1基礎(chǔ)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一氨基酸的分離鑒定紙層析法共21頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁(yè)!2實(shí)驗(yàn)內(nèi)容安排實(shí)驗(yàn)一氨基酸的分離鑒定（紙層析法）（P35）實(shí)驗(yàn)二胰蛋白酶抑制劑的分離純化和活性測(cè)定（P40）實(shí)驗(yàn)三酶的基本性質(zhì)（P85）實(shí)驗(yàn)四酵母核糖核酸的分離與組分鑒定（P159）實(shí)驗(yàn)五PAGE分離過(guò)氧化物同工酶（P98）實(shí)驗(yàn)六血液DNA的提取（P162）實(shí)驗(yàn)一氨基酸的分離鑒定紙層析法共21頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁(yè)!3熟悉和掌握基本的生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)操作及技能；通過(guò)實(shí)驗(yàn)加深對(duì)生物化學(xué)基本理論和概念的理解；培養(yǎng)分析問(wèn)題和解決問(wèn)題的能力以及嚴(yán)謹(jǐn)細(xì)致的科學(xué)作風(fēng)。實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)一氨基酸的分離鑒定紙層析法共21頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁(yè)!4通過(guò)實(shí)驗(yàn)應(yīng)該做到掌握各個(gè)實(shí)驗(yàn)的基本原理，學(xué)會(huì)嚴(yán)密地組織自己的實(shí)驗(yàn)，合理地安排實(shí)驗(yàn)步驟和時(shí)間。訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)的動(dòng)手能力，學(xué)會(huì)熟練地使用各種生化實(shí)驗(yàn)儀器。以實(shí)事求是的科學(xué)態(tài)度如實(shí)記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果，認(rèn)真分析并作出客觀結(jié)論。掌握生物化學(xué)的基本實(shí)驗(yàn)方法和實(shí)驗(yàn)技術(shù)，為今后參加科研工作打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)一氨基酸的分離鑒定紙層析法共21頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁(yè)!5實(shí)驗(yàn)報(bào)告

實(shí)驗(yàn)報(bào)告是學(xué)生實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果的記錄和總結(jié)，同時(shí)也是評(píng)價(jià)學(xué)生實(shí)驗(yàn)課成績(jī)的重要依據(jù)。實(shí)驗(yàn)報(bào)告的格式：

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?shí)驗(yàn)原理三、儀器和試劑四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析六、討論、心得

注意討論部分不是對(duì)結(jié)果的重述，而是實(shí)驗(yàn)結(jié)果、實(shí)驗(yàn)方法和實(shí)驗(yàn)異常結(jié)果的分析和討論，以及對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的認(rèn)識(shí)、體會(huì)及建議。實(shí)驗(yàn)一氨基酸的分離鑒定紙層析法共21頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁(yè)!6基礎(chǔ)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)課評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)課中遲到或早退者其實(shí)驗(yàn)過(guò)程成績(jī)須扣分。無(wú)故不做實(shí)驗(yàn)的學(xué)生其實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目成績(jī)?cè)u(píng)為零分。實(shí)驗(yàn)課缺勤超過(guò)1/3的學(xué)生其實(shí)驗(yàn)總成績(jī)?cè)u(píng)為不及格。在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)不能按時(shí)交實(shí)驗(yàn)報(bào)告的學(xué)生其實(shí)驗(yàn)報(bào)告成績(jī)須扣分。實(shí)驗(yàn)成績(jī)占基礎(chǔ)生物化學(xué)考試成績(jī)的20℅。實(shí)驗(yàn)一氨基酸的分離鑒定紙層析法共21頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁(yè)!7

【實(shí)驗(yàn)原理】

層析技術(shù)

是一種物理的分離方法，利用混合物中各組分的物理化學(xué)性質(zhì)的差別，使各組分以不同程度分布在兩相中，其中一相為固定相，另一相流過(guò)此相稱作流動(dòng)相，并使各組分以不同速度移動(dòng)，從而達(dá)到分離的目的。

可分離物質(zhì)

糖類、有機(jī)酸、氨基酸、核苷實(shí)驗(yàn)一氨基酸的分離鑒定紙層析法共21頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁(yè)!8名稱操作方式固定相流動(dòng)相分離依據(jù)

分配層析

紙層析薄層層析液體液體

溶解度

離子交換層析

離子交換柱層析固體液體

帶電性靜電引力

吸附層析

吸附薄層層析氣體吸附層析固體液體氣體

吸附力

親合層析

酶與底物抗原與抗體固體液體

配體專一性

凝膠層析

凝膠過(guò)濾固體液體

分子大小【實(shí)驗(yàn)原理】層析的分類實(shí)驗(yàn)一氨基酸的分離鑒定紙層析法共21頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁(yè)!9

【實(shí)驗(yàn)原理】

紙層析

是以濾紙作為惰性支持物的分配層析：紙纖維上的-OH

基具有親水性，所以能吸附一層水作為固定相，而通常把有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相。流動(dòng)相流經(jīng)支持物時(shí)與固定相間連續(xù)抽提，使物質(zhì)在兩相間不斷地分配而得到分離。實(shí)驗(yàn)一氨基酸的分離鑒定紙層析法共21頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁(yè)!10【儀器和試劑】實(shí)驗(yàn)儀器1.電熱鼓風(fēng)干燥箱2.培養(yǎng)皿、青霉素小瓶、毛細(xì)管、小型噴霧器3.層析濾紙、濾紙芯實(shí)驗(yàn)材料和試劑1.氨基酸溶液分別配制0.02M的Leu、Val、Pro、Thr、Lys溶液及氨基酸混合液。2.顯色劑0.1%水合茚三酮溶液。3.擴(kuò)展劑（展層劑）酸溶劑系統(tǒng)：正丁醇:冰醋酸:水＝4:1:5（體積比）實(shí)驗(yàn)一氨基酸的分離鑒定紙層析法共21頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁(yè)!11【實(shí)驗(yàn)方法與步驟】平衡

在層析缸中倒入層析液，將濾紙置于層析缸中，蓋上玻璃板，平衡15min。

注意：此時(shí)切勿使層析液接觸到2cm處的直線（點(diǎn)樣）。層析待溶劑前沿走到濾紙2/3，取出濾紙，鉛筆描出溶劑前沿位置。80℃烘箱中烘干，進(jìn)行顯色。顯色

用噴霧器將0.1%水合茚三酮顯色劑均勻噴在層析濾紙上，放入80℃烘箱中約5min，即顯出各氨基酸色斑，鉛筆描出各色斑輪廓。實(shí)驗(yàn)一氨基酸的分離鑒定紙層析法共21頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁(yè)!12【實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析】氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液LeuProLys原點(diǎn)到層析斑點(diǎn)中心的距離(cm)原點(diǎn)到溶劑前沿的距離(cm)Rf

混合氨基酸溶液aa1

aa2aa3…………原點(diǎn)到層析斑點(diǎn)中心的距離(cm)原點(diǎn)到溶劑前沿的距離(cm)Rf判斷待測(cè)氨基酸實(shí)驗(yàn)一氨基酸的分離鑒定紙層析法共21頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁(yè)!13實(shí)驗(yàn)要求實(shí)驗(yàn)前預(yù)習(xí)準(zhǔn)時(shí)到實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)兩人一組，固定座位。進(jìn)實(shí)驗(yàn)室后不亂動(dòng)實(shí)驗(yàn)臺(tái)上的儀器、試劑動(dòng)手實(shí)驗(yàn)前認(rèn)真聽(tīng)老師講解實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)步驟及實(shí)驗(yàn)中需注意的問(wèn)題。實(shí)驗(yàn)課中保持紀(jì)律，不隨意走動(dòng)，不大聲喧嘩，不早退。操作過(guò)程要規(guī)范，用完物品及時(shí)歸位。及時(shí)記錄實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，按時(shí)上交實(shí)驗(yàn)報(bào)告。全班分六組，每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后留一組打掃衛(wèi)生。實(shí)驗(yàn)一氨基酸的分離鑒定紙層析法共21頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁(yè)!14考核方式與評(píng)分方法

采取“學(xué)生實(shí)驗(yàn)平時(shí)考核”的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)考核。評(píng)分方法采用百分制，每個(gè)環(huán)節(jié)都制定了評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),各實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目總成績(jī)的平均值就是實(shí)驗(yàn)成績(jī)。

實(shí)驗(yàn)成績(jī)＝[∑（預(yù)習(xí)成績(jī)×10℅＋實(shí)驗(yàn)過(guò)程成績(jī)×40%＋報(bào)告成績(jī)×50℅）]／N

預(yù)習(xí)報(bào)告10℅

實(shí)驗(yàn)過(guò)程40℅

實(shí)驗(yàn)報(bào)告50℅N為所做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的總個(gè)數(shù)實(shí)驗(yàn)一氨基酸的分離鑒定紙層析法共21頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁(yè)!15實(shí)驗(yàn)一氨基酸的分離鑒定（紙層析法）通過(guò)實(shí)驗(yàn)，掌握紙層析法的一般原理和操作技術(shù)。掌握紙層析法分離鑒定氨基酸的一般過(guò)程。【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹繉?shí)驗(yàn)一氨基酸的分離鑒定紙層析法共21頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁(yè)!16【實(shí)驗(yàn)原理】支持物指層析法中用以支持、容納樣品的物質(zhì)。支持物的本身或其包含的水、特殊基團(tuán)在層析中起分離樣品物質(zhì)的作用。如紙層析中的濾紙。固定相在層析中起分離作用而不隨層析過(guò)程移動(dòng)的物質(zhì)。如紙層析中固定相是濾紙纖維中結(jié)合的水。固定相被看成是樣品移動(dòng)的阻力。流動(dòng)相在層析過(guò)程因其本身流動(dòng)而推動(dòng)樣品移動(dòng)的物質(zhì)。實(shí)驗(yàn)一氨基酸的分離鑒定紙層析法共21頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁(yè)!17

分配層析：是利用不同物質(zhì)在兩種不相溶的溶劑中的分配系數(shù)不同而達(dá)到分離的一種技術(shù)。分配系數(shù)

=溶質(zhì)在固定相的濃度溶質(zhì)在流動(dòng)相的濃度【實(shí)驗(yàn)原理】實(shí)驗(yàn)一氨基酸的分離鑒定紙層析法共21頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁(yè)!18【實(shí)驗(yàn)原理】分配系數(shù)不同的溶質(zhì)移動(dòng)速率不同。溶質(zhì)在濾紙上的移動(dòng)速度用Rf值表示：

Rf=原點(diǎn)到層析斑點(diǎn)中心的距離/原點(diǎn)到溶劑前沿的距離

在一定的條件下某種物質(zhì)的Rf值是常數(shù)。Rf值的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、溶劑系統(tǒng)、層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度等因素有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)利用紙層析法分離氨基酸。氨基酸與茚三酮的顯色反應(yīng)。

實(shí)驗(yàn)一氨基酸的分離鑒定紙層析法共21頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁(yè)!19【實(shí)驗(yàn)方法與步驟】濾紙的準(zhǔn)備

在長(zhǎng)度15cm左右濾紙下方2、4cm處畫一直線，在4cm處的直線平均畫4個(gè)點(diǎn)，標(biāo)記編號(hào)。點(diǎn)樣

分別在每個(gè)點(diǎn)樣處點(diǎn)同一樣品3次，每次干后點(diǎn)第二次，每次直徑＜2mm，鉛筆標(biāo)記。

注意：手盡量少接觸濾紙

濾紙芯、層析液實(shí)驗(yàn)一