1、 瘧原蟲形態及鏡檢技術福建疾病預防控制中心寄生蟲科歐陽榕一、瘧原蟲形態及分期1、瘧原蟲構造三要素：核、胞漿、瘧色素核：正常情況下核呈鮮紅色，呈圓形或不規則的顆粒狀胞漿：被染成淺藍色或深藍色，隨著蟲體發育，胞漿逐漸增多瘧色素：由未被利用的血紅蛋白分解成正鐵血紅素顆粒蓄積在原 漿內， 顏色和顆粒的形狀，因瘧原蟲種類而異。核瘧色素胞漿2、分期：環狀體、大滋養體、裂殖體、配子體紅外期裂殖子侵入紅細胞內，初期似戒指狀，紅色的核點，蘭色環狀的胞漿。稱 為環狀體即小滋養體。環狀體發育長大，胞漿可伸出不規則的偽足，以吞噬血紅蛋白，此為大滋養體。 大滋養體繼續發育，其核與胞漿進行分裂，形成裂殖體。原蟲的不同裂殖

2、體中裂殖子的數目也不一樣，成熟后裂殖子數一般間日瘧為1224個，惡性瘧為1836個。 成熟的裂殖體破裂，裂殖子逸出，一部分被吞噬細胞吞噬，一部分再侵入正常紅細胞開始新一輪的紅內期發育，經過數次裂體增殖后，部分侵入紅細胞的裂殖子不再進行核分裂，而逐漸發育成雌雄配子體。二、厚薄血膜中瘧原蟲的主要形態特征薄血膜：瘧原蟲寄生于紅細胞中，結構清晰，形態典型， 一般用于鑒別蟲種。厚血膜：紅細胞被溶解，蟲體皺縮，形態發生較大變化， 但只要掌握瘧原蟲的核，胞漿，瘧色素三大基本 構造也是不難鑒別的，一般用于定性。間日瘧環狀體惡性瘧環狀體蟲體約占紅細胞1/3，環較粗；核1個，較少見2個核及一個紅細胞內寄生2個環狀

3、體。蟲體約為紅細胞的1/6，環纖細；核1-2個，一個紅細胞內寄生兩個環狀體較為常見，蟲體常趨邊。間日瘧大滋養體惡性瘧大滋養體蟲體不規則，較大，阿米巴樣，常含空泡，瘧色素細小，黃褐色，散在分布。寄生的紅細胞脹大，變淺。蟲體較小，圓形，空泡不顯著，瘧色素細小結成團塊，呈黑褐色。寄生的紅細胞正常或略縮小。間日瘧成熟裂殖體惡性瘧成熟裂殖體大于正常紅細胞，裂殖子1224個，排列不規則，瘧色素黃褐色，常集于一側。小于正常紅細胞，裂殖子832個，排列不規則，瘧色素黑褐色呈團塊狀。間日瘧雌（大）配子體間日瘧雄（小）配子體如何區分間日瘧雌雄配子體： 雌：核較小，致密，常偏一側，胞漿深藍 雄：核較大，疏松，常位中

4、央，胞漿淺藍惡性瘧雌（大）配子體惡性瘧雄（小）配子體如何區分間日瘧雌雄配子體： 雌：兩端尖，核小，致密，深紅，胞漿深藍 雄：兩端圓，核大，疏松，淺紅，胞漿淺藍四、厚血膜中間日瘧和惡性瘧各期瘧原蟲形態鑒別 厚血膜由于用血量多，涂布面積小，紅細胞重疊且干燥慢，致使蟲體皺縮，空泡消失，胞漿變形，各期瘧原蟲的體積都有所縮小，其中環狀體和大滋養體的形態會產生較大變化，難于辨認，而裂殖體和配子體形態與薄血膜中相比無明顯變化。（一）厚血膜中環狀體形態間日瘧原蟲環較大，胞漿較厚，常呈“！”或“；”狀惡性瘧原蟲環纖細，常呈“：”、飛鳥狀、“v”狀和斷環狀等厚血膜中間日瘧原蟲厚血膜中惡性瘧原蟲環狀體、配子體五、瘧

5、原蟲與其它物體的鑒別（一）白細胞殘骸 白細胞破裂后散出的顆粒，易被誤認為是環狀體的核，但看不到胞漿；白細胞殘骸常為藍色，與瘧原蟲胞漿相似，有時與其它紅點和血小板巧合在一起，常被誤認為是瘧原蟲。鑒別時如果形同大滋養體，可根據有無瘧色素來鑒別；如果形同環狀體，可根據蟲體大小，折光是否均勻、核與胞漿是否在同一平面上，其它視野內有無瘧原蟲等仔細分析判斷。(二）灰塵和染色液的色素沉著 灰塵和染色液的色素沉著在血膜的表面上時，往往會被誤認為是瘧色素，可根據其顆粒的形狀、大小、色澤以及有無核和胞漿等結構來鑒別，也可轉動顯微鏡，看其是否在同一水平面上。（三）細菌 細菌尤其是球菌在厚血膜中常被染成紅色小點，與瘧

6、原蟲的核相似，最易混淆。球菌形體較大，邊緣光滑，且與紅細胞不在同一平面上。（四）水中原蟲 水中原蟲有時也可看到核、胞漿和空泡，與間日瘧大滋養體相似，但無瘧色素，且空泡多如網眼。（一）鏡檢的重要性 瘧原蟲鏡檢是診斷瘧疾、確定蟲種及發現傳染源的重要手段和方法，雖然現在分子生物學、血清學技術迅猛發展，但是確診瘧疾的“金標準”仍然是病原學診斷顯微鏡檢查瘧原蟲。六、鏡檢技術2、采血 采血部位為無名指末端或耳垂，嬰兒可從拇趾或足跟采血。消毒取血部位皮膚后，用左手拇指和食指緊捏耳垂上方或無名指指尖，以一次性采血針迅速刺入采血部位，不宜過深或過淺，用右手中指輕輕擠出12滴血，滴于玻片上以備涂制厚薄血膜。3、涂

7、制血膜 （1）厚血膜血量約45ul，用推片的左下角由里向外一個方向旋轉幾圈，涂成邊緣光滑之圓形，直徑約0.81cm左右。厚血膜的厚度以一個油鏡視野可以看到510個白細胞為佳。 （2）薄血膜血量約11.5ul，用推片的下緣置載玻片的中央處，當血液在推片和載玻片之間向兩側擴展至2cm寬時，使兩玻片保持2535角，從右向左迅速推成舌狀，長約2.5cm。薄血膜的厚度要以紅細胞之間相互接觸而不相互重疊為佳（直觀上指透過玻片能清晰看到報紙上的字）（四）染色 染色方法有吉氏染色法和瑞氏染色法兩種，因吉氏染色法染色效果穩定，保存時間長，一般采用吉氏染色法。 （1）快染：配置10%-20%左右濃度，染色時間短，

8、一 般為15分鐘左右。但染色效果不穩定。 （2）慢染：配置5%濃度，染色30分鐘40分鐘，染色效果穩定，可保存較長時間。(加水8ML加染液2ML混合)影響染色效果的因素血片染色好壞除了與玻片的清潔度、血片制作質量和染色技術等有關外，還受以下因素影響：（1）染劑、溶劑的質量：染料、甲醇和甘油必須用分析純，且在配置時使用的器具要干凈且無水分。（2）染液的新舊： 染液存放時間越久，染色力越強。新配置的染液因色素尚未充分溶解，染色力較弱，因此，通常在染液配置12周后才開始使用，盛裝染液的瓶子要加塞蓋密，以防吸潮而影響染液質量。（3）染液稀釋后使用時間：吉氏染液的主要成分是美藍、伊紅和由美藍氧化產生的天

9、青，這三者能在酒精溶液中溶解，但再水溶液中伊紅遇到美藍和天青會產生沉淀。因此，稀釋液要現染現配，且在半小時內染色力最強。（4）染色時間：染色時間應根據染液的質量、新舊、稀釋濃度和氣溫而適當增減。染液濃度過低著色慢而淺，常偏酸，紅細胞和瘧原蟲的核染成鮮紅色，淋巴細胞及瘧原蟲的胞漿著色較差。染液濃度高著色快而深，常偏堿，紅細胞被染成藍紫色，不易于觀察。染液濃度適中，紅細胞呈淡紅色，嗜酸性細胞的顆粒呈鮮紅色，淋巴細胞和瘧原蟲的胞漿呈藍色或淡藍色，白細胞的核呈紫藍色，瘧原蟲的核呈紅色。 （4）染液的稀釋濃度：吉氏染色血片外觀偏酸標準偏堿 染色后不要將玻片上殘余染液直接迅速倒掉，應將玻片連同玻片上的染液

10、一起平放入水中后，將玻片向下傾斜后輕輕左右擺動漂洗。這樣可以有效的避免染色素顆粒沾污血膜。（五）沖洗（六）鏡檢 1、血膜上滴加鏡油，查找瘧原蟲目鏡用5x或10 x，物鏡須用油鏡（100 x）。 2、觀察血膜的方法：鏡檢時從血膜的一端開始 ，自上而下，自左而右，逐個視野順序查看。鏡檢瘧原蟲一般是查厚血膜，薄血膜作為瘧原蟲的分類定種。 3、結果報告：分陽性和陰性。陽性者至少要查見一個典型瘧原蟲（需鑒別蟲種）方可確定；以查完整個厚血膜或至少檢查200個視野未見瘧原蟲者判為陰性。（七）血片制作注意事項 2、血片放置待干時不可傾斜，否則會導致厚血膜中血細胞沉在一邊，導致厚血膜厚薄不均，厚處不易溶血和著色而影響檢查結果。 1、制片時，手指勿接觸玻片表面，以免油污使玻片表面產生空白區或使厚血膜脫落；作為推片的玻片邊緣一定要平滑，這樣推出的血膜才能均勻一致。 4、吸取吉氏原液時不要晃動瓶子，以免底部沉淀物泛起影響染色效果；吉氏