1、第五章 巴比妥類藥物的分析基本要求一、掌握我國(guó)藥典中巴比妥類藥物的鑒別和含量測(cè)定的基本原理與方法。二、熟悉國(guó)外藥典本類藥物鑒別和含量測(cè)定的基本原理與方法。三、了解本類藥物的體內(nèi)分析方法。一、巴比妥類藥物的結(jié)構(gòu)剖析巴比妥類藥物為環(huán)狀酰脲類鎮(zhèn)靜催眠藥，是巴比妥酸的衍生物，其基本結(jié)構(gòu)通式為：5-位取代基R1和R2不同，形成不同巴比妥類藥物，具有不同的理化性質(zhì)。臨床上常用的本類藥物多為巴比妥酸的5，5-二取代衍生物，少數(shù)1，5，5-三取代或C2 位為硫取代的硫代巴比妥酸的5，5-二取代衍生物。巴比妥類藥物的基本結(jié)構(gòu)可分為兩部分：一部分為母核巴比妥酸環(huán)狀丙二酰脲結(jié)構(gòu)。此結(jié)構(gòu)是巴比妥類藥物的共同部分，決定

2、巴比妥類藥物的共性，可用于與其它類藥物相區(qū)別。另一部分是取代基部分，即R1和R2等。根據(jù)取代基不同，可以形成各種具體的巴比妥類藥物，并具有不同的理化性質(zhì)。這些理化性質(zhì)可用于各種巴比妥類藥物之間的相互區(qū)別。(一) 弱酸性巴比妥類藥物的母核環(huán)狀結(jié)構(gòu)中含有1，3-二酰亞胺基團(tuán)，能使其分子發(fā)生酮式-烯醇式互變異構(gòu),在水溶液中發(fā)生二級(jí)電離。本類藥物具有弱酸性(pKa值為7.38.4)故可與強(qiáng)堿反應(yīng)生成水溶性的鹽類，一般為鈉鹽。由弱酸與強(qiáng)堿形成的巴比妥鈉鹽，其水溶液呈堿性，加酸酸化后，則析出結(jié)晶性的游離巴比妥類藥物，可用有機(jī)溶劑將其提取出來(lái)。上述這些性質(zhì)可用于巴比妥類藥物的分離、鑒別、檢查和含量測(cè)定。2巴

3、比妥類藥物鈉鹽的水解本類藥物的鈉鹽，在吸濕的情況下也能水解。一般情況下，在室溫和Ph10 以下水解較慢；pH11 以上隨著堿度的增加水解速度加快。(三) 與重金屬離子的反應(yīng)1與銀鹽的反應(yīng)難溶性二銀鹽白色沉淀。可溶性的一銀鹽2與銅鹽的反應(yīng)銅離子吡啶溶液穩(wěn)定的配位化合物4與汞鹽的反應(yīng)白色汞鹽沉淀,能溶于氨試液(四) 與香草醛(Vanillin)的反應(yīng)加乙醇后，其反應(yīng)產(chǎn)物可轉(zhuǎn)變?yōu)椋毫虼捅韧最愃幬锏淖贤馕展庾V在鹽酸溶液（0.1mol/L）中，兩個(gè)吸收峰分別在287nm和238nm；(-)在氫氧化鈉溶液（0.1mol/L）中，兩只吸收峰分別移至304nm和255nm。(）在pH13 的強(qiáng)堿性溶液中，

4、硫代巴比妥類藥物在255nm處的吸收峰消失，只存在304nm處的吸收峰。（六）薄層色譜行為特征1、 薄層色譜法 取巴比妥類藥物約50g點(diǎn)于硅膠GF254薄層板上，以氯仿-丙酮（4:1）混合液作流動(dòng)相，展開(kāi)后，薄層板用溫?zé)峥諝饬鬟M(jìn) 行干燥，然后噴灑2%的氯化汞乙醇溶液，繼之再噴灑2%的1，5-二苯卡巴腙乙醇溶液。此時(shí)則在紫色的背景上觀察到巴比妥類藥物的白色斑點(diǎn)。2、高效液相色譜法 取巴比妥類藥物的乙醇溶液（1mg/ml）2l，注入ODS柱（250mm4.6mm，填充5m的Spherisord ODS）中，用磷酸二氫鈉（0.1mol /L）用氫氧化鈉液（5mol/L）調(diào)節(jié)pH 至8.5-甲醇（4:

5、1）混合溶液作為流動(dòng)相，流速為0.8ml/min，以UV檢測(cè)器于210nm波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，其保留行為應(yīng)與對(duì)照品一致。三、鑒別試驗(yàn)（一）丙二酰脲類鑒別反應(yīng)1、銀鹽反應(yīng)的方法 取供試品約0.1g，加碳酸鈉試液（一水合碳酸鈉12.5g 或無(wú)水碳酸鈉10.5g，加水溶解成100ml，即得）1ml與水10 ml，振搖2min，濾過(guò)，濾液中逐滴加入硝酸銀試液，即生成白色沉淀，振搖，沉淀即溶解；繼續(xù)滴加過(guò)量的硝酸銀試液，沉淀不再溶解。2、銅鹽反應(yīng)的方法 取供試品約50mg，加吡啶溶液（110）5ml，溶解后加銅吡啶試液（硫酸銅4g，加水90ml溶解后，加吡啶30ml，即得）1ml，即顯紫色或生成紫色沉淀。（二

6、）測(cè)定熔點(diǎn)1、司可巴比妥鈉的鑒別 取本品1g，加水100 ml 溶解后，加稀醋酸5ml，強(qiáng)力攪拌，再加水200ml，加熱煮沸使溶解成澄清溶液（液面無(wú)油狀物），放冷，靜置后析出結(jié)晶，濾過(guò)，結(jié)晶在70干燥后，熔點(diǎn)約為97。2、苯巴比妥鈉的鑒別 中國(guó)藥典的方法：取本品約0.5g，加水5ml溶解后，加稍過(guò)量的稀鹽酸，即析出白色結(jié)晶性沉淀，濾過(guò)；沉淀用水洗凈，在105干燥后，熔點(diǎn)應(yīng)為174- 178。（三）利用特殊取代基或元素的鑒別試驗(yàn)1、利用不飽和取代基的鑒別試驗(yàn)（1） 碘試液的反應(yīng)：（2）與高錳酸鉀的反應(yīng)：3、硫元素的鑒別試驗(yàn)用于硫代巴比妥類與巴比妥類藥物的區(qū)別。黑色的硫化鉛四、特殊雜質(zhì)檢查合成工藝

7、：2、溶液的澄清度 本項(xiàng)檢查主要是控制苯巴比妥中乙醇不溶性雜質(zhì)，利用苯巴比妥酸這些雜質(zhì)在乙醇溶液中的溶解度比苯巴比妥小的特性進(jìn)行檢查。檢查方法：取本品1.0g，加乙醇5ml，加熱回流3min，溶液應(yīng)澄清。3、中性或堿性物質(zhì) 中性或堿性物質(zhì)是由中間體（）形成的副產(chǎn)物2-苯基丁二酰胺、2-苯基丁二酰脲或分解產(chǎn)物等雜質(zhì)，不溶于氫氧化鈉試液但溶于乙醚；而苯巴比妥具有酸性，溶于氫氧化鈉試液，故采用提取重量法測(cè)定其含量。利用這些雜質(zhì)與苯巴比妥在氫氧化鈉試液和乙醚中的溶解度不同，采用提取重量法測(cè)定雜質(zhì)含量。五、含量測(cè)定（一）銀量法 在滴定過(guò)程中，巴比妥類藥物首先形成可溶性的一銀鹽，當(dāng)被測(cè)定的巴比妥類藥物完全

8、形成一銀鹽后，稍過(guò)量的銀離子就與巴比妥類藥物形成難溶性的二銀鹽沉淀，使溶液變渾濁，以此指示滴定終點(diǎn)。中國(guó)藥典均可采用銀量法測(cè)定其含量異戊巴比妥及其鈉鹽的測(cè)定：取本品約0.2g，精密稱定，加甲醇40ml使溶解，再加新鮮配制的3%無(wú)水碳酸鈉溶液15ml，照電位法，用硝酸銀滴定液（0.1mol/L）滴定，即得。每1ml硝酸銀滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于22.63mg的C11H18N2O（3 或24.83mg的C11H17N2NaO3）。（二）溴量法 凡在5位取代基含有不飽和鍵的巴比妥類藥物，其不飽和鍵能與溴定量地發(fā)生加成反應(yīng)，故可采用溴量法測(cè)定其含量（三）酸堿滴定法1、在水-乙醇混合溶劑中的滴定

9、 基于本類藥物在水中的溶解度較小，滴定時(shí)多在醇溶液或含水的醇溶液中進(jìn)行，這樣可避免反應(yīng)中產(chǎn)生的弱酸鹽易于水解而影響滴定終點(diǎn)。常以麝香草酚酞為指示劑，滴定至淡藍(lán)色為終點(diǎn)。2、在膠束水溶液中的滴定方法 本法是在有機(jī)表面活性劑的膠束水溶液中進(jìn)行滴定，用指示劑或電位法指示終點(diǎn)。因表面活性劑能改變巴比妥類藥物的離解平衡，使藥物的Ka增大，即使巴比妥類藥物酸性增強(qiáng)，因此使滴定終點(diǎn)變化明顯。常用的有機(jī)表面活性劑有：溴化十六烷基三甲基芐銨和氯化四癸基二甲基芐銨。3、非水溶液滴定法 巴比妥類藥物在非水溶液中的酸性增強(qiáng)，用堿性標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定時(shí)，終點(diǎn)較為明顯，可獲得比較滿意的結(jié)果。測(cè)定時(shí)常用的有機(jī)溶劑有二甲基甲酰胺、

10、甲醇、氯仿、丙酮、無(wú)水乙醇、苯、吡啶、甲醇-苯（15:85）、乙醇-氯仿（1:10）等；常用的滴定劑有甲醇鉀（鈉）的甲醇（或乙醇）溶液、氫氧化四丁基銨的氯苯溶液等；常用的指示劑為麝香草酚藍(lán)等，也可用玻璃-甘汞電極系統(tǒng)，以電位法指示終點(diǎn)。（四）紫外分光光度法 巴比妥類藥物在酸性介質(zhì)中幾乎不電離，無(wú)明顯的紫外吸收。但在堿性介質(zhì)中電離為具有紫外吸收特征的結(jié)構(gòu)，因而可采用紫外分光光度法測(cè)定其含量一些巴比妥類藥物紫外吸收的有關(guān)數(shù)據(jù)1、直接測(cè)定的紫外分光光度法 本法是將供試品溶解后，根據(jù)溶液的pH，在最大吸收波長(zhǎng)（max）處，直接測(cè)定對(duì)照品溶液和供試品溶液的吸收度，再計(jì)算藥物的含量。中國(guó)藥典對(duì)注射用硫噴妥

11、鈉的含量測(cè)定采用本法。2、提取分離后的紫外分光光度法 根據(jù)巴比妥類藥物具有弱酸性，在氯仿等有機(jī)溶劑中易溶，而其鈉鹽在水中易溶的特點(diǎn)。測(cè)定時(shí)取供試液適量，加酸酸化后，用氯仿提取巴比妥藥物。氯仿提取液加pH7.2-7.5 緩沖溶液（水10ml-25ml，加碳酸氫鈉1g，10%鹽酸3-4滴），振搖，分離棄去水相緩沖液層。再用0.45mol/L 氫氧化鈉溶液提取氯仿層中的巴比妥類藥物，將堿提取液調(diào)節(jié)至適宜pH，然后選擇相應(yīng)的吸收波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定。本法可消除干擾物質(zhì)對(duì)巴比妥類藥物測(cè)定的影響，因此USP(25)對(duì)苯巴比妥鈉的含量測(cè)定采用本法。3、差示紫外分光光度法 本法是利用巴比妥藥物在不同pH值溶液中的電離級(jí)數(shù)不同，因而產(chǎn)生紫外吸收光譜的情況不同，以此為依據(jù)設(shè)計(jì)測(cè)定方法。該法常用于巴比妥類藥物的制劑分析，也可用于體內(nèi)巴比妥類藥物的監(jiān)測(cè)。課堂練習(xí)與思考1、利用特殊取代基或元素的專屬反應(yīng)可以區(qū)分不同的巴比妥類藥物，以下可用做專屬鑒別試驗(yàn)的為：A: 司可巴比妥鈉水溶液滴加碘試液，所顯棕黃 色5min內(nèi)消失。B: 苯巴比妥與甲醛-硫酸反應(yīng)，生成玫瑰紅色 產(chǎn)物。C: 硫噴妥鈉在氫氧化鈉試液中與鉛離子反應(yīng)生 成白色沉淀。D: 苯巴比