1、離心機的原理和使用 實驗目的：了解離心機的原理和使用方法實驗原理：借助離心機旋轉所產生的離心力，使不同大小和不同密度的物質分離用途：細胞的收集、細胞碎片和沉淀的分離等常用離心分離超速離心技術已成為分離、純化、鑒別和各種生物大分子的重要手段之一 9/25/20221離心機的原理和使用 實驗目的：了解離心機的原理和使用方法9/9/25/202229/24/20222一 離心機的種類與用途速度：常速（低速） 30000r/min 轉子：固定角轉子（Eixed-Angle-Rotor）主要用于分離沉降速度有明顯差異的顆粒樣品甩平轉子（Siwing-Bucket-Rotor）主要用于樣品作密度梯度離心

2、9/25/20223一 離心機的種類與用途速度：9/24/20223常速離心機1 常速離心機8000r/min, R.C.F1*104g用途：分離細胞、細胞碎片、培養基殘渣及粗結晶等較大顆粒9/25/20224常速離心機1 常速離心機9/24/20224高速離心機2高速離心機1*104g2.5*104 r/min ，R.C.F 1*104g105g用途：分離各種沉淀物、細胞碎片及較大的細胞器等高速冷凍離心機9/25/20225高速離心機2高速離心機9/24/20225超速離心機2.5*104g8*104 r/min ，R.C.F 5*105g或更高結構：離心管帽、冷凍裝置和溫控系統、真空系統、

3、安全保護系統、制動系統、指示儀表等。按用途分：制備用超速離心機：分離純化生物大分子、細胞器和病毒等分析用超速離心機：測定樣品純度（根據紫外吸收率或折光率等判斷）、沉降系數、相對分子量9/25/20226超速離心機2.5*104g8*104 r/min ，R.C沉降系數S：單位離心力作用下粒子的沉降速度，以Svedberg表示，簡稱S。1S=1*10-13s9/25/20227沉降系數S：單位離心力作用下粒子的沉降速度，以Svedber沉降系數S與分子量M有對應關系，測出離心機轉速、離心時間和粒子移動距離，可求出S，再得到M9/25/20228沉降系數S與分子量M有對應關系，測出離心機轉速、離心

4、時間和粒二 離心方法的選擇對于常速和高速離心機，由于所分離的顆粒大小和密度相差較大，只要選擇好離心速度和時間，就能達到分離效果。超速離心的離心方法：差速離心、密度梯度離心和等密度梯度離心 9/25/20229二 離心方法的選擇對于常速和高速離心機，由于所分離的顆粒大小1 差速離心采用不同的離心速度和離心時間，使沉降速度不同的顆粒分批分離的方法。主要用于分離大小和密度差異較大的顆粒。9/25/2022101 差速離心9/24/2022102 密度梯度離心樣品在密度梯度介質中進行離心，使沉降系數比較接近的物質得以分離的一種區帶分離方法。密度梯度系統：梯度介質有足夠大的溶解度，不與分離組分反應，不會

5、引起分離組分的凝集、變性或失活。常用介質：蔗糖、甘油等。樣品鋪在密度梯度溶液表面，離心后形成若干條界面清楚的不連續區帶。9/25/2022112 密度梯度離心樣品在密度梯度介質中進行離心，使沉降系數比較9/25/2022129/24/2022123 等密度離心當欲分離的不同顆粒的密度范圍在離心介質的密度梯度范圍內時，不同浮力密度的物質顆粒在離心力作用下一直移動到與各自浮力密度相等的位置（等密度點），形成區帶。等密度離心常用的介質：銫鹽，如CsCl，Cs2SO4，CsBr9/25/2022133 等密度離心當欲分離的不同顆粒的密度范圍在離心介質的密度梯三 離心條件的確定離心力（轉速）離心時間溫度pH值 真空9/25/202214三 離心條件的確定離心力（轉速）9/24/202214思考題1 名詞解釋 離心分離 相對離心力 沉降系數2 按離心機轉速分，離心機有哪些種類？各