采用一定的速度沖洗管路。第三步：在管道的下游末端出口處置一干凈的體積足夠大的容器，收集最后一次的全部淋洗液，待沖洗完成后，吸取一定體積的均勻的淋洗液樣品測試，并計算回收率。5.接受標準：5.1回收率通常應不低于95%。5.2外觀檢查即清洗后的淋洗溶液樣品同淋洗前的淋洗溶液做視覺比較檢查，確定是否有顏色差異和異物存在；如果有上述現象發生，可直接判定樣品不合格。取樣方法驗證4.最終淋洗法取樣回收率驗證步驟38檢驗方法驗證限度方法驗證定量方法驗證在清洗分析方法驗證中一并開展檢驗方法驗證限度方法驗證39清潔分析方法的驗證清潔分析方法的驗證40分析方法：是為完成某一檢測項目而設定和建立的測試方法，一般包括分析儀器及儀器參數、試劑、系統適用性試驗、供試品溶液制備、對照品溶液制備、測定、計算及測試結果的報告等。分析方法：是為完成某一檢測項目而設定和建立的測試方法，一般包41分析放驗證的前提條件：儀器、人員、物料、方法、環境。分析放驗證的前提條件：儀器、人員、物料、方法、環境。42分析方法的驗證內容：根據不同的分析方法，主要包括以下內容。1.專屬性：因活性成分在樣品中含量很低，在進行專屬性驗證時，無需考慮正常樣品中的雜質、降解產物的影響，只需考慮輔料及空白溶劑的影響。1.1專屬性檢查需要注意的問題：1.1.41波長的選擇1.1.2每次試驗時必須運行空白樣品1.1.3試劑、玻璃容器、流動相和過濾介質可能會影響方法的專屬性。1.1.4HPLC進樣順序空白溶劑→輔料混合物→標準溶液空白溶劑→標準溶液→進樣系統清洗→輔料混合物分析方法的驗證內容：根據不同的分析方法，主要包括以下內容。431.2接受標準1.2.1潛在的干擾成分不會對方法的性能產生負作用。對于色譜檢測方法，雜志之間、雜質與主峰之間的分離度≥1.01.2.2空白對照應無干擾。1.2接受標準442線性：系指在設計的測定范圍內，檢測結果與供試品中被分析物的濃度直接呈線性關系的程度。線性是定量測定基礎，所以定量分析方法需要進行線性驗證而定性清洗分析方法無需做線性驗證。2.1線性驗證一般制備5個濃度的溶液（通常選取限度的50%、80%、100%、120%和150%5個濃度，每個濃度制備三個樣品）2.2線性的接受標準：線性的相關系數不低于0.98.2線性：系指在設計的測定范圍內，檢測結果與供試品中被分析物的453.范圍：系指能達到一定精密度、準確度和線性，測試方法使用的高低限濃度或量的區間；3.1范圍一般采用線性等試驗的數據結果進行統計分析計算。3.2范圍的接受標準：通常定量清洗分析方法范圍為測試濃度的50%-150%。3.范圍：系指能達到一定精密度、準確度和線性，測試方法使用的464.精密度：系指在規定的條件下，從同一均勻樣品中，經多次取樣測定所的結果之間的接近程度。一般用偏差（d）、標準偏差（SD）、相對標準偏差（RSD）。4.1精密度一般用重復性、中間精密度和重現性表示4.精密度：系指在規定的條件下，從同一均勻樣品中，經多次取樣47精密度4.1.1重復性：系指在同樣的操作條件下，在較短時間間隔（當天之內），由同一分析人員測定所得結果的接近程度。在方法規定的線性范圍內至少做3個濃度9個樣品（80%、100%和120%）或在100%的試驗濃度，至少測試6次。4.1