香菇多糖提取

張志挺14生科一班29號1、香菇多糖(1)香菇多糖結構式分子式：〔C42H72O36〕n分子量：〔1152.9995〕n(2)香菇多糖性質

香菇多糖（lentinan;LNT）是從香菇中分離純化的一種葡聚糖，是以增強T細胞和巨噬細胞功能為主的免疫增強劑。密度：1.88g/cm3；沸點：1472℃at760mmHg。溶于堿溶液或甲酸，微溶于熱水或二甲亞砜，不溶于冷水、醇、乙醚、氯仿、吡啶或六甲基磷酰胺。對硫酸和鹽酸穩定。(3)香菇多糖的功能

香菇多糖具有激活細胞免疫、調節多種體液免疫因子、誘導α-干擾素生成，調節機體免疫應答反應，誘導白細胞對腫瘤浸潤，導致腫瘤部位血管擴張、出血、壞死，阻止病毒與宿主細胞的結合，提高SOD〔超氧化物歧化酶〕活性，抑制MDA〔丙二醛

〕生成，抗脂質氧化，降低膽固醇，調節糖代謝、改善糖耐量、擴張胃腸道產生飽腹感而減輕食欲，降低血糖等功能。(4)香菇多糖的應用①、香菇多糖在醫藥領域的應用

香菇多糖在治療胃癌、結腸癌、肺癌等方面具有良好療效。作為免疫輔助藥物，香菇多糖主要用來抑制腫瘤的發生、發展與轉移，提高腫瘤對化療藥物的敏感性，改善患者的身體狀況，延長其壽命。香菇多糖與化療劑聯合使用，有減毒、增效的作用。

香菇多糖配合其他藥物治療慢性乙型肝炎，可提高乙肝病毒標志物的轉陰作用，減少抗病毒藥物的副作用。此外，香菇多糖可用于治療結核桿菌感染。②、香菇多糖在保健食品領域的應用

香菇多糖是一種特殊的生物活性物質，是一種生物反應增強劑和調節劑，它能增強體液免疫和細胞免疫功能。香菇多糖的抗病毒作用機制可能在于其提高感染細胞免疫力，增強細胞膜的穩定性，抑制細胞病變，促進細胞修復等功能。同時，香菇多糖還具有抗逆轉錄病毒活性。因此，香菇多糖是一種有待開發的抗流感的保健食品。(2)各種生產方法比較

主要的多糖提取方法有如下幾種:熱水浸提法、酸（堿）浸提法、微波提取法、超聲波提取法、復合酶解法等等。①香菇多糖提取的工藝流程多糖提取的常規工藝原料預處理→水(或酸)浸提→浸提物→真空濃縮→濃縮液→酒精沉淀→沉淀物→sevage法脫蛋白→水相→丙酮洗滌→多糖粗制品

采用復合酶解工藝原料預處理→復合酶解→酶解液→真空濃縮→濃縮液→酒精沉淀→沉淀物→丙酮洗滌→多糖粗制品

復合酶解、酸處理結合熱水浸提法提取香菇多糖的改進工藝原料預處理→復合酶解→酶解液→水浸提→酸浸提→浸提物→空濃縮→濃縮液→酒精沉淀→沉淀物→sevage法脫蛋白→水相→丙酮洗滌→多糖粗制品②

操作要點的對比熱水浸提法

向香菇處理物中加入20倍體積的蒸餾水,并在40℃水浴恒溫下浸泡4h。放置冰箱冷凍柜中冷凍過夜。將香菇浸泡液從冰箱中取出,解凍后在恒溫水浴箱內分別抽提30min、60min、90min,用4層紗布過濾后收集濾液。向濾渣中加入20倍體積的蒸餾水再抽提一次,沸煮時間同上用4層紗布過濾后收集濾液,合并兩次濾液。

酸浸提法

向香菇處理物中加鹽酸溶液使其最終濃度分別為0.3mol/L、0.4mol/L、0.5mol/L,置于60℃恒溫水浴中浸提8h,加適量的NaOH中和至中性,過濾,濃縮。

微波提取法向香菇處理物中按1:25加入去離子水浸泡過夜,粉碎,在一定微波條件下提取,冷卻后離心,從上清液中取樣測定其中多糖含量。

超聲波提取法向香菇處理物中加入蒸餾水，進行超聲波處理浸提。8000r/min離心五分鐘，取上清液，用旋轉蒸發儀濃縮至10~20ml，加入兩倍體積的無水乙醇，進行醇沉。放置過夜后再次離心，留取沉淀物，干燥至恒重。復合酶浸提法

向香菇處理物的中加0.1g纖維素酶和0.5g果膠酶,目的是為了酶解細胞表面結構及細胞間連接物,使其部分糖類物質的溶出。往酶解后的香菇處理物中加入20倍體積的蒸餾水,并在40水浴恒溫下浸泡80min

。迅速升溫沸騰90min,后過濾得濾液。離心沉淀,上清液濃縮,乙醇沉淀。

復合酶解,酸與熱水相結合浸提法

向香菇處理物中加0.1g纖維素酶和0.5g果膠酶,目的是為了酶解細胞表面結構及細胞間連接物,使其部分糖類物質的溶出。加20倍體積的水在40水浴恒溫下浸泡80min。后再迅速升溫煮沸60min,用4層紗布過濾后收集濾液,再調節pH分別為4.5、5.0、5.5,進行酸浸提,然后再用4層紗布過濾后收集濾液。合并兩次濾液。濃縮。(3)現在常用的生產方法

以上幾種方法均有優點和缺點，而現如今也都在被使用！3、生產技術(1)生產原理:

多糖溶于熱水,不溶于60%以上乙醇,也不溶于氯仿正丁醇.熱水浸提時，香菇組織膨脹破裂，多糖成分浸出，所以用熱水提取,乙醇沉淀除去部分醇溶性雜質;因為熱水也可以將蛋白類物質提取出來,所以用氯仿正丁醇萃取除去提取液中的蛋白。(2)原料及要求:

將香菇清洗干凈，除去其根部，將剩下的菌傘擠壓，切小塊放入真空干燥箱干燥，待香菇恒質量，放入粉碎機中粉碎，將粉碎后的香菇粉依次通過40，60，80，100目的篩子，得到40目以下、40～60目、60～80目、80～100目、100目粒度以上的樣品，過篩之后把各級香菇粉分別裝到清潔干燥的燒杯中，編號貼上標簽，置于真空干燥箱中待用。(3)工藝流程：

熱水法提取香菇多糖工藝流程圖

【sevage法脫蛋白】

正丁醇、氯仿混合溶液（正丁醇：氯仿=1：4或1：5）和樣物提取液混合并且振蕩，不需要加熱，利用離心機離心，直到離液面交界處無白色混懸，也就是蛋白質介于提取液與試劑交界處即可，最后分別提取即可。(6)關鍵過程與關鍵技術

多糖的提取

取香菇10g，于組織搗碎機內粉碎，加入20倍量水，90℃水浴加熱30min，抽濾，得濾液，加活性炭（1mg/mL），攪拌吸附1h，抽濾，得濾液，用氯仿萃取（3次）以除盡蛋白質，萃余液中加無水乙醇，使其乙醇最終濃度為80%，沉淀12h后，于離心機中離心（4000r/min）30min,沉淀物分別用無水乙醇，丙酮，乙醚洗滌三次，既得香菇多糖提取物。多糖純化

凝膠柱層析原理：所謂層析，就是利用樣品中各組成成分的理化性質的差異，使各組分以不同程度分布在固定相和流動相兩相中，由于各組分隨流動相前進的速率不同，從而把它們分離開來的技術。操作步驟：SephadexG-100凝膠充分溶脹后裝柱，用蒸餾水平衡48h。取上述香菇多糖提取物溶于蒸餾水中，離心除去不溶物，上清液上柱分離，用蒸餾水洗脫，洗脫速度5mL/20min，200nm波長紫外檢測，收集主要峰部分，冷凍干燥的白色香菇多糖，并稱重。香菇多糖分析檢測

定性分析——苯酚-硫酸法

酚-硫酸試劑：酚3g，濃硫酸5mL，溶于95mL無水乙醇中，噴后，110℃,加熱幾分鐘，糖顯棕色。

(7)該技術的優缺點：

優點：有可靠的生產數據，可大規模工業化生產，不易招致雜菌污染。

缺點:能耗高，設備要求高，提取時間長，高溫可能會使多糖水解。(8)該技術的改進