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文檔簡介

1、中期考核匯報 張 婧 導(dǎo)師：羅深秋教授 時間：2006-03-23AMP 激活蛋白激酶（AMPK）靶向治療肝纖維化作用機理的研究 課題名稱肝臟疾病嚴(yán)重危害著人們的健康。衛(wèi)生部2005年的統(tǒng)計資料顯示：我國約有1.2億人攜帶乙肝病毒，慢性乙肝患者約3000萬；慢性丙肝患者3800萬；脂肪肝患者約5000萬；藥物、中毒、自身免疫性肝病患者1000萬人。每年約有50萬人死于慢性乙肝相關(guān)疾病。 肝纖維化是諸多慢性肝病發(fā)展至肝硬化過程中所共有的病理組織學(xué)變化。近年來的研究已經(jīng)證實肝纖維化是由于肝星狀細胞（hepatic stellate cell, HSC)分泌了過多的胞外基質(zhì)，并在肝臟內(nèi)沉積而形成的。

2、肝臟星形細胞(hepatic stellate cells ,HSC) 又稱貯脂細胞(fatstoring cell ,FSC) ,具有貯存脂肪供肝細胞能量、貯存及代謝維生素A、合成細胞外基質(zhì)的功能。在炎癥、化學(xué)物質(zhì)等致病因素刺激下HSCs 可活化、增殖并產(chǎn)生大量的膠原,是形成肝纖維化的中心環(huán)節(jié)。近來的研究表明，AMP激活的蛋白激酶（AMPK）持續(xù)性的激活可以引發(fā)細胞的凋亡 。有實驗證明持續(xù)的AMPK的活性可以誘導(dǎo)MIN6、原代的cell、Jurkat等細胞的凋亡。香港大學(xué)徐愛民教授與倫敦MRC研究中心的 David Carling 博士的合作課題中，對AMPK在激活的大鼠HSCs細胞的功能作

3、用進行了初步的探討。他們發(fā)現(xiàn)腺病毒介導(dǎo)的組成性激活的AMPK的過表達能明顯的誘導(dǎo)激活的大鼠HSCs 細胞產(chǎn)生凋亡。技術(shù)路線 HSCs的分離 HSCs的鑒定和培養(yǎng) 外源基因表達的檢測細胞凋亡的檢測人肝星狀細胞株LX-2的培養(yǎng)鑒定 腺病毒轉(zhuǎn)染動物實驗Thank you！HSCs的分離CL2MDP質(zhì)脂體的制備質(zhì)脂體尾靜脈注射3d灌注、分離肝臟紗網(wǎng)過濾、密度梯度離心培養(yǎng)HSCs的鑒定1.Antidesmin的抗體做免疫組化2.油紅o染色3.熒光顯微鏡觀察外源基因表達的檢測1.western blotting檢測外源基因的表達：用抗Myc-標(biāo)簽的抗體作為一抗檢測。2.免疫組化檢測細胞凋亡的檢測形態(tài)學(xué)的觀察流式細胞儀的檢測DN

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