1、香煙焦油對小鼠急慢性毒性實驗研究【摘要】目的：觀察香煙焦油對小鼠的急、慢性毒性作用。方法：提取香煙中的焦油，小鼠40只，分為染毒組，乙醇組和生理鹽水組作對照，腹腔注射法(1次/d)染毒，連續4d，觀察小鼠活動情況并記錄。4d后，處死小鼠，取胸骨骨髓常規制片，觀察骨髓pe細胞微核發生率。另取60只小白鼠，方法一樣，連續觀察小鼠30d活動情況，最后1d解剖,觀察小鼠內臟各器官顏色、體積等改變。結果：急性毒性實驗小鼠出現活動才能下降、尿失禁等現象，而慢性毒性實驗小鼠出現體重下降、皮膚松弛、活動減少、尾部潰瘍等病癥，解剖后可觀察到染毒內臟各器官肺、肝、腎、胃腸道顏色、體積等改變。小鼠骨髓細胞微核說明，

2、香煙焦油可誘導微核形成，與對照組比擬差異有統計學意義(p0.05)。結論：香煙焦油對小鼠有較強的毒性作用,可能會對人體產生相應的危害。【關鍵詞】香煙焦油;慢性毒性;嗜多染紅細胞;微核;小鼠abstrat：bjetivetbservetheauteandhrnitxiityeffetsfigarettetarinie.ethdextratingthetarinigarettes，40ieeredividedinttarexpsedgrup，ethanlexpsedgrupandnralsalinegrupasntrlhiherebyintraperitnealinjetin(1tie/day)f

3、r4days，theativitiesftheieerererded.after4days，theieerekilled，bnearrfthesternuereadeprduerstbserveirnuleusinidenefthebnearrpeells.ardingthesaeay，anther60ieereused，after30daysfntinuusbservatin，alltheieeredisetedtbservelr，size，etfviseralrgans.resultsautetxiityinieshedtheexpsedieativitydrpping，urinaryin

4、ntinene;hrnitxiityexperientshedtheexpsediebdyeightlss，skinrelaxatin，redutininativity，ulersfthetail，andthersypts，lr，sizeet.fviseralrgansinludinglung，liver，kidney，gastrintestinaltratafteranatyerehanged.irnuleifbnearrellsinieshedthatigarettetaruldindueirnuleusfratin，parediththentrlgruperesignifiantlydi

5、fferent.nlusinigarettetarhasstrngtxieffetsinie，ayhavethehuanbdyprduerrespndingdaages.keyrds:igarettetar;hrnitxiity;pe;irnuleus;ie香煙中含有尼古盯煙焦油、氫氰酸、醛等多種化學物質,成分非常復雜,估計含3500多種化合物1,且許多物質已證明具有致癌、致畸和致突變的作用。煙氣中焦油是威脅人體安康的罪魁禍首，而煙焦油中的多環芳烴(plyyliaratihydr2arbns,pahs)是主要的致癌物質之一。苯并芘(bp)是香煙中pahs的代表物,是導致人類肺癌的重要的化學致癌

6、物。pahs進入體內后,可在一系列酶的作用下,形成終致癌物與生物大分子發生共價結合,從而干擾細胞的正常機能,引起惡性腫瘤，煙焦油中的酚類及其衍生物那么是一種促癌物質。促癌物質本身雖不能改變細胞的遺傳構造，但能刺激被激發的細胞，導致癌瘤開展2。本研究旨在通過小鼠急慢性毒性實驗，觀察香煙焦油對小鼠各系統(中樞、骨骼饑呼吸、心血管、消化系統等)產生的毒性作用。從而考察香煙焦油對人體產生的危害,為吸煙引起的相關疾病的發病因素和發病機制提供參考。1材料與方法1.1材料1.1.1試驗動物：安康昆明種雄性小白鼠150只,體重2535g,由嘉興學院醫學院動物提供中心提供。以標準顆粒飼料,自由飲水。室溫(202

7、),濕度40%60%,采用12h12h明暗光照,定時通風。1.1.2儀器與試劑：由市場購得某牌過濾嘴香煙,烤煙型,焦油量17g、煙氣煙堿量112g,索氏提取器,蒸發皿。1.2方法1.2.1提取香煙焦油：將3支煙蒂裝入事先卷好的濾紙，放入脂肪提取器的套筒中，在75l95%的乙醇中連續加熱虹吸2.5h。待屢次發生虹吸(脂肪提取器中的溶液接近無色時)后，停頓。分別記錄第一次虹吸的時間和最后一次的時間，總共虹吸6次。最后把裝置改為蒸餾裝置，記錄蒸餾的時間，餾頭：77，蒸出大局部乙醇，再用25%乙醇75l溶解殘留物3。1.2.2急性毒性試驗：取小鼠40只，焦油組分成低、中、高(分別是1倍、2倍、3倍原溶

8、液)三個劑量組，對照組(乙醇組和生理鹽水組)，按0.25l腹腔注射染毒，連續染毒4d，1次/d，觀察小鼠的活動情況，并及時記錄小鼠的反響。1.2.3微核試驗：在進展急性小鼠毒性染毒4d后，第5天剖殺，用頸椎脫臼法處死小鼠,取胸骨骨髓常規制片，觀察骨髓pe細胞微核發生率。微核的判斷標準:微核形態為圓形或橢圓形,邊緣光滑整齊;直徑主核的1/3。與主核完全脫離;嗜色性與主核一致或略淡。統計處理采用t檢驗。記錄具有微核以及核異常的紅細胞數,以百分率表示，即為微核與核異常細胞率之和為總核異常率。運用spss統計軟件對結果進展分析,多組比擬采用最小顯著差法(lsd)和最小顯著極差法(snk)進展多組間多重

9、比擬。1.2.4慢性毒性試驗：取60只小白鼠進展稱重，分為三組：分別為焦油組，乙醇對照組、生理鹽水組，編號記錄。染毒組1次/d，腹腔注射香煙焦油0.25l;對照組1給予25%乙醇0.25l;對照組2那么給予一樣劑量的生理鹽水0.25l，為期30d，60只小鼠給予一樣飼養條件。仔細觀察并記錄小鼠每天注射前后性情、活動頻率和行動速度等各方面的改變。每周定期稱量各組小鼠的體重注射液劑量計算：按人和小鼠體重之比(20001)，假設人每天吸煙20支，算出小鼠每天吸0.01支，再根據染毒所配制溶液的濃度3支/75l,0.25l稀釋液即含0.01支香煙5。30d之后，解剖小鼠，觀察并記錄內臟各器官顏色、體積

10、等改變。2結果2.1急性毒性試驗表現：腹腔注射香煙焦油，可觀察到低劑量組小鼠出現活動頻率加快、異常興奮等病癥;高劑量組小鼠那么活動才能下降，局部出現尿失禁，側躺不能翻身等現象。低、中、高三個香煙焦油組對小鼠急性中毒的表現：低劑量組：活動頻率增加，異常興奮，局部小鼠豎尾，方向感較差，中樞神經、神經肌肉系統受累;中劑量組：活動才能下降，趴伏在桌上，局部小鼠有旋轉，中樞神經、神經肌肉系統受累尿失禁現象，膽堿能神經受累;高劑量組：側躺，不能自行翻身，待45in后恢復，四肢抽動，呼吸頻率加快，胸式呼吸，局部小鼠有尿失禁，中樞神經、血管系統受累，心肺循環障礙，膽堿能神經受累。對照組小鼠注射乙醇和生理鹽水后

11、表現正常，無上述中毒表現。2.2微核試驗：香煙焦油組的微核發生率與陰性對照組相比差異均有統計學意義(p0.01)，說明香煙焦油可以引起香煙引起細胞的遺傳損傷作用，見表1。表1香煙焦油對小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核率的影響注：染毒組與對照組比擬，p0.012.3慢性毒性試驗表現：腹腔注射香煙焦油，進展小鼠慢性毒性染毒，染毒組小鼠出現體重下降、皮膚松弛、活動減少，尾部有潰瘍等病癥，對照組小鼠在染毒前、后變化不大，染毒組小鼠的體重改變大于對照組，差異有統計學意義(p0.05)，見表2。表2染毒組與對照組小鼠在染毒前后的體重變化注：染毒前后比擬：p0.012.4肉眼觀察：染毒完畢后解剖小鼠，觀察到內臟各器

12、官肺、肝、腎、胃腸道顏色、體積等發生改變。香煙焦油對小鼠的慢性中毒的表現：焦油組：咖啡色肺葉體積較孝褐色(色澤較深，且暗淡無光)、顏色較淺、皮質較白、腸蠕動減慢或消失、腸壁較雹較小;生理鹽水和乙醇組：暗紅色、粉紅(色澤較淺有光澤)、肺葉體積較大、顏色較深、皮質較紅、腸蠕動正常、腸壁較厚(45次/in)。乙醇組和生理鹽水組肉眼觀察根本一樣。3討論本實驗通過小鼠急慢性毒性染毒和小鼠骨髓微核染毒觀察香煙焦油對小鼠的毒性作用，進而推斷其對人體的毒性作用。小鼠的急性毒性染毒說明，染毒小鼠表現為活動頻率增加，方向感變差，共濟失調。這與香煙中的焦油類物質超過了呼吸系統自身的凈化作用，附著在肺泡的外表影響血液

13、與肺泡之間的氣體交換，導致血氧量下降，使肌細胞缺氧，機體活動的耐力下降有關7。慢性小鼠毒性染毒小鼠出現體重下降，皮膚松弛、活動減少等病癥。染毒組小鼠體重每周相對增長，幅度變化較對照組顯著減慢，這是因為被動吸煙有興奮交感神經的作用，它抑制消化道運動和消化腺分泌，造成胃的排空延長和小腸吸收功能障礙，導致對食物的厭惡，致使實驗組體重凈增長量小，周體重的增長量與吸入的煙量成反比關系8。慢性毒性染毒說明，染毒小鼠肺部呈褐色，有不同程度的黑色斑塊，一局部小鼠的尾巴有潰瘍形成。由此可見，香煙焦油對肺、肝臟有不同程度的危害。其受累程度不斷加深，可見香煙中的焦油成分是引起慢性支氣管炎、肺氣腫、肺炎、肺癌、冠心病

14、的重要因素。小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗(nt)是目前最常用的遺傳毒理學試驗9，它的遺傳學終點是觀察染色體或有絲分裂器損傷后在未完全成熟的紅細胞中形成的微核10。由于其測定結果與染色體畸變率有很好的一致性，測定方法比擬簡便、可靠，近年來已成為挑選和鑒定化學致突變物的一種常用方法11。對生物體有害的物質往往都會造成遺傳物質的損傷而成為誘變劑，用遺傳物質受損程度判斷有害物質的毒性是當前靈敏度相當高的常規手段，而相應判斷一種物質是否有減毒作用(即抗誘變作用)那么看該物質能否減少誘變物質對遺傳物質的損傷。據此原理本實驗以出現微核的小鼠骨髓嗜多染紅細胞頻率為指標,檢測香煙焦油的毒性作用。本次實驗中，小鼠

15、骨髓微核染色染毒說明香煙焦油染毒組微核發生率明顯高于對照組，結果發如今所取樣本中，見表1，說明香煙焦油有一定的致突變作用。各受試物組小鼠中微核細胞率均比陰性對照組明顯升高，說明各受試物對小鼠遺傳物質有不同程度的損傷作用。與對照組比擬，香煙焦油組差異有統計學意義(p0.05)。暗示香煙焦油的致畸作用，會對人體安康造成潛在的危害。而香煙焦油致突變的詳細機制還有待進一步研究。【參考文獻】1常福厚,劉素珍,滿達,等.尼古丁焦油半數致死量的測定j.內蒙古醫學院學報,1999，21(3)：190.2常福厚,扈廷茂.煙焦油及被動吸煙對小鼠肺芳香烴羥化酶活性的影響j.動物醫學進展，2022,27(3):59.

16、3吳源,吳慶四.香煙煙霧水溶物對小鼠的急性毒性和骨髓嗜多染紅細胞微核率的影響j.海峽預防醫學雜志，2022，12(3)：11.4孫波，張桂榮,蘭莉，等.100種香煙毒性快速檢測及毒性分析j.中國初級衛生保健雜志，2022，10(4)：110.5李延蘭,豐慧根,孫璐,等.高溫與香煙結合對小鼠骨髓細胞微核的影響j.新鄉醫學院學報,1998，15(2)：108.6趙賢四，熊振虹，廖暉，等.香煙煙霧提取物的成分分析及遺傳毒性研究j.中國公共衛生學，1997，16(5)：213.7taninr，ballarin，nardinib，etal.influenefskinghabitnthefrequenyfirnuler