機能實驗家兔腸缺血再灌注損傷機能實驗家兔腸缺血再灌注損傷1掌握缺血再灌注損傷模型的復制，比較缺血損傷和缺血再灌注損傷的區別觀察缺血再灌注損傷的表現，理解缺血再灌注損傷發生的機制

【目的要求】掌握缺血再灌注損傷模型的復制，比較缺血損傷和缺血再灌注損傷的2觀察缺血再灌注損傷的表現，理解缺血再灌注損傷發生的機制兔手術臺、BL-420生物信息采集系統、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水※Ⅰ、Ⅱ組比較說明：缺血損傷與是不同的損傷過程，損傷過程，后者損傷更嚴重（3）再灌注是否通暢？兔手術臺、BL-420生物信息采集系統、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水排凈氣泡，記錄前應關閉三通管（1）活性氧的作用）頸部正中切口行動脈插管Ⅰ組：結扎→BP↑→BP↓趨于平穩（相似于結扎前），腸壁粉紅→暗紅（淤血）腫脹（水腫），無出血點兔手術臺、BL-420生物信息采集系統、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水腹正中線自劍突下1.排盡氣泡，速度不宜太快兔手術臺、BL-420生物信息采集系統、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水【結果不明顯可能存在的問題】舌頭無回收，四肢松軟【實驗動物】

家兔

觀察缺血再灌注損傷的表現，理解缺血再灌注損傷發生的機制【實驗3【實驗器材】兔手術臺、BL-420生物信息采集系統、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水【實驗器材】兔手術臺、BL-420生物信息采集系統、Y型氣管4【實驗設計原理】通過腸系膜上動脈結扎，即SMAO(SuperiorMesenteryArteryOcclusion)來阻斷部分腸的血液供應一段時間后再恢復血流灌注，以復制腸缺血/再灌注損傷的動物模型，探討缺血/再灌注損傷的發生機制【實驗設計原理】通過腸系膜上動脈結扎，即SMAO(Super5排盡氣泡，速度不宜太快機能實驗家兔腸缺血再灌注損傷切口范圍：頸部正中，甲狀軟骨下緣→胸骨上切跡，長約5cm②峰表示：松開腸系膜上A→血管床容量↑→有效循環血量相對→BP↓升壓反射（再灌注損傷還未來得及發生）有時②峰不出現，BP↓直到死亡排凈氣泡，記錄前應關閉三通管Ⅱ組：結扎→BP↑→BP↓趨于平穩（機體自身調節）→再灌→BP↓，腸壁暗紅、水腫、出血點BP低于正常>1/2時→休克夾閉腸系膜上動脈1hⅠ組：結扎→BP↑→BP↓趨于平穩（相似于結扎前），腸壁粉紅→暗紅（淤血）腫脹（水腫），無出血點夾閉腸系膜上動脈30min，再恢復血流30min頸部正中切口行動脈插管排盡氣泡，速度不宜太快插管內事先應加入少量肝素以防凝血；頸部正中切口行動脈插管兔手術臺、BL-420生物信息采集系統、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水夾閉腸系膜上動脈30min，再恢復血流30minⅠ組：持續缺血組夾閉腸系膜上動脈1hⅡ組：再灌損傷組夾閉腸系膜上動脈30min，再恢復血流30min

【實驗分組】排盡氣泡，速度不宜太快Ⅰ組：持續缺血組【實驗分組】6【實驗方法與步驟】1.稱重2.全麻（耳緣靜脈注射25%烏拉坦4ml/kg）★注意：從耳緣靜脈的遠心端開始注射，排盡氣泡，速度不宜太快★麻醉效果：角膜反射基本消失，鉗夾家兔舌頭無回收，四肢松軟【實驗方法與步驟】1.稱重7舌頭無回收，四肢松軟腸系膜上A夾閉要徹底，缺血再灌注組結扎時注意墊橡皮管，恢復血流灌流（復流）要完全※Ⅰ、Ⅱ組比較說明：缺血損傷與是不同的損傷過程，損傷過程，后者損傷更嚴重頸部正中切口行動脈插管長約2-3cm，穿線備用插管內事先應加入少量肝素以防凝血；插管內事先應加入少量肝素以防凝血；先結扎遠心端，后夾閉近心端，剪口部位盡量靠近遠心端，成45度角朝向近心端剪一小口，約為管徑的1/3-1/2，插管方向朝向近心端，插入1-1.（1）活性氧的作用）兔手術臺、BL-420生物信息采集系統、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水排盡氣泡，速度不宜太快（3）再灌注是否通暢？兔手術臺、BL-420生物信息采集系統、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水全麻（耳緣靜脈注射25%烏拉坦4ml/kg）排凈氣泡，記錄前應關閉三通管3.仰臥固定（背部交叉）、備皮頸部正中（甲狀軟骨下緣→胸骨上切跡）腹部正中（劍突下1.5cm起向下5cm）★注意：平貼皮膚剪毛，勿拎起皮膚！舌頭無回收，四肢松軟3.仰臥固定（背部交叉）、備皮84.頸部正中切口行動脈插管切口范圍：頸部正中，甲狀軟骨下緣→胸骨上切跡，長約5cm分離左側頸總動脈：胸骨舌骨肌與胸鎖乳突肌之間深面的頸動脈鞘內，與氣管平行，顏色鮮紅、較細、觸之有搏動感，長約2-3cm，穿線備用4.頸部正中切口行動脈插管分離左側頸總動脈：胸骨舌骨肌與胸鎖9注意：（1）鈍性分離（2）辨清頸A鞘內的血管神經血管插管先結扎遠心端，后夾閉近心端，剪口部位盡量靠近遠心端，成45度角朝向近心端剪一小口，約為管徑的1/3-1/2，插管方向朝向近心端，插入1-1.5cm注意：（1）鈍性分離先結扎遠心端，后夾閉近心端，剪口部位盡量10【插管的注意事項】插管內事先應加入少量肝素以防凝血；排凈氣泡，記錄前應關閉三通管插管易滑脫，應雙線固定，結扎牢靠勿使插管尖端與血管壁形成角度，避免刺破血管【插管的注意事項】插管內事先應加入少量肝素以防凝血；排凈氣泡115.腹部正中切口：腹正中線自劍突下1.5cm起向下做5cm切口※6.尋找腸系膜上動脈：

將家兔腹腔內臟左移，找到齊右腎門對側垂直向腹主動脈分出的腸系膜上動脈，穿雙線備用，注意避免損傷其他血管（缺血再灌注夾閉時注意墊橡皮管）7.記錄一段正常血壓曲線8.復制腸缺血-再灌注模型，輕輕提起腸系膜上動脈的穿線，用動脈夾夾閉，同時觀察各項生理指標變化。9.分組進行實驗并記錄各項指標。（Ⅰ組：夾閉腸系膜上動脈1hⅡ組：夾閉腸系膜上動脈30min，再恢復血流30min）5.腹部正中切口：12腸系膜上動脈示意圖腸系膜上動脈示意圖13機能實驗家兔腸缺血再灌注損傷課件14機能實驗家兔腸缺血再灌注損傷課件15全麻（耳緣靜脈注射25%烏拉坦4ml/kg）排盡氣泡，速度不宜太快先結扎遠心端，后夾閉近心端，剪口部位盡量靠近遠心端，成45度角朝向近心端剪一小口，約為管徑的1/3-1/2，插管方向朝向近心端，插入1-1.頸部正中切口行動脈插管（1）實驗過程中是否發生了大血？（1）活性氧的作用）頸部正中切口行動脈插管分離左側頸總動脈：胸骨舌骨肌與胸鎖乳突肌之間深面的頸動脈鞘內，與腹部正中（劍突下1.切口范圍：頸部正中，甲狀軟骨下緣→胸骨上切跡，長約5cm較細、觸之有搏動感，腹正中線自劍突下1.※Ⅰ、Ⅱ組比較說明：缺血損傷與是不同的損傷過程，損傷過程，后者損傷更嚴重（1）活性氧的作用）5cm起向下做5cm切口1.移動內臟時，動作要輕柔2.分離腸系膜上A時需小心細致，不要使用銳利器械，以免損傷血管造成大出血3.腸系膜上A夾閉要徹底，缺血再灌注組結扎時注意墊橡皮管，恢復血流灌流（復流）要完全【注意事項】全麻（耳緣靜脈注射25%烏拉坦4ml/kg）1.移動內臟時16【結果分析】①峰表示：結扎腸系膜上A→血管床容量↓→有效循環血量相對↑→BP↑壓力感受器(+)減壓反射→BP↓②峰表示：松開腸系膜上A→血管床容量↑→有效循環血量相對→BP↓升壓反射（再灌注損傷還未來得及發生）有時②峰不出現，BP↓直到死亡③血壓持續下降，有再灌注損傷【結果分析】①峰表示：結扎腸系膜上A→血管床容量↓→有17Ⅰ組：結扎→BP↑→BP↓趨于平穩（相似于結扎前），腸壁粉紅→暗紅（淤血）腫脹（水腫），無出血點Ⅱ組：結扎→BP↑→BP↓趨于平穩（機體自身調節）→再灌→BP↓，腸壁暗紅、水腫、出血點BP低于正常>1/2時→休克※Ⅰ、Ⅱ組比較說明：缺血損傷與是不同的損傷過程，損傷過程，后者損傷更嚴重Ⅰ組：結扎→BP↑→BP↓趨于平穩（相似于結扎前），腸壁18【典型結果】【典型結果】19基本消失，鉗夾家兔兔手術臺、BL-420生物信息采集系統、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水仰臥固定（背部交叉）、備皮腸系膜上A夾閉要徹底，缺血再灌注組結扎時注意墊橡皮管，恢復血流灌流（復流）要完全【結果不明顯可能存在的問題】插管內事先應加入少量肝素以防凝血；★注意：從耳緣靜脈的遠心端開始注射，復制腸缺血-再灌注模型，輕輕提起腸系膜上動脈的穿線，用動脈夾夾閉，同時觀察各項生理指標變化。※Ⅰ、Ⅱ組比較說明：缺血損傷與是不同的損傷過程，損傷過程，后者損傷更嚴重（3）白細胞的作用）夾閉腸系膜上動脈30min，再恢復血流30min分離左側頸總動脈：胸骨舌骨肌與胸鎖乳突肌之間深面的頸動脈鞘內，與（1）實驗過程中是否發生了大血？插管內事先應加入少量肝素以防凝血；將家兔腹腔內臟左移，找到齊右腎門對側垂直向腹主動脈分出的腸系膜上動脈，穿雙線備用，注意避免損傷其他血管（缺血再灌注夾閉時注意墊橡皮管）【結果不明顯可能存在的問題】（1）實驗過程中是否發生了大血？（2）缺血是否完全？（3）再灌注是否通暢？（4）記錄結果時基線是否改變？（5）個體差異基本消失，鉗夾家兔【結果不明顯可能存在的問題】（1）實驗過程20【I/R的發生機制】（1）活性氧的作用）（2）鈣超載）（3）白細胞的作用）（4）高能磷酸化合物生成障礙）【I/R的發生機制】（1）活性氧的作用）21機能實驗家兔腸缺血再灌注損傷機能實驗家兔腸缺血再灌注損傷22掌握缺血再灌注損傷模型的復制，比較缺血損傷和缺血再灌注損傷的區別觀察缺血再灌注損傷的表現，理解缺血再灌注損傷發生的機制

【目的要求】掌握缺血再灌注損傷模型的復制，比較缺血損傷和缺血再灌注損傷的23觀察缺血再灌注損傷的表現，理解缺血再灌注損傷發生的機制兔手術臺、BL-420生物信息采集系統、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水※Ⅰ、Ⅱ組比較說明：缺血損傷與是不同的損傷過程，損傷過程，后者損傷更嚴重（3）再灌注是否通暢？兔手術臺、BL-420生物信息采集系統、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水排凈氣泡，記錄前應關閉三通管（1）活性氧的作用）頸部正中切口行動脈插管Ⅰ組：結扎→BP↑→BP↓趨于平穩（相似于結扎前），腸壁粉紅→暗紅（淤血）腫脹（水腫），無出血點兔手術臺、BL-420生物信息采集系統、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水腹正中線自劍突下1.排盡氣泡，速度不宜太快兔手術臺、BL-420生物信息采集系統、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水【結果不明顯可能存在的問題】舌頭無回收，四肢松軟【實驗動物】

家兔

觀察缺血再灌注損傷的表現，理解缺血再灌注損傷發生的機制【實驗24【實驗器材】兔手術臺、BL-420生物信息采集系統、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水【實驗器材】兔手術臺、BL-420生物信息采集系統、Y型氣管25【實驗設計原理】通過腸系膜上動脈結扎，即SMAO(SuperiorMesenteryArteryOcclusion)來阻斷部分腸的血液供應一段時間后再恢復血流灌注，以復制腸缺血/再灌注損傷的動物模型，探討缺血/再灌注損傷的發生機制【實驗設計原理】通過腸系膜上動脈結扎，即SMAO(Super26排盡氣泡，速度不宜太快機能實驗家兔腸缺血再灌注損傷切口范圍：頸部正中，甲狀軟骨下緣→胸骨上切跡，長約5cm②峰表示：松開腸系膜上A→血管床容量↑→有效循環血量相對→BP↓升壓反射（再灌注損傷還未來得及發生）有時②峰不出現，BP↓直到死亡排凈氣泡，記錄前應關閉三通管Ⅱ組：結扎→BP↑→BP↓趨于平穩（機體自身調節）→再灌→BP↓，腸壁暗紅、水腫、出血點BP低于正常>1/2時→休克夾閉腸系膜上動脈1hⅠ組：結扎→BP↑→BP↓趨于平穩（相似于結扎前），腸壁粉紅→暗紅（淤血）腫脹（水腫），無出血點夾閉腸系膜上動脈30min，再恢復血流30min頸部正中切口行動脈插管排盡氣泡，速度不宜太快插管內事先應加入少量肝素以防凝血；頸部正中切口行動脈插管兔手術臺、BL-420生物信息采集系統、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水夾閉腸系膜上動脈30min，再恢復血流30minⅠ組：持續缺血組夾閉腸系膜上動脈1hⅡ組：再灌損傷組夾閉腸系膜上動脈30min，再恢復血流30min

【實驗分組】排盡氣泡，速度不宜太快Ⅰ組：持續缺血組【實驗分組】27【實驗方法與步驟】1.稱重2.全麻（耳緣靜脈注射25%烏拉坦4ml/kg）★注意：從耳緣靜脈的遠心端開始注射，排盡氣泡，速度不宜太快★麻醉效果：角膜反射基本消失，鉗夾家兔舌頭無回收，四肢松軟【實驗方法與步驟】1.稱重28舌頭無回收，四肢松軟腸系膜上A夾閉要徹底，缺血再灌注組結扎時注意墊橡皮管，恢復血流灌流（復流）要完全※Ⅰ、Ⅱ組比較說明：缺血損傷與是不同的損傷過程，損傷過程，后者損傷更嚴重頸部正中切口行動脈插管長約2-3cm，穿線備用插管內事先應加入少量肝素以防凝血；插管內事先應加入少量肝素以防凝血；先結扎遠心端，后夾閉近心端，剪口部位盡量靠近遠心端，成45度角朝向近心端剪一小口，約為管徑的1/3-1/2，插管方向朝向近心端，插入1-1.（1）活性氧的作用）兔手術臺、BL-420生物信息采集系統、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水排盡氣泡，速度不宜太快（3）再灌注是否通暢？兔手術臺、BL-420生物信息采集系統、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水全麻（耳緣靜脈注射25%烏拉坦4ml/kg）排凈氣泡，記錄前應關閉三通管3.仰臥固定（背部交叉）、備皮頸部正中（甲狀軟骨下緣→胸骨上切跡）腹部正中（劍突下1.5cm起向下5cm）★注意：平貼皮膚剪毛，勿拎起皮膚！舌頭無回收，四肢松軟3.仰臥固定（背部交叉）、備皮294.頸部正中切口行動脈插管切口范圍：頸部正中，甲狀軟骨下緣→胸骨上切跡，長約5cm分離左側頸總動脈：胸骨舌骨肌與胸鎖乳突肌之間深面的頸動脈鞘內，與氣管平行，顏色鮮紅、較細、觸之有搏動感，長約2-3cm，穿線備用4.頸部正中切口行動脈插管分離左側頸總動脈：胸骨舌骨肌與胸鎖30注意：（1）鈍性分離（2）辨清頸A鞘內的血管神經血管插管先結扎遠心端，后夾閉近心端，剪口部位盡量靠近遠心端，成45度角朝向近心端剪一小口，約為管徑的1/3-1/2，插管方向朝向近心端，插入1-1.5cm注意：（1）鈍性分離先結扎遠心端，后夾閉近心端，剪口部位盡量31【插管的注意事項】插管內事先應加入少量肝素以防凝血；排凈氣泡，記錄前應關閉三通管插管易滑脫，應雙線固定，結扎牢靠勿使插管尖端與血管壁形成角度，避免刺破血管【插管的注意事項】插管內事先應加入少量肝素以防凝血；排凈氣泡325.腹部正中切口：腹正中線自劍突下1.5cm起向下做5cm切口※6.尋找腸系膜上動脈：

將家兔腹腔內臟左移，找到齊右腎門對側垂直向腹主動脈分出的腸系膜上動脈，穿雙線備用，注意避免損傷其他血管（缺血再灌注夾閉時注意墊橡皮管）7.記錄一段正常血壓曲線8.復制腸缺血-再灌注模型，輕輕提起腸系膜上動脈的穿線，用動脈夾夾閉，同時觀察各項生理指標變化。9.分組進行實驗并記錄各項指標。（Ⅰ組：夾閉腸系膜上動脈1hⅡ組：夾閉腸系膜上動脈30min，再恢復血流30min）5.腹部正中切口：33腸系膜上動脈示意圖腸系膜上動脈示意圖34機能實驗家兔腸缺血再灌注損傷課件35機能實驗家兔腸缺血再灌注損傷課件36全麻（耳緣靜脈注射25%烏拉坦4ml/kg）排盡氣泡，速度不宜太快先結扎遠心端，后夾閉近心端，剪口部位盡量靠近遠心端，成45度角朝向近心端剪一小口，約為管徑的1/3-1/2，插管方向朝向近心端，插入1-1.頸部正中切口行動脈插管（1）實驗過程中是否發生了大血？（1）活性氧的作用）頸部正中切口行動脈插管分離左側頸總動脈：胸骨舌骨肌與胸鎖乳突肌之間深面的頸動脈鞘內，與腹部正中（劍突下1.切口范圍：頸部正中，甲狀軟骨下緣→胸骨上切跡，長約5cm較細、觸之有搏動感，腹正中線自劍突下1.※Ⅰ、Ⅱ組比較說明：缺血損傷與是不同的損傷過程，損傷過程，后者損傷更嚴重（1）活性氧的作用）5cm起向下做5cm切口1.移動內臟時，動作要輕柔2.分離腸系膜上A時需小心細致，不要使用銳利器械，以免損傷血管造成大出血3.腸系膜上A夾閉要徹底，缺血再灌注組結扎時注意墊橡皮管，恢復血流灌流（復流）要完全【注意事項】全麻（耳緣靜脈注射25%烏拉坦4ml/kg）1.移動內臟時37【結果分析】①峰表示：結扎腸系膜上A→血管床容量↓→有效循環血量相對↑→BP↑壓力感受器(+)減壓反射→BP↓②峰表示：松開腸系膜上A→血管床容量↑→有效循環血量相對→BP↓升壓反射（再灌注損傷還未來得及發生）有時②峰不出現，BP↓直