第八部分傳染病的免疫學檢測

一、傷寒、副傷寒血清學診斷（一）肥達（Widal）試驗方法：試管法步驟：試管編號稀釋病人血清+菌液混勻,放置16-20小時觀察結果。

結果判定:

以出現++凝集的血清最高稀釋倍數為該血清的凝集抗體的效價1謝謝觀賞2019-7-3第八部分傳染病的免疫學檢測1謝謝觀賞2019-7-32謝謝觀賞2019-7-32謝謝觀賞2019-7-3

正常值：

O≤1:80；H≤1:160

臨床意義：1.“O”和“H”均高于正常值，可考慮為傷寒；恢復期較急性期增長4倍以上確定診斷。

2.“O”抗體（IgM）出現較早，“H”抗體（IgG）出現較晚3.病程第2周以后，大多出現陽性反應，一般以第3、4周陽性率最高，病愈后，可持續數月。3謝謝觀賞2019-7-3正常值：3謝謝觀賞2019-7-3（二）酶聯免疫（ELISA）試驗方法：抗原(傷寒桿菌脂多糖或Vi抗原)包被+待測血清+第二抗體（酶標記）底物顯色參考值：<1:20臨床意義：

1.早期診斷(發病1周后即可升高）

2.檢測抗Vi抗體，可以診斷傷寒帶菌者4謝謝觀賞2019-7-3（二）酶聯免疫（ELISA）試驗4謝謝觀賞2019-7-35謝謝觀賞2019-7-35謝謝觀賞2019-7-3

二、抗鏈球菌溶血素“O”測定

——

溶血抑制法原理：抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）存在于感染鏈球菌病人的血清中，可以和溶血素“O”特異性結合，使之失去溶血作用方法：病人血清倍比稀釋＋溶血素+紅細胞觀察溶血現象結果判定：無溶血現象的血清最高稀釋倍數定為ASO的單位數。參考值：ASO<400U臨床意義：1.鏈球菌感染1周，ASO↑，4～6周達高峰。2.風濕熱：ASO↑。6謝謝觀賞2019-7-3二、抗鏈球菌溶血素“O”測定6謝謝觀賞2019-7-3三、肝炎的免疫學檢測（一）甲型肝炎（HAV）的免疫學檢查：1.糞便中HAV抗原的檢測ELISA夾心法方法：①標本處理：待測糞便+牛肉湯鹽水凍融離心取上清(即待測抗原)；②包被抗體；③加待測標本；④加酶標抗體(HRP-抗甲肝IgG)；⑤加酶底物；⑥測定OD492。結果判斷：待測標本OD值

———————

≥2.1陽性陰性對照OD值7謝謝觀賞2019-7-3三、肝炎的免疫學檢測7謝謝觀賞2019-7-32抗HAV-IgM的檢測抗體捕獲ELISA法方法：抗人μ鏈包被+待檢血清(含抗HAV-IgM)+HAAg+HRP-抗HAV-IgG+酶底物測定OD492。結果判斷：待測標本吸光度值

————————≥2.1陽性陰性對照吸光度值臨床意義：發病4周后，幾乎全部患者抗HAV-IgM

為陽性，用于甲肝診斷。檢測抗HAV-IgG可用于流行病學調查。8謝謝觀賞2019-7-32抗HAV-IgM的檢測8謝謝觀賞2019-7-39謝謝觀賞2019-7-39謝謝觀賞2019-7-3（二）乙型肝炎的免疫學檢測

1.HBsAg的檢測

——反向間接血凝試驗方法：致敏紅細胞(抗HBsAg＋RBC)＋患者血清

(含HBsAg)凝集10謝謝觀賞2019-7-3（二）乙型肝炎的免疫學檢測10謝謝觀賞2019-7-32.抗HBs檢測

ELISA抑制法方法：抗HBs包被+HBsAg(已知濃度)+待測標本+HRP-抗HBs+酶底物目測或測定OD492結果判定：目測：陽性孔－無色或淺黃陰性孔－桔黃色

OD值測定：

<0.5

待測孔OD值陰性對照OD值11謝謝觀賞2019-7-32.抗HBs檢測待測孔OD值陰性對照OD值11謝謝觀賞20112謝謝觀賞2019-7-312謝謝觀賞2019-7-3

血中HBV標志物檢查法及其陽性意義標志物常用檢測法陽性意義

HBsAgELISA夾心法正在或曾經感染抗-HBsELISA抑制法曾感染或疫苗注射抗-HBc(IgM類)抗體捕獲ELISA發病期，慢性惡化期抗-HBc(IgG類)ELISA抑制法曾感染，急性恢復期

HBeAgELISA夾心法,RPHAHBV復制，感染性強抗-HBeELISA抑制法，PHA急性感染，趨向恢復

HBV-DNAPCR法HBV復制前S2AgELISA夾心法HBV復制抗-前S2ELISA抑制法提示預后良好13謝謝觀賞2019-7-3血中HBV標志物檢查法及其陽性意義1四、梅毒血清學檢查

1.未滅活血清反應素試驗(unheatedserumreagintest,USR)玻片凝集法方法：病人血清和脂質抗原(心磷脂、卵磷脂和膽固醇混合物）各一滴玻片上混合振動4min觀察結果結果判斷：－（陰性）無凝集＋（弱陽性）小凝集塊＋＋～＋＋＋(陽性)中或大凝集塊14謝謝觀賞2019-7-3四、梅毒血清學檢查14謝謝觀賞2019-7-32.快速血漿反應素試驗(rapidplasmareagintest,RPR)方法：病人血清＋RPR抗原(活性炭結合類脂質Ag)觀察凝集顆粒或絮片結果判斷：陰性無黑色凝集陽性明顯黑色凝集顆粒或絮片臨床意義：1.梅毒患者USR陽性者，70％～90％；

RPR陽性者，80％～95％。2.某些麻風、SLE、硬皮病、類風濕性關節炎等也可出現USR假陽性。15謝謝觀賞2019-7-32.快速血漿反應素試驗(rapidplasmareag

3.熒光密螺旋體抗體吸收實驗(FAT-ABS)

方法：病人血清(56℃,30min)

加非致病螺旋體抗原吸收滴加于抗原(梅毒螺旋體)

片+FITC-抗人IgG熒光顯微鏡檢查。結果判定：++++++陽性

±

+可疑

-陰性16謝謝觀賞2019-7-33.熒光密螺旋體抗體吸收實驗(FAT-ABS)16謝謝觀賞17謝謝觀賞2019-7-317謝謝觀賞2019-7-3五、獲得性免疫缺陷綜合征(acquiredimmunodeficiencysyndrome,AIDS)的相關檢測技術

1.抗HIV抗體的檢測：

①

酶聯免疫吸附試驗（ELISA）

②明膠顆粒凝集實驗(PA)

③免疫熒光檢測法（IFA）

④免疫印記法（westernblot）

⑤放射免疫沉淀法（RIP）應用：①、②和③用于篩查；

④和⑤用于確定診斷。18謝謝觀賞2019-7-3五、獲得性免疫缺陷綜合征(acquiredimmunode

2.HIV病毒檢測：

①細胞培養分離病毒

②檢測HIV抗原。

3.細胞免疫功能：

①檢測T細胞功能

a.CD4T淋巴細胞計數

b.遲發變態反應皮試

c.有絲分裂原刺激反應

②檢測B細胞功能

a.循環免疫復合物

b.免疫球蛋白

19謝謝觀賞2019-7-3

2.HIV病毒檢測：19謝謝觀賞2019-7-

1.血清中抗HIV抗體檢測間接免疫熒光法方法：淋巴細胞(感染HIV)涂片待檢血清(16稀釋FITC-抗人IgG觀察結果結果判定：陽性胞漿出現彌漫性熒光20謝謝觀賞2019-7-320謝謝觀賞2019-7-32.血清中抗HIV抗體檢測免疫印記法方法：HIV-1蛋白抗原裂解物SDS電泳

轉移至硝酸纖維膜+待測血清+HRP-

抗人IgG+酶低物觀察結果。結果判定：陰性無可見顯色條帶陽性可見顯色條帶，根據顯色帶對應的抗原的分子量判定HIV感染，如：

P24、P31和gP41或gP160/120顯色可確定為感染陽性，缺少P24或P31

為可能陽性，只有其一為可疑。21謝謝觀賞2019-7-32.血清中抗HIV抗體檢測免疫印記法21謝謝觀賞2022謝謝觀賞2019-7-322謝謝觀賞2019-7-3第八部分傳染病的免疫學檢測

一、傷寒、副傷寒血清學診斷（一）肥達（Widal）試驗方法：試管法步驟：試管編號稀釋病人血清+菌液混勻,放置16-20小時觀察結果。

結果判定:

以出現++凝集的血清最高稀釋倍數為該血清的凝集抗體的效價23謝謝觀賞2019-7-3第八部分傳染病的免疫學檢測1謝謝觀賞2019-7-324謝謝觀賞2019-7-32謝謝觀賞2019-7-3

正常值：

O≤1:80；H≤1:160

臨床意義：1.“O”和“H”均高于正常值，可考慮為傷寒；恢復期較急性期增長4倍以上確定診斷。

2.“O”抗體（IgM）出現較早，“H”抗體（IgG）出現較晚3.病程第2周以后，大多出現陽性反應，一般以第3、4周陽性率最高，病愈后，可持續數月。25謝謝觀賞2019-7-3正常值：3謝謝觀賞2019-7-3（二）酶聯免疫（ELISA）試驗方法：抗原(傷寒桿菌脂多糖或Vi抗原)包被+待測血清+第二抗體（酶標記）底物顯色參考值：<1:20臨床意義：

1.早期診斷(發病1周后即可升高）

2.檢測抗Vi抗體，可以診斷傷寒帶菌者26謝謝觀賞2019-7-3（二）酶聯免疫（ELISA）試驗4謝謝觀賞2019-7-327謝謝觀賞2019-7-35謝謝觀賞2019-7-3

二、抗鏈球菌溶血素“O”測定

——

溶血抑制法原理：抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）存在于感染鏈球菌病人的血清中，可以和溶血素“O”特異性結合，使之失去溶血作用方法：病人血清倍比稀釋＋溶血素+紅細胞觀察溶血現象結果判定：無溶血現象的血清最高稀釋倍數定為ASO的單位數。參考值：ASO<400U臨床意義：1.鏈球菌感染1周，ASO↑，4～6周達高峰。2.風濕熱：ASO↑。28謝謝觀賞2019-7-3二、抗鏈球菌溶血素“O”測定6謝謝觀賞2019-7-3三、肝炎的免疫學檢測（一）甲型肝炎（HAV）的免疫學檢查：1.糞便中HAV抗原的檢測ELISA夾心法方法：①標本處理：待測糞便+牛肉湯鹽水凍融離心取上清(即待測抗原)；②包被抗體；③加待測標本；④加酶標抗體(HRP-抗甲肝IgG)；⑤加酶底物；⑥測定OD492。結果判斷：待測標本OD值

———————

≥2.1陽性陰性對照OD值29謝謝觀賞2019-7-3三、肝炎的免疫學檢測7謝謝觀賞2019-7-32抗HAV-IgM的檢測抗體捕獲ELISA法方法：抗人μ鏈包被+待檢血清(含抗HAV-IgM)+HAAg+HRP-抗HAV-IgG+酶底物測定OD492。結果判斷：待測標本吸光度值

————————≥2.1陽性陰性對照吸光度值臨床意義：發病4周后，幾乎全部患者抗HAV-IgM

為陽性，用于甲肝診斷。檢測抗HAV-IgG可用于流行病學調查。30謝謝觀賞2019-7-32抗HAV-IgM的檢測8謝謝觀賞2019-7-331謝謝觀賞2019-7-39謝謝觀賞2019-7-3（二）乙型肝炎的免疫學檢測

1.HBsAg的檢測

——反向間接血凝試驗方法：致敏紅細胞(抗HBsAg＋RBC)＋患者血清

(含HBsAg)凝集32謝謝觀賞2019-7-3（二）乙型肝炎的免疫學檢測10謝謝觀賞2019-7-32.抗HBs檢測

ELISA抑制法方法：抗HBs包被+HBsAg(已知濃度)+待測標本+HRP-抗HBs+酶底物目測或測定OD492結果判定：目測：陽性孔－無色或淺黃陰性孔－桔黃色

OD值測定：

<0.5

待測孔OD值陰性對照OD值33謝謝觀賞2019-7-32.抗HBs檢測待測孔OD值陰性對照OD值11謝謝觀賞20134謝謝觀賞2019-7-312謝謝觀賞2019-7-3

血中HBV標志物檢查法及其陽性意義標志物常用檢測法陽性意義

HBsAgELISA夾心法正在或曾經感染抗-HBsELISA抑制法曾感染或疫苗注射抗-HBc(IgM類)抗體捕獲ELISA發病期，慢性惡化期抗-HBc(IgG類)ELISA抑制法曾感染，急性恢復期

HBeAgELISA夾心法,RPHAHBV復制，感染性強抗-HBeELISA抑制法，PHA急性感染，趨向恢復

HBV-DNAPCR法HBV復制前S2AgELISA夾心法HBV復制抗-前S2ELISA抑制法提示預后良好35謝謝觀賞2019-7-3血中HBV標志物檢查法及其陽性意義1四、梅毒血清學檢查

1.未滅活血清反應素試驗(unheatedserumreagintest,USR)玻片凝集法方法：病人血清和脂質抗原(心磷脂、卵磷脂和膽固醇混合物）各一滴玻片上混合振動4min觀察結果結果判斷：－（陰性）無凝集＋（弱陽性）小凝集塊＋＋～＋＋＋(陽性)中或大凝集塊36謝謝觀賞2019-7-3四、梅毒血清學檢查14謝謝觀賞2019-7-32.快速血漿反應素試驗(rapidplasmareagintest,RPR)方法：病人血清＋RPR抗原(活性炭結合類脂質Ag)觀察凝集顆粒或絮片結果判斷：陰性無黑色凝集陽性明顯黑色凝集顆粒或絮片臨床意義：1.梅毒患者USR陽性者，70％～90％；

RPR陽性者，80％～95％。2.某些麻風、SLE、硬皮病、類風濕性關節炎等也可出現USR假陽性。37謝謝觀賞2019-7-32.快速血漿反應素試驗(rapidplasmareag

3.熒光密螺旋體抗體吸收實驗(FAT-ABS)

方法：病人血清(56℃,30min)

加非致病螺旋體抗原吸收滴加于抗原(梅毒螺旋體)

片+FITC-抗人IgG熒光顯微鏡檢查。結果判定：++++++陽性

±

+可疑

-陰性38謝謝觀賞2019-7-33.熒光密螺旋體抗體吸收實驗(FAT-ABS)16謝謝觀賞39謝謝觀賞2019-7-317謝謝觀賞2019-7-3五、獲得性免疫缺陷綜合征(acquiredimmunodeficiencysyndrome,AIDS)的相關檢測技術

1.抗HIV抗體的檢測：

①

酶聯免疫吸附試驗（ELISA）

②明膠顆粒凝集實驗(PA)

③免疫熒光檢測法（IFA）

④免疫印記法（westernblot）