1、醫藥工業環境監控吳國平2021/9/101環境監控內容環境污染的控制環境監控和評估警戒限度、糾偏限度的設置環境監控的偏差處理趨勢分析微生物鑒定2021/9/1021. 環境污染的控制環境污染污染包括宏觀的污染（玻璃，金屬，塑料碎片）微觀的污染（微生物、塵埃微粒和過敏物質）2021/9/104環境污染污染導致產品不合格，可能會引起無法預料的后果從顧客角度考慮，污染就意味著降低產品的功效加重病人的病情或致病人死亡從公司角度考慮，污染就意味著 一種低質量的產品顧客忠誠度下降召回2021/9/105廠房公用設施設備人員文件規程物料產品環境控制要素2021/9/106污染源和污染因素廠房：灰塵、細菌、非

2、活性微粒公用設施：細菌、非活性微粒、碳氫化合物、氣溶膠設備：細菌、非活性微粒、難以清潔的位置過程：非無菌的接觸面、利于微生物生長的條件、氣溶膠、金屬碎片、纖維、玻璃和橡膠顆粒人：活性的和非活性的微粒(皮膚細胞、細菌)2021/9/107污染類型舉例來源（舉例）處理方法（舉例）非活性（粒子）金屬斑點衣物纖維儀器人員衣物外部空氣供水懸浮粒子由高效過濾器過濾接觸部分清潔和滅菌純化水系統活性（微生物）細菌酵母，霉菌人員水外部空氣儀器工具輔料活性物質有限的無菌核心區干擾懸浮粒子由高效過濾器過濾溶液無菌過濾（0.2um）蒸汽滅菌或零件的輻射滅菌內毒素（通常與空氣中的細菌無關）來源于某種有機體細胞壁（經常水

3、生的）潮濕的設備或更換零件，或暴露一段時間后的容器/密封容器加熱的苛性鈉溶液高溫（大于200C）時間視情況而定無菌生產過程的污染來源2021/9/108環境污染的控制潔凈狀態的維持通常依靠以下幾類屏障高標準衛生(消毒清潔、個人衛生、潔凈區行為規范)潔凈室消毒清洗程序氣閘和更衣程序防護性著裝(頭罩、護目鏡、操作服、腳套、手套)HVAC系統2021/9/109環境污染的控制要達到潔凈區域有效環境控制，要求：合理的潔凈區域設計和設備選擇合理的操作流程和清潔/消毒/維護/監控流程人員對SOP的嚴格執行2021/9/10102. 環境監控和評估環境監控的來由醫藥行業的質量要求醫藥行業的高要求：質量Qua

4、lity安全Safety療效Efficacy建立合適的環境監控體系是達到醫藥行業質量高要求的有效保障2021/9/1012環境監控一個良好的環境監控體系可執行生產 / IPC / QC / QA具有說服力內部人員 / 外部審計結果有價值2021/9/1013環境監控目的 1說明過程控制、清潔消毒程序是否有效，人員操作是否適當通過趨勢分析，在發生偏差前，及早做出調整確認潔凈區域的環境，是否達到了藥品生產的要求。以確保最終產品的的生物、理化特性都不會受到生產環境的影響2021/9/1014環境監控目的 2合適的環境監控程序應能做到，區分正常原因造成的環境變化，與非正常原因造成環境變化。e.g. 人

5、員進出潔凈區域，因開門關門造成壓差變化因為非正常原因造成的環境變化，往往源自于機械故障和人員活動造成的污染環境監控結果的分析和偏差調查至關重要2021/9/1015環境監控，包括以下部分:潔凈級別劃分和評估受控？何級別？何種活動？環境參數？監測項目？采樣計劃的設定采樣數據的評估發生偏差后的修正2021/9/1016環境監控區域的概念2021/9/1017中國GMP附件1（2010年）的級別劃分潔凈級別靜態 動態 最大允許空氣懸浮粒子數（微粒數/m3）0.5m 5m 0.5m 5m A 3 520 203 520 20B 3 520 29 352 000 2 900C 352 0002 900

6、3 520 00029 000 D 3,520,000 29 000 不作規定不作規定2021/9/1018實行全面監控空氣潔凈度、表面微生物、人員衛生狀況 分析和評價環境凈化設施總體運行狀況 實行動態監控環境控制和評估2021/9/1019定期進行再驗證定期進行趨勢分析制定警戒限度和糾偏限度及時處理異常或超限度結果制定和實施系統的環境監測方案環境控制和評估2021/9/1020風險分析原則基于對患者安全性的考慮工藝對產品的影響設施的特點環境控制和評估212021/9/1021環境監控計劃的建立建立環境監控計劃，包括:采樣點位置和數量的設定(根據位置和用途)監測頻率(每日、每周、月度、季度)采

7、樣類型、方式(浮游菌、表面樣/RODAC、棉簽法)警戒限度和糾偏限度超警戒限度和超糾偏限度的應對流程趨勢分析微生物鑒定人員培訓2021/9/1022環境監測項目 潔凈區域所需要進行的環境監測項目主要包括:懸浮粒子測試沉降菌(定性監測)浮游菌(定量監測)表面微生物 溫度和濕度 (房間) 房間或者區域間的壓差風速(層流臺、生物安全柜)2021/9/1023監測標準GB/T 16292 / ISO 14644-1監測狀態靜態 / 動態 / 空態監測時間通常在操作開始前、進行中及結束后三個階段懸浮粒子監測242021/9/1024靜態和動態取樣靜態情況下的采樣:非活性微粒僅在廠房確認時活性微粒僅關鍵表

8、面和人員樣空氣流僅在廠房或者設備確認時動態情況下的采樣:所有日常監控非活性和活性微粒2021/9/1025懸浮粒子取樣位置的選擇潔凈區（室）空氣懸浮粒子、浮游菌及沉降菌的最少取樣點數GB/T 16292 - 16294 ISO 14644-1空態或靜態測試：懸浮粒子采樣點數目及其布置應力求均勻，并不得少于最少采樣點數目動態測試：懸浮粒子采樣點數目及其布置應根據產品的生產及工藝關鍵操作區設置2021/9/1026懸浮粒子監測的頻率A級區的監測頻率和采樣量應能檢出對環境的所有干擾檢出瞬時的事件和任何系統的損壞并在超過警戒限度時啟動報警。在灌裝時，由于產品本身也能產生粒子和霧滴，證明5.0um的塵粒

9、始終達標可能并不現實，這是可以接受建議在B級區域采用相似的監測系統，采樣頻率可以降低。應按照質量風險管理原則，對C級和D級區進行動態監控。應根據所從事操作的性質來確定監控要求以及警戒/糾偏措施限度，但應能達到建議的“自凈時間”。2021/9/1027沉降菌測試屬于被動式取樣法，對空氣環境破壞小空氣浮游菌測試屬于主動式取樣法表面微生物監測接觸碟取樣拭子取樣微生物監測2021/9/1028微生物取樣點數和位置的確定微生物監測的采樣點設置一般會考慮但不局限于以下影響因素：驗證的數據生產工藝的風險程度(開放式/封閉式生產過程)氣流形式區域中的活動級別/潔凈級別采樣對生產過程的影響人員干預的程度人員和物

10、料的流通形式取樣具有代表性，同時避免污染2021/9/1029培養基和培養條件必須具有廣譜性廣譜培養基TSA或NA專用于酵母菌和霉菌分離生長的特定培養基表面監測用培養基中的添加劑3035，48 72小時 + 2025，5 7天在20 25和30 35下均需培養不少于72小時。不能確定微生物種類時，可將同一塊平板放置在兩個溫度下培養，并且采用先高溫后低溫的做法培養條件2021/9/1030微生物環境監測頻率(無菌制劑)監測區域取樣頻率潔凈室 / RABS關鍵區域 (ISO 5 或更高級別)浮游菌每生產班次均監測表面樣生產結束時與關鍵區域鄰近的無菌區域所有監測項目每生產班次均監測其他非相鄰的無菌區

11、域所有監測項目每天1次隔離器關鍵區域 (ISO 5 或更高級別)浮游菌每天1次表面樣每個campaign生產結束時隔離器外非無菌區域 所有監測項目每月1次2021/9/1031微生物環境監測頻率非無菌制劑劑型取樣頻率口服固體制劑，如壓制片、充粉或充液膠囊劑每3個月一次口服液體制劑每月1次局部用藥，如洗劑、軟膏劑、乳膏劑、直腸栓劑每月1次陰道栓劑每周1次鼻用噴霧劑每周1次吸入性氣霧劑或溶液每天1次2021/9/1032根據其產品或工藝的特性來自行設置溫濕度的限度，并制定監測的頻率溫濕度332021/9/1033潔凈區與非潔凈區之間、不同級別潔凈區之間的壓差應不低于10 Pa應在壓差十分重要的相鄰

12、級別區之間安裝壓差表壓差數據應定期記錄或者歸入有關文檔中壓差342021/9/1034警戒限度和糾偏限度(微生物監測)用以幫助監控和趨勢分析，起到警告和控制的作用需要根據區域、級別的不同，而設置不同的警戒限度和糾偏限度限度的設置應基于歷史數據的回顧，并定期回顧2021/9/1035初始設置當沒有歷史數據，或者歷史數據不足以分析得到警戒限度和糾偏限度的時候，可設置：糾偏限度使用法規規定值，警戒限度設定為糾偏限度的一定百分比，e.g. 1/2糾偏限度和警戒限度設定為法規規定值的一定百分比(e.g. 50%和30%)2021/9/1036基于已有數據的設置確定用于計算限度的數據(如有)，可以使用下列

13、方法：對于新的或者有重大修改的系統，在計算限度前，應收集至少6個月的數據對于已有的設施，應使用12個月甚至更長時間的歷史數據剔除所有超過糾偏限度的數據將數據根據區域、級別進行分組(環境、水系統)剔除設施非正常狀態下采集的數據取樣錯誤 / 不合適的技術 / 斷電 / HVAC失敗2021/9/1037設置的常用方法警戒限度和糾偏限度的設置常用的方法有：平均值與標準偏差百分比質量控制圖2021/9/1038平均值與標準偏差警戒限度：平均值 + 2 * 標準偏差糾偏限度：平均值 + 3 * 標準偏差 正態分布 負指數分布 泊松分布2021/9/1039百分比將樣本數據，從大到小，降序排列k = n

14、( p * n ) k：樣本序列號；p：百分比；n：樣品數量找到k樣本序列號對應的結果，作為限度值警戒限度 = n ( 0.95 * n )糾偏限度 = n - ( 0.99 * n )2021/9/1040環境監控常用的控制圖單值控制圖(Individuals charts)不合格品數控制圖(c-charts)修正的控制圖(Modified)2021/9/1041環境監控偏差處理的基本原則超警戒限度和超糾偏限度后所采取的偏差處理流程，應在受控的文件中做出規定任何超糾偏限度的偏差，應進行徹底和詳細的調查環境監控警戒限度和糾偏限度，并不是產品的規格值環境監控數據，應作為無菌產品批次放行的評估依據

15、，但不應該作為判斷產品無菌性的直接檢測標準2021/9/1042環境監控偏差的處理靜態條件(rest / static condition)下進行額外取樣，可能會有助于鑒別污染的來源如有可能，超糾偏限度的情況下，發現的微生物都應該鑒定至種水平若超警戒限度，可以使用革蘭氏染色等形態學鑒別方法對發現的微生物進行分類2021/9/1043偏差原因的調查導致環境偏差的原因取樣和分析錯誤人員操作不規范屏障措施(Barrier)失效清潔和消毒限度設置不適當廠房設計缺陷2021/9/1044趨勢分析環境監控的結果，需要由合格的人員，在規定的周期進行總結，以確認系統/過程是否處于合適的控制狀態下目的：確認系統

16、/過程是否處于合適的控制狀態當發生偏差時，有助于形成糾偏措施和/或預防措施2021/9/1045趨勢分析需要進行趨勢分析的數據包括：空氣樣 (沉降菌 / 浮游菌 / 懸浮粒子)表面樣人員樣產品直接接觸的壓縮空氣水系統 (生物載荷 / TOC / 電導率 / 內毒素)壓差 / 溫度 / 濕度微生物鑒定2021/9/1046趨勢分析趨勢分析至少需要4個數據點為了確認區域/設備是運行于控制范圍內，應在規定的時間間隔下進行趨勢分析。基于質量風險控制的原則，設置趨勢分析的頻率、需要進行評估的數據的范圍若出現持續偏差于普通數據水平的情況，則說明出現了不利趨勢adverse trend (AT)。應進行偏差

17、調查，這些情況包括：警戒限度下陽性結果數量的增加某區域中超警戒限度或者超糾偏限度監控結果數量的增加2021/9/1047監測頻率趨勢分析頻率連續監控系統連續(定期復核)每天、每半周或者每周每月每兩周或者每月每季度每季度每年每六個月每兩年監測頻率和趨勢分析頻率2021/9/1048趨勢分析示例2021/9/1049趨勢分析示例Compare Item比較項目Year 20112011 年Year 20122012 年3rd Quarter第三季度4th Quarter第四季度1st Quarter第一季度Settling Plate Monitoring沉降平板監控Qty of Sites fo

18、und with microorganism 發現有微生物生長的取樣點數111Times/percent of microorganism detected微生物檢出次數/百分比7 / 26.92%6 / 25.00%7/ 35.00%OOS超標000Airsampler Monitoring空氣取樣器監控Qty of Sites found with microorganism 發現有微生物生長的取樣點數111Times/percent of microorganism detected微生物檢出次數/百分比8 / 30.77%8 / 33.33%7/ 35.00%OOS超標000Rodac

19、 Test表面監控Qty of Sites found with microorganism 發現有微生物生長的取樣點數112Times/percent of microorganism detected微生物檢出次數/百分比1 / 2.56%2 / 5.56%3/ 9.1%OOS超標0002021/9/1050受訓范圍應包括工作于環境控制區內的所有人員包括生產操作人員、環境監測人員、現場維修人員培訓內容GMP培訓，SOP培訓 無菌工藝的基本原理，基礎知識培訓 生產和操作程序與產品污染的相關性無菌操作技術，潔凈室行為基本無菌操作技術更衣驗證人員培訓2021/9/10513. 微生物鑒定微生物鑒

20、定微生物鑒定是潔凈區域控制的一個重要手段，卻往往在日常工作中容易被忽視2021/9/1053微生物鑒定目的 1潔凈區域是一個人工制造的環境，它建立在：對進入該區域的人員以及物料控制對清潔消毒措施的嚴格執行2021/9/1054微生物鑒定目的 2通過微生物鑒定，可以幫助我們：了解潔凈區域中的微生物，也就能夠使用合適的方法控制和限制這個區域中的微生物，在產品污染發生前就能采取合適的糾正措施排除生產環境中的致病菌用于偏差調查和趨勢分析2021/9/1055微生物鑒定應與具體使用情況相結合，例如：無菌關鍵區域，鑒定至種水平，甚至株水平在非無菌區域，鑒定至屬水平，甚至只需革蘭氏染色大部分的微生物鑒定都是

21、基于革蘭氏染色2021/9/1056微生物鑒定示例來源鑒定水平A/B/C級區域沉降、浮游、表面樣所有分離微生物鑒定至種水平人員樣WFI成品和原料(微生物限度測試)無菌測試純化水超警戒限度，鑒定至種/屬水平清潔驗證排除控制菌和目標菌D級區域沉降、浮游、表面樣超糾偏限度時，革蘭氏染色分類飲用水2021/9/1057微生物鑒定微生物鑒定的步驟分離純化記錄菌落形態特征革蘭氏染色顯微鏡觀察細胞形態基本的生化反應(若需要)使用微生物鑒定試劑盒或者鑒定系統進行鑒定判讀和記錄鑒定結果2021/9/1058表型性狀類別特性菌落特性菌落形態、顏色、大小、產色素單個微生物細胞形態、大小、革蘭氏染色情況、有否芽孢生理

22、學特性生長溫度、pH范圍、是否厭氧生化特性利用的碳源、是否發酵抑制特性耐受膽鹽、抗生素敏感性血清學特性凝集反應化學分類微生物毒素2021/9/1059微生物鑒定基于微生物表型性狀的微生物鑒定系統：API、Vitek、Crystal、Biolog基于基因技術的微生物鑒定系統：Qualicon Riboprinter / Diversilabs / MicroSEQ2021/9/1060微生物鑒定選擇用于環境監控樣品分析的微生物鑒定系統：監控區域的級別與產品的類型樣品數量費用分析員維護2021/9/1061微生物鑒定數據的應用微生物鑒定數據應用的難點：復雜，無法用統計學工具分析，對分析者的要求高對

23、其意義的認知缺乏系統性定期回顧匯總直觀地了解潔凈區域中微生物的組成2021/9/1062潔凈區域中的微生物組成分類發現概率革蘭氏陽性球菌75 - 90%產芽孢、革蘭氏陽性桿菌10 25%革蘭氏陽性桿菌氧化酶陽性、革蘭氏陰性桿菌(非發酵)氧化酶陰性、革蘭氏陰性桿菌(發酵)酵母菌1 - 2%霉菌2021/9/1063微生物鑒定數據回顧A級區域B級區域人員樣Gram+球菌(Staphylococcus aureus)81%(5%)77%(10%)87%(6%)產芽孢、革蘭氏陽性桿菌6%3%4%非產芽孢、革蘭氏陽性桿菌8%12%3%氧化酶陽性、革蘭氏陰性桿菌5%8%6%氧化酶陰性、革蘭氏陰性桿菌1%1

24、%1%酵母菌0%0%0%霉菌0%0%0%2021/9/1064微生物鑒定數據的應用當潔凈區域中微生物的組成發生明顯變化的時候，可能是某種污染源沒有得到有效控制，或者發生了偏差作為各種消毒劑的選擇、消毒程序的開發、清潔驗證、偏差調查等的背景資料2021/9/10654.培養基模擬灌裝2021/9/10內容培養基灌裝目標試驗設計頻率和灌裝批次灌裝時間/灌裝量灌裝速度/環境條件/培養基灌裝樣品的培養和檢查培養基灌裝評價/可接受標準/總結報告陽性結果的調查/培養基灌裝實驗的常見缺陷 劑型舉例最差條件討論2021/9/10培養基灌裝目標對無菌工藝進行驗證，并確保有能力進行無菌產品生產。To “detec

25、t flaws or weaknesses, which may not be normally observable” and to make corrections in order to eliminate routes of contamination 發現通常不能發現的缺陷或薄弱環節，并進行改進以消除污染途徑Noble, P., PDA Journal of Pharmaceutical Science and Technology, July/August 2001.“Media fills should not be used to justify practices that

26、pose unnecessary contamination risks.” FDA cGMP Aseptic Processing 培養基模擬灌裝不得用于證明那些可能帶來不必要污染風險的操作的合理性。 FDA cGMP 無菌工藝指南 2021/9/10試驗設計盡可能的模擬實際生產過程包含和正常生產中出現污染相同的風險因素體現生產中可能出現的最壞情況：流程、生產環境與操作者培養基灌裝試驗中所進行模擬的條件和活動的原則應明確定義2021/9/10頻率和批次數在生產線首次確認中，應至少成功地進行3個連續的獨立批次灌裝此后，每條灌裝線應每半年進行一次確認，來評估無菌工藝的受控狀態當數據顯示工藝過程可

27、能不受控時：如果培養基灌裝失敗的調查發現原因明確：進行糾正并重新進行(基于調查的結果重復1-3批）如果調查結果沒有確定原因：對可能的原因進行糾正并進行3批模擬灌裝2021/9/10灌裝量通常，合理的初始灌裝批量范圍是5000-10000瓶。當實際生產批量小于5000時，每批培養基灌裝數量應與實際批量相同根據工藝設計的情況，當污染的可能性比較高時（例如：手工操作密集的灌裝線），通常應灌裝更大數量，一般采用全生產批量或接近生產批量。灌裝體積每只容器的灌裝體積不少于總容積的1/3同樣，灌裝體積也不宜過大既要考慮到瓶倒轉或旋轉時，培養基能充分接觸到容器和密封件的內表面，又要保證容器內有足夠的氧氣支持微

28、生物生長。2021/9/10灌裝量（續）灌裝的數量應足夠用來能準確模擬生產中有代表性的活動。這些活動應包括以下方面但不局限于這些： 設備安裝和生產中的無菌操作 干預：類型和適宜的次數典型 / 常規操作非典型/ 非常規操作 人數 班次更換 額外更衣 多日灌裝2021/9/10灌裝時間所持續的時間應證明是合理的應足夠長，用于對過程，環境和操作人員進行挑戰和考驗包含所有必需的操作和干預考慮實際的生產工藝手工操作密集的工藝：整個灌裝周期長生產周期：其它方法可以被接受，如采用捆綁方法，培養基灌裝在多個生產批結束后進行間歇地進行培養基灌裝，時間跨度覆蓋生產全過程2021/9/10灌裝速度和環境條件灌裝速度

29、培養基灌裝程序應該充分考慮到實際生產中灌裝速度的范圍環境條件培養基灌裝試驗的條件應能充分代表實際的生產情況在某種程度上，SOP中允許更苛刻的條件（例如：最多人員數和增加活動車程度），這些應該包括在內。2021/9/10培養基通常，使用大豆酪蛋白消化培養基。特殊情況下，應考慮采用厭氧培養基（例如：硫乙醇酸鹽培養基）選擇使用的培養基應被證明能有利于革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌、酵母菌、霉菌（例如：藥典指示菌），以及環境中分離出來的微生物的生長2021/9/10灌裝樣品的培養和檢查溫度應適合環境菌的生長任何時候不能超出20-35oC培養溫度可以維持在目標溫度的+ 2.5oC 范圍內培養時間：14天（1

30、個溫度或2個溫度）FDA - 20-35，目標值2.5，不少于14天；如選擇兩個溫度，則每一溫度下至少培養7天，從低溫開始。PIC - 20-25下至少14天，或，先20-25下7天， 然后30-35下7天。目檢人員應接受陽性瓶檢查的培訓2021/9/10培養基灌裝評價去除培養基灌裝樣品的標準:培養基灌裝中的干預活動應模擬實際商業批生產的情況。在批生產記錄中應記錄，并詳細說明關于去除培養基灌裝樣品的數量。培養基灌裝試驗的每一次干預必須在書面SOP中有詳細描述，包括干預類型和去除的培養基灌裝樣品數量培養基灌裝批記錄應記錄所有進行的干預以及去除的灌裝樣品數量灌裝樣品數量的清點和物料平衡：完整（密閉

31、）和非完整的樣品培養所有完整的樣品（包括存在外觀缺陷）2021/9/10可接受標準目標是零污染任何污染樣品都顯示了潛在的無菌保證問題。所有污染樣品都要進行全面的、書面的調查。培養基灌裝實驗應建立推薦的可接受標準培養基灌裝實驗中，單條灌裝線反復出現污染事件，不管可接受標準是多少，都是應采取行動的信號。2021/9/10陽性結果的調查 (一)調查的范圍應包括環境微生物監測數據，空氣懸浮粒子監測數據CIP設備，清潔、消毒程序的執行情況培養基、設備和零件的滅菌工藝，滅菌釜的校正情況高效過濾器檢測 (空氣懸浮粒子水平，過濾器檢漏，風速測量，密封系統檢查，使用年限等)除菌過濾器完整性房間氣流型式與壓差人員

32、操作技術培訓情況2021/9/10陽性結果的調查 (二)調查的范圍還應包括以往產品無菌檢查實驗結果人員衛生狀況監測數據培養基灌裝實驗中的干預方式分析該區域近期是否有過維修活動，生產線的改造情況該生產線培養基灌封實驗歷史數據已滅菌物品的儲存條件培養基灌封過程中的異常事件陽性污染菌與環境監測污染菌的鑒別2021/9/10陽性結果的調查 (三)調查結論與風險評估培養基灌封實驗結果有效暫停生產，直至確定污染來源并采取有效的糾偏措施。再驗證合格后，產品方可放行。對培養基灌封實驗后和此前所生產的產品，進行風險評估培養基灌封實驗結果無效重新進行培養基灌封實驗條件1無菌灌裝區的物理條件不滿足要求條件2人員未按

33、照正常生產程序操作2021/9/10總結報告最終報告中應包括以下內容模擬的最差條件事件清單環境監測結果微生物鑒別結果培養基的營養檢查實驗結果培養條件、結果讀取日、結果讀取人、每位參與者的灌裝瓶數等信息。結論（結果是否可以接受）合格證書工藝驗證/再驗證合格證書人員資格確認證書2021/9/10培養基灌裝實驗的常見缺陷 在最佳條件下進行試驗在培養過程中或結束后剔除灌裝樣品灌裝樣品沒有進行物料平衡失敗調查不恰當2021/9/10凍干制劑對培養基灌封的要求凍干制劑的典型生產流程配制灌裝凍干加塞軋蓋第一種方式，模擬裝載/卸載過程，縮短放置時間（首選）容器內灌封好培養基，以半壓塞狀態裝入凍干機凍干機內部分

34、抽真空（500mbar），在室溫放置一定的時間，不得冷凍。用無菌空氣破真空（不使用惰性氣體），全壓塞軋蓋 缺點:真空度不能過高，不能造成培養基沸騰。注意，若所使用的容器透明度不高，應將內容物倒出進行檢查。凍干制劑培養基灌封試驗的特殊性對產品在凍干機內放置步驟的模擬2021/9/10凍干制劑對培養基灌封的要求第二種方式，模擬凍干時間半壓塞產品在凍干機腔室內的放置時間同于正常工藝。缺點：耗時長第三種方式，以經稀釋的培養基模擬凍干過程容器內灌封好經稀釋的培養基，以半壓塞狀態裝入凍干機模擬凍干過程，直到容器內的培養基大致達到正常濃度為止。缺點：耗時長，需開發特殊的凍干程序，營養支持性不均一，影響微生物

35、的存活力。2021/9/10粉針劑對培養基灌封的要求第一種方法在灌裝線上直接灌裝液體培養基，灌裝后壓塞-軋蓋或熔封。第二種方法先灌裝干粉培養基，再加入注射用水第三種方法先灌裝惰性劑，再加入液體培養基要點采用第二、三種方法時，所用惰性劑或干粉培養基需事先經過輻射滅菌。常用惰性劑有聚乙二醇8000、羧甲基纖維素、乳糖。2021/9/10混懸劑/半固體制劑對培養基灌封的要求懸浮劑需要模擬攪拌或循環流動的過程。如果有無菌添加過程，也應進行模擬。半固體制劑需要將液體培養基增稠到適當粘度。可選用瓊脂或羧甲基纖維素作為增稠劑，也可選用其它試劑，但要證明其沒有抑制細菌或真菌的作用。在培養結束后，需將培養基從塑料或金屬管中擠出檢查其混濁度和真菌菌落，也可進行無菌檢查實驗。如果選擇顯色培養基遇到污染物變色的方法，則需要對其進行驗證。2021/9/10最差條件的設計（1）儲存時間灌封設備、灌封部件、儲罐、無菌物料、藥液在實際灌封前能夠放置的最長時間1. 灌封設備、灌封部件、儲罐、無菌物料需要再滅菌(除菌)的時間間隔最差條件: 用超出