針刺“三陰穴〞對慢性非細菌性前列腺炎大鼠部分免疫功能的影響【摘要】目的討論針刺“三陰穴〞改善慢性非細菌性前列腺炎炎癥反響的部分免疫機制。方法將48只雄性大鼠隨機分成空白組、模型組、藥物組和針刺組，每組12只,采用免疫佐劑法造模后,針刺組、藥物組分別給予針刺“三陰穴〞及舍尼通灌胃治療15d,觀察各組大鼠的前列腺重量、系數、病理改變及組織勻漿中IgG、IL[8、iNS含量的變化。結果與模型組相比,針刺組的前列腺重量和系數明顯降低(P0.05或P0.01)，慢性炎癥的病理表現明顯好轉,針刺組IgG、IL[8、iNS含量較模型組都有所降低，尤以IL[8顯著(P0.05)。結論針刺“三陰穴〞可以改善部分血液循環、調節部分免疫功能、促進炎癥恢復?！娟P鍵詞】慢性非細菌性前列腺炎針刺三陰穴IgGIL[8iNS慢性非細菌性前列腺炎是中青年男性的常見病，占臨床泌尿外科前列腺炎患者的90%～95%。主要表現為會陰睪丸部脹痛、腰骶部酸痛、排尿異常、頭暈乏力、尿道滴白、性功能障礙等?！叭幯è暿枪P者在多年臨床經歷的根底上，通過大量的臨床挑選所確立的治療慢性前列腺炎的特效腧穴。至今已治療患者300余例，總有效率達85%。為了進一步討論“三陰穴〞治療慢性非細菌性前列腺炎〔AP〕的作用機制，并對實驗動物模型標準進一步探索，我們進展本項動物實驗。1材料與方法1.1主要試劑及儀器主要試劑:IL[8放免試劑盒(北京科美東雅生物技術提供，批號S20223089〕；IgG放免試劑盒(中國原子能科學研究所提供，批號S20223090〕；iNS測試盒〔南京建成生物工程研究所提供，批號20220125〕；福氏完全佐劑〔美國Siga公司提供，試劑號FB5189〕；白百破減毒活疫苗(甘肅省疾病預防控制中心提供，批號20221013)；舍尼通普適泰片〔南京美瑞制藥消費，市售，批號20220146〕。主要儀器：低溫高速離心機〔德國HeraeusBifuge28s〕；低溫冰箱(院實驗中心提供)；分析天平〔瑞士B6-1ETTLER〕；光學顯微鏡〔日本lypusHK-213型〕。1.2實驗動物及分組SPF級雄性SD大鼠48只，3月齡，質量〔240±20〕g；另取20只質量為240～300gSD大鼠，用于取前列腺組織勻漿制作前列腺蛋白。均由甘肅中醫學院動物實驗中心提供，實驗動物質量合格證號：SXK〔甘〕2022-0006。動物購置后適應性喂養1周，全部實驗操作均于SPF級動物實驗室進展，設施使用合格證為SYXK(甘)2022-0006。將以上48只大鼠依質量編號，按隨機數字表法分為空白組、模型組、藥物組、針刺組，每組12只。1.3造模方法[1]除空白組外，其余3組大鼠復制慢性非細菌性前列腺炎動物模型?！?〕大鼠前列腺蛋白提純液的制作：取240～300g雄性SD大鼠20只，斷頸處死，在無菌條件下剝取前列腺組織，用冷生理鹽水洗凈，參加含0.5%Tritn100的生理鹽水溶液，在冰水浴上用玻璃勻漿器制成勻漿，用低溫高速離心機〔-40℃〕10000×g離心30in，取上清液，采用雙縮脲法進展蛋白含量測定，最后將上清液用0.1l/L、pH7.2的PBS緩沖液稀釋質量濃度為15g/L?！?〕免疫注射：除空白組外，其余各組大鼠以乙醚麻醉，腹腔注射百白破疫苗0.5L，多點皮內注射大鼠前列腺蛋白提純液和福氏完全佐劑的混懸液(比例為1∶1)1.0L，空白組分別行腹腔及皮內多點注射0.9%生理鹽水注射液0.5L、1.0L，以上各組均分別于第1d、30d注射2次。1.4處理造模后第1d開場,藥物組大鼠將舍尼通普適泰片研末，以蒸餾水溶解灌胃，給藥劑量按動物體外表積比換算等效劑量為13g/kg，給藥體積為10L/kg,每日1次，連續15d；空白組和模型組同樣抓取，但不給予任何治療。針刺組給予針刺“三陰穴〞治療?！叭幯è暟ǎ簥A陰1〔平恥骨結合上緣，在左側腹股溝處〕、夾陰2〔平恥骨結合上緣，在右側腹股溝處〕、重陰〔在會陰穴與陰囊根部之間取穴〕[2]。將大鼠以仰臥位捆綁于鼠板上，以棉簽蘸碘伏擦拭“三陰穴〞，消毒部分皮膚，以32號1寸毫針針刺夾陰1、夾陰2兩穴，進針1；以32號1寸毫針針刺重陰穴，進針1.5。進針后施平補平瀉手法，留針20in。每日1次，共15次。1.5觀察指標前列腺質量、前列腺系數：治療15d后，將各組大鼠斷頸處死，取前列腺組織以分析天平稱取前列腺質量，并計算前列腺系數〔前列腺質量/體質量〕。IgG、IL[8、iNS的檢測：將各組動物脫頸處死，取前列腺組織，沿腹葉中線取半側組織勻漿，將勻漿液以3000r/in離心15in，將上清液分裝3個試管，IgG、IL[8按照試劑盒說明書采用放免法檢測，iNS采用比色法檢測。取另一半前列腺組織，HE染色制作病理切片，鏡下觀察前列腺部分病理變化。1.6統計處理應用SPSS13.0統計軟件進展處理，所有數據用均數±標準差〔±s〕表示，各組間比擬采用單因素方差分析，各個實驗組的兩兩比擬采用最小顯著性差異法。2結果2.1針刺“三陰穴〞對前列腺質量及系數的影響見表1。表1各組大鼠前列腺質量及系數比擬由表1可見：各組之間大鼠質量相比無統計意義(P0.05)，說明各組之間前列腺質量及系數有可比性。造模后模型組前列腺質量及系數與空白組相比顯著增高(P0.05或P0.01)；而治療后藥物組前列腺質量較模型組顯著降低(P0.05)，針刺組前列腺質量及系數較模型組均顯著降低(P0.05或P0.01)；與藥物組相比，針刺組前列腺質量及系數的變化無統計意義〔P0.05〕。2.2針刺三陰穴對前列腺組織的影響〔1〕空白組：大鼠前列腺被膜、縱隔均正常,腺上皮為單層柱狀上皮，位于基底部，腺泡腔內無或有很少分泌物,腺泡之間排列嚴密〔見圖A〕。〔2〕模型組：大鼠前列腺組織表現為血管擴張,腺上皮增生,可見立方、柱狀、高柱狀、假復層等表現,腺上皮細胞核染色深淺不一，胞漿嗜堿性，腺腔擴張,腔內有分泌物,間質疏松,有大量慢性炎癥細胞浸潤(見圖B)?！?〕藥物組：可見部分腺上皮細胞增生,排列紊亂,腺腔增大,部分含有分泌顆粒和慢性炎癥細胞，間質可散見有血管充血及纖維組織增生〔見圖〕?！?〕針刺組：腺上皮細胞增生改善,排列整齊,間質水腫、充血,炎細胞浸潤較模型組明顯減輕,腺泡中央未見炎細胞充盈〔見圖D〕。A.空白組前列腺上皮呈立方體,未見明顯增生B.模型組前列腺上皮增生,部分呈乳頭狀,突入腹腔內,間質呈大量慢性炎細胞浸潤.藥物組部分前列腺腺體上皮仍為高柱狀及乳頭狀增生，間質可見有纖維增生D.針刺組前列腺上皮增生有所改善，未見明顯的纖維組織增生及炎細胞浸潤圖1各組大鼠前列腺部分病理〔HE染色,×100〕2.3各組IgG、IL[8、iNS的變化由表2可見，模型組大鼠前列腺組織勻漿中IgG、IL[8、iNS的含量顯著高于空白組(P0.05)，說明前列腺部分處于炎病癥態；與模型組相比，針刺組大鼠前列腺部分IL[8程度顯著降低(P0.05)，IgG、iNS程度也有不同程度的降低，但無統計意義(P0.05)；與藥物組相比，針刺組IL[8的含量顯著降低(P0.05)，而IgG、iNS無統計意義(P0.05)。3討論慢性非細菌性前列腺炎的病因及病理學過程尚無明確定論,文獻報道和研究結果說明,引起非細菌性前列腺炎的原因眾多,主要有尿液返流、微生物感染等因素,同時其發病與前列腺組織的部分免疫反響異常有著親密的關系,前列腺具有保護生殖系統免遭細菌和其他病原微生物侵襲的部分免疫功能,當前列腺組織出現部分免疫功能異常,可引起前列腺組織的生理功能改變,出現一系列的病理變化。祖國醫學認為本病的發生,多因嗜食肥甘,中焦濕熱下注,或手淫及房室不節(潔),致腎氣虛衰、濕熱之邪乘虛而入所致，屬本虛標實之證。中醫辨證多將其分為氣滯血瘀型、濕熱蘊結型、陰虛火旺型及腎陽虛損型。表2各組大鼠IgG、IL[8、iNS的變化注：與模型組比擬★P0.05；與藥物組比擬△P0.05IgG為機體抗感染的主要抗體，當機體罹患某些疾病或機體內外環境發生了某些特定的變化,可以導致前列腺部分抗原(PSA)的暴露,刺激血液、組織中的淋巴細胞調節抗體的生成，發揮免疫調理及抗體依賴性細胞毒作用〔AD〕。IL[8是一種強效炎癥趨化因子,其主要功能是誘導中性粒細胞和單核細胞向炎癥部位聚集和調節白細胞黏附分子的表達,誘導部分炎癥反響中白細胞的趨化活性,引起部分組織炎癥和損傷。在慢性炎癥中，當單核細胞、吞噬細胞、內皮細胞和其他細胞活化或刺激時，iNS誘導合成的大量N具有細胞毒作用，可殺傷微生物(包括細菌、病毒、真菌)、寄生蟲和腫瘤細胞并造成炎癥部位的正常組織損傷。舍尼通可阻斷雄激素二氫睪酮和前列腺受體結合過程，抑制前列腺的上皮細胞增殖，抑制內源性炎癥介質的合成，具有抗炎、消腫、促進排尿的作用，是目前較為公認的治療慢性非細菌性前列腺炎的藥物。本研究結果說明，針刺“三陰穴〞在改善慢性非細菌性前列腺炎炎癥反響方面獲得了與舍尼通相近甚至優于舍尼通的效果?！叭幯è曋袏A陰1、夾陰2兩穴位于腹股溝處，動、靜脈及神經分布豐富；重陰穴位于陰部，深處有陰部動、靜脈分支及會陰神經的分支，故而認為針刺“三陰穴〞,可調節腹股溝及陰部動、靜脈以及支配前列腺的髂腹股溝神經及會陰神經，有效地改善病變前列腺的血液循環，促進炎癥的吸收，解除臨床上諸如會陰、少腹及腰骶部的墜脹、疼痛等不適病癥。針刺“三陰穴〞后大鼠前列腺質量及系數較模型組顯著降低，可見針刺“三陰穴〞可以抑制炎癥過程中血管通透性的增加，從而減少炎性滲出液，減輕炎癥區白細胞的浸潤，改善血液及淋巴液的淤滯及纖維組織增生。針刺“三陰穴〞后大鼠前列腺組