1、第七章 單元融合及創新江南大學生物工程學院第三篇 分離技術的融合與集成融合和創新在基本分離技術的基礎上產生為更高效的應用服務OR為新穎而創新？生物分離技術：技術和藝術的結合集成指為達到某一目標，組合分離技術，形成高效工藝有效設計、實驗驗證回顧生物物料的預處理離心過濾細胞破碎沉淀技術萃取技術膜分離技術層析技術電泳技術蒸發和干燥技術上游設計催化轉化變性復性檢測和評價方法第七章 單元融合及創新概述親和沉淀技術膜層析技術與雙水相集成的分離技術混合模式吸附層析擴張床吸附層析概述單元融合分離技術是指把兩種或兩種以上的分離技術合成為一種更有效的分離技術目標：提升分離效率、提高產品收率、降低過程成本不經意間離

2、心過濾技術等電點下的鹽析超臨界流體色譜技術。親和沉淀（Affinity precipitation）：是利用蛋白質與特定的生物合成分子（免疫配位體、基質、輔酶等）之間高度專一的相互作用而設計出來的一種特殊選擇性的分離技術。是蛋白質類生物大分子相互親和作用與沉淀分離相結合的分離純化技術。一 親和沉淀技術常用的親和作用體系體系類型配基目標配體高特異性體系酶酶抑制劑、酶底物類似物、輔助因子抗原抗體核酸互補堿基鏈段、組蛋白、核酸聚合酶荷爾蒙受體、載體蛋白群特異性體系凝集素多糖、糖蛋白、細胞表面受體、細胞過渡金屬離子蛋白質酶蛋白A、G抗體肝素脂蛋白、脂肪酶、甾體受體、限制性核酸內切酶、凝血蛋白、抗凝血酶

3、三嗪類色素脫氫酶激酶、血清白蛋白、干擾素、核酸酶、糖解酶回顧：親和對可逆溶解性聚合物（SIS聚合物）可逆溶解性聚合物: Reversibly Soluble Polymers(RS聚合物)；或稱為Soluble and Insoluble Polymers(SIS聚合物)這類聚合物的溶解與非溶解狀態可隨環境參數如pH、溫度等的變化而發生可逆變化，因此可被用于酶與蛋白質的親和沉淀或可逆固定化分離過程一定條件下就可形成沉淀，通過過濾或離心的方式進行分離，然后將酶或蛋白從親和配體一SIS聚合物上解離下來?；旌?親和吸附-改變條件沉淀-離心或過濾-解離-離心1、帶同種電荷的多聚電解質。通過靜電親和作用

4、形成SIS聚合物一蛋白質共聚物。類型2、帶親和配基的多聚化合物。專一性更強的親和 形成SIS聚合物一親和配體一靶蛋白的共聚物。例1：利用聚合脂質體的沉淀可逆性固定STI及其PL-STI對胰蛋白酶的親和作用 通過雙功能試劑戊二醛、二甘醇二酸酐和1,4-丁二醇雙縮水甘油醚等將大豆胰蛋白酶抑制劑（STI）固定到由二十五-10,12-二炔-1-醇磷脂乙醇胺形成的聚合脂質體（PL）上 沉淀條件：0.14-0.25M的鹽（NaCl、KCl、NH4SO4等） 胰蛋白酶收率20%60%，PL-STI 可作為酶的親和沉淀吸附劑。 親和配基偶聯到聚合物的過程例2：殼聚糖親和沉淀殼聚糖：酸溶、堿沉淀，離子交換作用p

5、H6.5以下溶解態，pH6.9與雜蛋白形成沉淀殼聚糖親和沉淀-活性炭吸附-DEAE Sephadex A-25 柱層析三步法分離純化藻藍蛋白殼聚糖和活性炭結合使用，可使藻藍蛋白純度( A620 /A280 ) 由0.93提高至2.78。通過DEAE Sephadex A-25葡聚糖凝膠柱層析后，可得到高純度藻藍蛋白，純度達4.3。涉及到的基礎技術： 膜分離技術 層析技術二 膜層析技術介質剛性不夠、易被壓縮，難以獲得較高的處理速度，也不易進行線性放大；床層內易產生溝流，傳質效果較差；配基價格昂貴卻不能充分利用，只有1%-2%的配基與蛋白質結合；吸附柱易堵塞和污染，往往只適用于間歇操作，處理量相對

6、較低，操作時間較長。傳統的液相層析的缺點傳統的膜分離技術的優缺點分離速度快、操作壓力低、無相變、能耗低、易于放大和連續操作、基質來源廣泛且價格相對較低等優點靠篩分機理分離，對目標產物與雜質大小相近的混合物分離顯得無能為力膜層析技術將對生物大分子有特異性和選擇性的功能基團連接到膜的表面及孔壁中去，從而制備一種新型的層析介質，稱為膜層析介質（或稱為膜吸附劑），利用膜對物料的篩分和功能基團的作用進行的分離技術稱為膜層析技術膜層析技術是液相層析和膜分離相結合的一種新技術，融合了二者之長具有快速、高效、高選擇性、易于放大等特點滿足一般情況或者特殊情況下生物大分子高效分離與純化的需要采用具有一定孔徑的膜作

7、為介質，連接配基，利用膜配基與蛋白質等目標分子之間的相互作用進行分離純化當料液以一定流速流過膜的時候，目標分子與膜介質表面或膜孔內基團特異性結合，而雜質則透過膜孔流出，待處理結束后再通過洗脫液將目標分子洗脫下來，其純化倍數可達數百乃至上千倍原理與普通的膜技術相比： 不僅利用膜孔徑的大小，更主要的是利用其特異性和選擇性，不受相對分子質量大小的限制特點與液相層析技術相比： 由于在膜孔基質上配基與液流之間擴散路徑極短，傳質極快，分離時間顯著縮短，分離效率提高； 由于膜的空隙率大，其孔表面積很高，膜的厚度很薄就能滿足分離要求，造成液流通過膜的壓力降低； 由于膜的元件都是標準的，膜層析等集成技術易于放大

8、，便于實現大規模連續分離和自動操作。特點（1）親和膜分離兩個分支：親和膜分離技術，制備帶有親和配基的分離膜，直接進行產物分離；親和錯流膜過濾，將水溶性或非水溶性高分子親和載體與產物進行特異反應，然后用膜進行錯流過濾。親和膜分離技術（一般意義）親和膜分離(Afinity Membrane Separation)是將親和層析與膜分離技術結合起來以提高過程選擇性的一項新型分離技術。親和膜技術的研究始于20世紀中期，自1991年Klein的親和膜(Affinity Membrane)專著出版以來，促進了對親和膜技術的研究，在基膜材料改性、親和配基偶聯、親和膜組件設計、過程動力學以及親和膜應用方面都有了

9、較大的發展，但還有許多問題有待進一步深人研究。親和膜分離示意親和膜制備即通過適當的化學反應，在膜表面接上可反應的官能團或者是一定長度的“間隔臂”選用一個適合的親和配基(Ligand)，在一定條件下讓其與間隔臂分子產生共價結合，生成帶有親和配基的膜分離介質。常用的親和膜載體材料脂族烴類(聚乙烯、聚丙烯)芳香族共聚物(聚碳酸酯、聚砜、聚醚砜)脂族聚酰胺(尼龍6、尼龍66)以及一些特殊的聚合物，如聚乙烯醇、纖維素。親和配基（1）特異性配基：只與其對應的分子發生特異性結合，如抗原、抗體、抑制劑、激素、激素受體等;（2）通用型配基：能與某一類物質結合，如三嗪類染料活性染料（輔酶煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NA

10、D+ )類似物）能與許多需要這種輔酶的酶結合親和分離需解決的幾個關鍵問題 膜表面要有足夠多并可利用的化學基團(一般為一OH基)，使其能進行活化，接上合適的間隔臂和配基。要有足夠數量可利用的化學基團則必需有足夠高的表面積，以便于讓生物大分子自由地出入膜，必需有足夠大的孔徑?？追植紤鶆颍垣@得高的通適量和分離效能。為了實現快速分離，常要加壓操作，因此要求膜有一定的機械強度，能承受力，長期使用不變形。親和膜要耐酸、耐堿、耐高濃度的緩沖浪和有機溶劑。操作方式親和超濾親和微濾親和超濾分離目標物的同時，濃縮其他成分親和微濾僅分離目標物親和-膜過濾 (Affinity filtration) ，是19

11、81年由Hedda等人首先提出并得到迅速發展的一種新型大規模分離純處技術。既充分利用了載體上的配基對目標組分的專一的可逆的親和吸附作用和超濾膜分離易于實現大規模生產的優點，又克服了超濾膜分離技術對分子質量相近的大分子無法實現分離的缺點親和-膜過濾（狹義上）示意圖1示意圖2親和-膜過濾過程及其關鍵問題親和載體：親和載體的結構包括一個由對生物分子無特異吸附性的物質組成的內核以及內核表面上連接的某些特定基團，這些基團必須對所提取的蛋白質有一定的特異吸附性。分類：水溶性大分子載體水不溶性微載體水溶性大分子載體 優點:親和載體與目標蛋白在均相體系中反應速率快,達到吸附或洗脫平衡的時間極短,吸附容量大水不

12、溶性微載體 非水溶性載體的種類較多,據報道可用的非水溶性基質有各種菌類的完整細胞(酵母、芽孢桿菌、鏈球菌等細胞)、納米硅石微粒、瓊脂糖、凝膠、脂質體等也均被作為基質使用過。親和載體與目標分子的結合在親和-膜過濾過程中,親和載體與目標分子之間的結合可能存在弱的共價鍵、離子鍵、分子鍵和配位鍵的作用。親和-膜過濾應用親和- 膜過濾技術應用在分離和純化蛋白質、酶方面已經有很多成功的例子。朱家文等用DextranT2000 ，經環氧氯丙烷交聯并氧化產生部分羧基，偶聯對氨基苯甲脒制得水溶性親和載體，來純化的尿激酶。孫彥等研究了脂質體的制備，并利用對氨基苯甲脒修飾的脂質體有效地純化了胰蛋白酶。親和膜過濾純化

13、伴刀豆蛋白A的實驗裝置熱殺死酵母細胞作為載體截斷相對分子量 106隨著生物醫藥工業的發展,生物醫藥的分離純化成為一個研究熱點,親和-超濾膜分離技術在手性藥物、抗生素等的分離與純化方面得到了一定程度的應用。例如：以D-丙氨酰-丙胺酸為配基連接到水溶性的聚合物葡聚糖上,將其作為親和載體來分離糖肽抗生素-萬古霉素。離子交換膜是膜狀的離子交換樹脂。離子交換膜包括三個基本組成部分：高分子骨架，固定基團可交換離子（反離子）（2）離子交換膜層析（IMC）原理離子交換膜層析主要是利用膜介質表面的離子交換基團與目標蛋白之間的離子交換作用進行分離的。根據離子交換基團的性質，可分為強陽離子型、弱陽離子型、強陰離子型

14、、弱陰離子型。由商用膜改性制得的膜介質，其成本相對較低。在流速較慢的情況下，還可通過梯度洗脫分離蛋白質的混合物。離子交換膜層析由于操作條件較溫和，可以有效地保持蛋白質的活性，并可延長膜的使用壽命，其缺點是選擇性較差。與電滲析相區別共性：均使用離子交換膜區別： 離子交換膜層析：超濾或者微濾方式 電滲析：離子選擇透過離子交換膜為主要特征，納濾或者反滲透膜為主按電荷分:陽離子交換膜：活性基團：磺酸基（-SO3H）磷酸基（-PO3H2）羧酸基（-COOH）砷酸基（AsO32-）等；陰離子交換膜：活性基團：伯、仲、叔、季胺基（脂肪胺與芳香胺）-NH3+、 -RNH2+、 -R2NH+、-R3N+按膜結構

15、劃分: 異相膜半均相膜均相膜目標分子膜介質配基人尿激肽釋放酶纖維素膜N（CH3）3人腫瘤壞死因子GMA季胺基寡聚核苷酸GMA-EDMADEAE免疫毒素改性纖維素CM溶菌酶GMASO3H-Mg凝血酶原纖維素膜DEAE卵白蛋白、人血清白蛋白、胰島素抑制劑甲殼素膜EGDEBSA交聯改性纖維素磺酸基乳清蛋白交聯改性纖維素磺酸基、季胺基離子交換膜層析的應用研究實例例：IMC純化DNA質粒和肽鏈等生物分子采用甲基丙烯酸縮水甘油酯（GMA）為基質，二乙氨乙基(DEAE)為離子交換基團，在5mL/min的流速下有效地分離了四種寡聚核苷酸(長度分別為8，10，12和14個核苷酸)。還在同樣的基質接上-SO3-基

16、團后，用于肽鏈的分離。例：蛋清中分離溶菌酶通過射線引發接枝獲得甲基丙烯酸縮水甘油酯GMA膜，先在中空纖維膜上接入環氧基團，然后通過亞硫酸鈉接入SO3H基團，再與鎂離子交聯，制成離子交換膜介質，膜的蛋白質平衡容量可達到0.42g/g以NaHCO3-NaOH緩沖液為洗脫液，在pH為9.0時洗脫率達到100%。由于膜上螯合了Mg2+，使得膜的透過速率也有較大增加。例：人凝血酶原分離采用纖維素膜共價連接DEAE的徑向IMC，從血漿的分離物(Nitschmannfrac- tion)中分離人凝血酶原樣品的通過速率為2030mL/min，在不降低分離效率的前提下，洗脫速率達到40mL/min。這種膜還可用

17、于DNA、多肽和其它蛋白質的分離。由于疏水配基結構簡單，通用性好且成本較低，故疏水層析已成為蛋白質分離純化的常用技術之一。但是，目前常用的疏水層析大多采用瓊脂糖凝膠、葡聚糖等“軟”基質，分離速度不夠理想，且不易放大，疏水膜層析就是在此基礎上發展起來的。疏水膜層析上的配基，常用的有甲基、丁基、苯基、辛基、己二胺、聚乙二醇等，通過目標物質與這些配基之間疏水作用的不同而實現分離。影響疏水膜層析操作情況的主要因素有:鹽離子的種類，離子強度，pH和柱溫等。（3）疏水膜層析目標蛋白膜介質配基牛肝過氧化氫酶纖維素膜苯基牛血清白蛋白纖維素膜苯基熱原纖維素膜己二胺肌球素、核酸酶、溶菌酶和胰凝乳蛋白酶十二烷基甲基

18、丙烯酸酯-GMA-EDMA共聚物十二烷基牛血清白蛋白聚乙烯膜苯基人腫瘤壞死因子QuickDisk丁基、苯基疏水膜層析的應用研究實例三 與雙水相集成的分離技術雙水相萃取技術 雙水相是由于聚合物分子的空間阻礙作用，相互間無法滲透，當聚合物的濃度達到一定值時，就不能形成單一的水相，當兩種聚合物在排斥力作用下達到平衡時，就形成了穩定的兩相，兩種聚合物分別位于兩個互不相溶的兩相中。 體系具有生物相容性生化工程中常用的雙水相體系（1）雙水相萃取與層析技術結合在某一種聚合物上衍生一定的功能配基，不但使體系具有雙水相處理量大的特點，而且通過離子交換或親和作用，增大分配系數。離子交換雙水相親和雙水相等配料發酵液

19、 親和配基對聚乙二醇4000(PEG4000)的羥基進行活化，以亞氨基二乙酸(DA)為螯合劑，制取含有Cu2+的金屬螯合親和配基PEG-DA-Cu(II)，并以PEG和羥丙基淀粉(PES)形成雙水相，用于直接處理含納豆激酶的發酵液，如圖6.6所示，經過兩次分配分離流程后，納豆激酶的總收率為81%，純化倍數達到3.52。例1 納豆激酶的雙水相純化例2 PEG-色素/Aquaphase-PPT(一種淀粉的羥丙基衍生物的商品名)系統從豬肌組織中連續萃取乳酸脫氫酶（LDH）1、豬肌組織直接在成相系統中勻漿，固形物分配在下相，而目標產物分配在上相。2、用離心機分相后，上相用純下相溶液清洗一次，進入第二個

20、離心機。3、從第二個離心機流出的上相與磷酸鈉溶液(50%，pH6.97.0)混合，形成PEG/磷酸鈉雙水相系統。4、由于LDH與色素的親和作用下降，LDH被反萃到下相(磷鈉溶液)中得到回收，而上相的PEG和PEG-色素返回勻漿機中循環再利用。將雙水相萃取同生物轉化結合在一起，可解決在許多生物轉化中存在的兩個問題： a) 產物抑制 b) 酶的重復利用（2）雙水相萃取與生物轉化結合示意圖例1 木質素經過酶水解生產乙醇Bartlett等實現了在雙水相系統中-甘露糖苷酶催化糖基轉化合成低聚糖。Andersson等研究了在PEG/DEX系統中利用枯草桿菌進行流化發酵生產-淀粉酶，比普通發酵的酶產率提高了

21、63%。其他例子四 混合模式吸附層析混合模式吸附層析（Mixed Mode Chromatography，MMC），又稱多模式層析（Multy Mode Chromatography， MMC ） 包含兩種或兩種以上的作用模式，能夠與目標生物分子發生多種相互作用的層析方法?；旌夏Ｊ轿浇橘|上配基的功能往往具有互補性或協同性，因此它能夠適應某種特殊條件下對蛋白質的捕獲，或者產生類似于群特異性的親和吸附效果?；旌夏Ｊ轿郊夹g發展歷程 “表面活性劑”型疏水層析離子交換型混合模式層析疏水性電荷誘導層析離子交換型混合模式層析示意和示例離子交換型混合模式層析介質配基的結構親硫作用層析20世紀60年代，Po

22、rath等發現吸附劑配基中硫原子的重要作用。1985年，Porath等制備“T-gel”，并正式將該層析方法稱為親硫作用層析（thiophilic interaction chromatography，TIC）高鹽下吸附，低鹽下洗脫但是與HIC不同的是，“T-gel”配基具有很好的親水性，對蛋白質的吸附并不是單純依靠疏水作用。此外，親硫層析介質對抗體有特異的選擇性，但對血清蛋白等吸附作用很弱 疏水性電荷誘導層析(hydrophobic charge induction chromatography, HCIC )1998年首次由Burton和Harding 提出典型HCIC介質（MEP Hyp

23、erCel）和吸附洗脫示意：可在含一定量的鹽或者無鹽下吸附,具有Salt-independent配基密度若40 mmol/ml ，則無吸附與免疫球蛋白的保守區中的Trp、Phe等殘基有特異性吸附,主要用于抗體的分離，代替Protein A配基pH主導的HCIC介質與蛋白質的作用機理pH5pH7pH12pH4pH2介質配基目標物質產物來源MEP HyperCelMEP單抗CHO細胞懸浮液MEP HyperCelMEP單抗小鼠腹水MEP HyperCelMEP單抗山羊奶MEP HyperCelMEP多抗兔血清MEP HyperCelMEP多抗兔血清MEP-SepharoseMEP類風濕因子、抗雙鏈

24、DNA抗體人血清MEP HyperCelMEPFc融合蛋白混合溶液MEP HyperCelMEP單抗和Fc融合蛋白CHO細胞MEP HyperCelMEP唾液蛋白唾液MEP HyperCelMEP前列腺特異性抗原精漿MEP HyperCelMEP重組肉毒桿菌神經毒素片斷畢赤酵母MEP HyperCelMEP青霉素?；D移酶大腸桿菌HCIC的應用例子Protein A親和介質：目前最為常用的抗體親和層析介質，曾占到所有抗體純化工藝的70-80%，其局限性：1）Protein A親和介質十分昂貴，是常規層析介質的10倍左右；2）介質再生困難，重復使用次數有限；3）抗體吸附容量不高；4）Protei

25、n A配基易脫落，來源于細菌表面的毒素，影響分離效果和產品質量；5）需要低pH洗脫（pH 3左右），易造成抗體聚集；6）Protein A-抗體的親和力過強，容易引起抗體結構的變異?！胺掠H和”的HCIC介質：）化學配基價格相對便宜，與常規層析介質相當；）配基穩定，再生容易，可多次重復使用；）MEP HyperCel的洗脫pH在4左右，且添加精氨酸等物質可在中性條件下實現洗脫；）親和力適中，不易引起抗體結構變異。）目前，靜態吸附較Protein A高，但動態吸附相對較低；HCIC與傳統Protein A親和對比相同點：通過親和作用與抗體的Fc片段特異性結合，減低溶液pH實現洗脫。不同點：VS五

26、擴張床吸附層析擴張床吸附層析（Expanded Bed Adsorpation, EBA）是一種新型的層析操作方式，即結合了傳統的流化床（Fluidized Bed）的進料方式，又接近于固定床（Packed Bed）的層析性能，可能看成是一種新型的集成分離技術特點用途：集成化擴張床、流化床和固定床的比較操作方式操作原理能否處理含顆粒的料液上樣方式吸附效率優缺點擴張床料液接近平推流通過床層，返混小能自下而上好需特制的介質和裝置流化床料液和介質充分混合，返混大能自下而上不好為達到一定吸附率，需循環上樣固定床流體以平推流通過床層不能自上而下好確證可行，已廣泛工業化擴張床床層基質的特性密度、粒徑及其分

27、布和結構組成基質的結構A，核殼型；B，混合型；C，均一型商品擴張床介質介質生產公司組成和類型密度g/ml粒徑,m/平均粒徑,m功能基團StreamlineAmersham Biosciences瓊脂糖-石英砂核殼型基質1.2100300/200DEAE, Q, SP, CM, Chelating, Phenyl, Heparin, rProtein AStreamlineDirect HST IAmersham Biosciences瓊脂糖-不銹鋼混合型基質1.880165 /130混合模式UpfrontFastline ProUpfrontChromatographyA/S瓊脂糖-碳化鎢混合

28、型基質2.53.520200離子交換、混合模式HyperzPALL凝膠-氧化鋯“Gel in shell”3.240105 /75離子交換擴張床吸附技術的操作(1) 平衡 擴張床在每次吸附操作前需用平衡緩沖液擴張，讓擴張床擴張到一定程度，并使其達到平衡。在此階段，基質的功能基團亦達到平衡。在擴張過程中，需要確定一個合適的擴張率E（定義為擴張床床層高度H與沉降床高度H0之比）。擴張率太低，會使料液中的固體顆粒通過困難，造成局部堵塞；擴張率過高，流速太大，會導致液相返混增加，吸附效率降低。一般認為，擴張床吸附層析操作的合適擴張率為23。另外，維持一個最低的沉降床高度，對消除進口處不均勻流化的影響，

29、獲得穩定的、返混程度小的床層十分重要，床層穩定時理論塔板數一般為170200 N/m，軸向混合系數在10-6m2/s數量級。(2) 吸附 待平衡操作結束后，迅速將進樣口由平衡緩沖液切換成料液，開始上樣吸附。由于原料液的粘度和密度一般要高于平衡緩沖液，若維持上樣流速不變，床層高度就會增加。因此，為保持擴張率不變，需要降低流速；而在吸附過程后期，由于吸附了目標產物和一些雜質，基質顆粒的密度有所增加，此時需要增加流速來維持原來的擴張率。也可以維持不變、根據擴張高度的變化來調節上分布器的位置。Chang等對這兩種操作方式作了比較，認為前一種方式較佳，可以獲得較高的動態吸附容量。(3) 清洗 吸附操作結

30、束以后，介質內外不可避免地殘留了部分料液和雜質，因此在對目標產物洗脫前，需先進行清洗操作。清洗一般仍采用擴張床方式，維持上樣時的流速不變。清洗液可使用平衡緩沖液或高粘度緩沖液。采用后者可以減少清洗液的用量，同時保證清洗液以更接近于平推流的方式流過床層，獲得更好的清洗效果。(4) 洗脫 洗脫是層析過程的關鍵步驟。擴張床層析過程有兩種洗脫方式，即固定床方式（自上而下）和擴張床方式（自下而上）。如果介質與目標產物之間的結合力較弱，產物主要吸附在床層的下半部分，應采用固定床方式洗脫；如果介質的吸附容量已經達到飽和，產物相對均勻地分布于整個床層之中，則采用擴張床洗脫方式更為有效。兩種洗脫方式各具特色，采

31、用固定床方式不僅可以減少洗脫液的用量，增加產物的濃度，還可以避免目標產物的過度稀釋，但缺點是洗脫時間長，操作過程復雜，介質顆粒會聚集，影響其再度擴張；而采用擴張床洗脫方式的優點是過程簡單，操作方便、迅速，不會造成介質的聚集，設備簡單，有利于工業化控制，可以實現連續化操作。(5) 再生 再生必須在洗脫之后馬上進行，是必不可少的一環。擴張床介質比傳統的固定床介質更容易遭到細胞、細胞碎片、脂類、核酸等雜質的污染，這往往引起吸附容量的降低和介質顆粒之間的聚集，使介質的流體動力學特性和吸附性能的重復性不佳。再生操作首先由配基性質而定，與固定床介質的再生方式基本相同；其次根據擴張床介質的基球性質，需避免對

32、基球結構和材料的破壞。一般商品介質給出了最優的再生方案擴張床吸附技術的應用目標產物產物來源吸附劑收率純化倍數納豆激酶枯草桿菌Streamline SP93%8.7-乳清蛋白脫脂牛奶Streamline Phenyl人Fab片斷重組大腸桿菌Red Fastmabs90%8.7融合蛋白重組大腸桿菌Streamline SP7080%100GST-(His)6重組大腸桿菌Streamline Chelating80%3.3乳酸脫氫酶豬肉漿Cibacron Blue Celbeads100%31Kinesin-(His) 6重組大腸桿菌Streamline Chelating100%-半乳糖苷酶重組大腸桿菌Streamline Chelating86%6人纖維生長因子重組大腸桿菌Streamline SP87%17人表皮生長因子重組大腸桿菌Strea