1、第十一章臨床免疫檢測(cè)儀器首 頁(yè)基本要求重點(diǎn)難點(diǎn)講授學(xué)時(shí)內(nèi)容提要1.1復(fù)習(xí)(1)酶免疫分析技術(shù)的分類、基本方法和原理(2)發(fā)光免疫分析的技術(shù)類型、基本方法和原理(3)放射免疫分析的技術(shù)類型、基本方法(4)免疫濁度分析的技術(shù)類型、基本方法和原理(5)時(shí)間分辨熒光免疫分析的基本方法和原理1.2熟悉(1)酶免疫分析儀的基本結(jié)構(gòu)、工理作原理和類型(2)發(fā)光免疫分析儀的類型(3)放射性核素的種類特點(diǎn)和檢測(cè)儀的基本結(jié)構(gòu)與原理(4)時(shí)間分辨免疫熒光分析的原理1.3掌握(1)酶免疫分析儀的性能評(píng)價(jià)和維護(hù)保養(yǎng)(2)發(fā)光免疫分析儀的種類、工作原理和基本結(jié)構(gòu)(3)晶體閃爍計(jì)數(shù)器組成和工作原理(4)液體閃爍計(jì)數(shù)器基本結(jié)

2、構(gòu)和應(yīng)用(5)免疫比濁分析儀的種類和檢測(cè)原理(6)時(shí)間分辨熒光免疫分析儀測(cè)試原理和基本結(jié)構(gòu).重點(diǎn)難點(diǎn)重點(diǎn)(1)自動(dòng)酶免疫分析儀的結(jié)構(gòu)和維護(hù)保養(yǎng)(2)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀的種類與特點(diǎn)(3)散射免疫比濁分析儀的特點(diǎn)(4)時(shí)間分辨熒光免疫分析儀測(cè)試原理和基本結(jié)構(gòu)難點(diǎn)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀的檢測(cè)原理時(shí)間分辨熒光免疫分析儀測(cè)試原理.講授學(xué)時(shí)建議8學(xué)時(shí)10學(xué)時(shí).內(nèi)容提要 第一節(jié) 第二節(jié) 第三節(jié) 第四節(jié) 第五節(jié).酶免疫分析儀酶免疫分析技術(shù)的分類：酶免疫分析(enzyme immunoassay, EIA)是目前臨床應(yīng)用最多的一類免疫分析技術(shù)，可分為非均相(或異相)酶免疫測(cè)定和均相酶免疫測(cè)定兩種方法。均相酶免疫分析

3、法(homogeneous enzyme immunoassay , HEI)均相酶免疫分析主要有酶擴(kuò)大免疫 測(cè)定技術(shù)和克隆酶供體免疫測(cè)定兩種方法。非均相酶免疫分析法(heterogeneous enzyme immunoassay )常用的酶免疫分析法多為非均相法， 又可分為液相酶免疫法和固相酶免疫法兩種，以后者最常用，稱為酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme linkedimmunosorbent assay , ELISA)。ELISA是臨床上最常用的免疫分析方法，目前常用的酶免疫分析儀都是 基于ELISA技術(shù)，稱為酶免疫分析儀。酶免疫分析儀的類型、工作原理及基本結(jié)構(gòu)：根據(jù)儀器結(jié)構(gòu)和自動(dòng)化程度

4、，針對(duì)固相支持物的不同(如微孔板、試管、小珠、磁微粒等)作為吸附免疫試劑的載體，因而設(shè)計(jì)成不同的酶免疫分析儀，其基本工作原理就是分光光度法，在光電比色計(jì)或分光光度計(jì)的基礎(chǔ)上根據(jù)ELISA技術(shù)的特點(diǎn)而設(shè)計(jì)。包括：微孔板固相酶免疫測(cè)定儀器國(guó)際上微孔板式 ELISA使用的載體為 96孔板，采用直接對(duì)微板孔測(cè)定吸光度(A)的比色計(jì)。(1)酶標(biāo)儀酶標(biāo)儀也稱為 ELISA測(cè)讀儀(ELISA reader ),有單通道和多通道兩種類型。自動(dòng)型多通道酶標(biāo)儀 有多個(gè)光束和多個(gè)光電檢測(cè)器，檢測(cè)速度快。如8通道的儀器，設(shè)有 8條光束(或8個(gè)光源)、8個(gè)檢測(cè)器和8個(gè)放大器。多通道酶標(biāo)儀的檢測(cè)速度較快。酶標(biāo)儀的工作原理

5、與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)幾乎完全相同(見(jiàn)圖11-1 )。既可以使用和分光光度計(jì)相同的單色器，也可以使用干涉濾光片來(lái)獲單色光，此時(shí)將濾光片置于微孔板的前、后的效果是一樣的。圖11-1酶標(biāo)儀工作原理圖酶標(biāo)儀的工作原理和光路與普通光電比色計(jì)的不同之處在于(見(jiàn)圖11-2):比色液的容器不是比色皿，而是用塑料微孔板；酶標(biāo)儀以垂直光束通過(guò)微孔板中的待測(cè)液；酶標(biāo)儀通常使用光密度OD來(lái)表示吸光度。現(xiàn)在大部分的酶標(biāo)儀還加上了判讀系統(tǒng)和軟件操作分析系統(tǒng)等。反射鏡比色液濾光片光電管圖11-2 酶標(biāo)儀光路系統(tǒng)簡(jiǎn)圖(2)半自動(dòng)微孔板式 ELISA分析儀半自動(dòng)微孔板式 ELISA分析儀在酶標(biāo)儀的基礎(chǔ)上再配置加液器、溫育器、

6、洗板機(jī)和測(cè)讀儀等分別組成。測(cè)定中需由手工將微孔板移至下一步驟的儀器中進(jìn)行。洗板機(jī)要求洗滌后固相表面非特異性物質(zhì) 洗滌干凈，吸液后每孔中殘留的液量極小。較精密的洗板機(jī)有可調(diào)節(jié)的定時(shí)、洗滌液定量及振蕩微孔板 的功能。(3)全自動(dòng)微孔板式 ELISA分析儀自動(dòng)化酶免疫分析系統(tǒng)由加樣系統(tǒng)、溫育系統(tǒng)、洗板系統(tǒng)、判讀系統(tǒng)、機(jī)械臂系統(tǒng)、液路動(dòng)力系統(tǒng)、軟件控制系統(tǒng)等組成，這些系統(tǒng)既獨(dú)立又緊密聯(lián)系。全自動(dòng)微孔板式ELISA分析儀用在大批量標(biāo)本的檢測(cè)中，不但提高了工作效率，而且測(cè)定的精密度亦得到改善。微孔板式ELISA儀器均為開(kāi)放式的，即適用于所有微板式 ELISA試齊Jo ELISA檢測(cè)結(jié)果的精密度主要取決于試

7、劑的質(zhì)量。全自動(dòng) ELISA儀器 本身的精密度一般在 3吐右。應(yīng)用優(yōu)質(zhì)試劑測(cè)定結(jié)果的精密度，定量測(cè)定可達(dá)到7%以下；常用的定性測(cè)定為感染性疾病抗原、抗體的檢測(cè)，精密度在10流右。(4)管式固相酶免疫測(cè)定儀應(yīng)用管式固相載體的 ELISA分析儀器不多，在我國(guó)應(yīng)用的有：1) 1990年德國(guó)推出的全自動(dòng)管式 ELISA分析系統(tǒng)和配套試劑。試劑包括用鏈霉親和素包被的聚苯乙烯管、生物素結(jié)合的抗原或抗體，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗體和顯色底物ABTS測(cè)定中標(biāo)準(zhǔn)曲線可使用2星期，每次測(cè)定只需一點(diǎn)定標(biāo)。測(cè)定的精密度CV在3%左右。測(cè)定項(xiàng)目齊全，包括激素、腫瘤標(biāo)志、心肌標(biāo)志和感染性疾病的抗原、抗體等。2)法國(guó)生產(chǎn)的是

8、一種特殊形狀的管式全自動(dòng)ELISA的分析儀，配套使用一個(gè)特別的“試劑條”(reagent strip )。(5)微粒固相酶免疫測(cè)定儀美國(guó)生產(chǎn)自動(dòng)酶免疫分析儀應(yīng)用聚苯乙烯微粒(顆粒直徑0.47 m)作為固相，特異抗體或抗原包被在微粒上。第一次抗原抗體反應(yīng)后，將反應(yīng)液通過(guò)特制的玻璃纖維膜，聚苯乙烯微粒吸附在玻璃纖維膜上，液體則通過(guò)膜濾出。以后的反應(yīng)在膜上進(jìn)行，用過(guò)濾方式洗滌。標(biāo)記酶為堿性磷酸酶，底物為4-甲基傘酮磷酸酶，反應(yīng)后進(jìn)行熒光測(cè)定。其后生產(chǎn)的作藥物測(cè)定的熒光偏振分析儀與一體多項(xiàng)目全自動(dòng) 免疫分析儀也在檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。(6)磁微粒固相酶免疫測(cè)定儀磁微粒可用磁鐵吸引與液相分離，是免疫測(cè)定中

9、較為理想的固相載體，較早應(yīng)用磁微粒作為酶免疫測(cè)定固相的是瑞士出品的分析系統(tǒng)，由分光光度測(cè)讀儀、磁鐵板和試劑3部分組成。試劑包括抗 異硫鼠酸熒光素(FITC)抗體，特異抗體或抗原包被的磁微粒(顆粒直徑 1d m), FITC結(jié)合的特異抗體或抗原， 堿性磷酸酶標(biāo)記的特異抗體或抗原及底物酚月太P phenolphthalein )磷酸酯。其應(yīng)用的抗FITC-抗體是與親和素-生物素原理相同的間接包被系統(tǒng)，反應(yīng)模式與電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定亦相似。反應(yīng)在試管中進(jìn)行， 基本上用手工操作。反應(yīng)結(jié)束后將試管架放在磁鐵板上，磁微粒被磁鐵吸引至管底，完成固相與液相的 分離。酶作用后反應(yīng)液呈粉紅色。4.1.3酶免疫分析儀

10、的性能評(píng)價(jià)和維護(hù)保養(yǎng)評(píng)價(jià)指標(biāo)和方法(1)濾光片波長(zhǎng)精度檢查及其峰值測(cè)定(2)靈敏度和準(zhǔn)確度靈敏度準(zhǔn)確度(3)通道差與孔間差檢測(cè) 通道差檢測(cè) 孔間差的測(cè)量(4)零點(diǎn)飄移(5)精密度評(píng)價(jià)(6)線性測(cè)定(7)雙波長(zhǎng)評(píng)價(jià)(8)全自動(dòng)酶免分析儀的主要技術(shù)參數(shù)應(yīng)達(dá)到如下要求：可隨機(jī)安排項(xiàng)目檢測(cè)，每板上可同時(shí)做8個(gè)相同條件的項(xiàng)目檢測(cè)。可用加樣針或Tip頭加樣；加樣速度應(yīng)700個(gè)/ h;加樣體積為：用針時(shí) 2300 口，用Tip頭時(shí)10-300 6，精度均為1 口 可調(diào)；加 樣精度為：用針時(shí) CV1%,用Tip頭時(shí)CV%。試劑加1速度應(yīng) 2800孔/h;加樣體積23006 ， 精度為l 口 可調(diào)；加樣精度為1

11、006 時(shí)，CV4個(gè)加熱孵育板位，軌道式振蕩，每個(gè)板位獨(dú)立控溫，互不干擾。洗板機(jī)液殘量控制在 2ul以內(nèi)。濾光片吸光度范圍為 03.0000D。 酶免疫分析儀的維護(hù)酶免疫分析儀維護(hù)的重點(diǎn)是在光學(xué)部分，防止濾光片霉變。應(yīng)定期檢測(cè)校正，保持其良好的工作性能。4.1.4酶免疫分析儀的臨床應(yīng)用病原體及其抗體的檢測(cè)各種免疫球蛋白和細(xì)胞因子、補(bǔ)體等腫瘤標(biāo)志物多種激素藥物和毒品發(fā)光免疫分析儀發(fā)光免疫技術(shù)根據(jù)示蹤物檢測(cè)的不同而分為熒光免疫測(cè)定、化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定及電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè) 定三大類。化學(xué)發(fā)光免疫根據(jù)標(biāo)記物的不同，有化學(xué)發(fā)光免疫分析、微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析、電化學(xué) 發(fā)光免疫分析、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析和生物發(fā)

12、光免疫分析等分析方法。現(xiàn)臨床以前三者較為常用。本節(jié)主要介紹目前國(guó)內(nèi)臨床應(yīng)用較多的化學(xué)發(fā)光免疫分析儀和電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。發(fā)光免疫分析的種類和基本原理發(fā)光免疫分析的基本種類根據(jù)標(biāo)記物的不同有下列幾種分析方法：化學(xué)發(fā)光免疫分析其標(biāo)記物為氨基酰腫類及其衍生物如5氫基鄰苯二甲酰腫（魯米諾）等。化學(xué)發(fā)光酶免疫分析先用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗原或抗體，在反應(yīng)終點(diǎn)時(shí)再用魯米諾測(cè)定發(fā)光強(qiáng)度。微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析其標(biāo)記物為二氧乙烷磷酸酯等。生物發(fā)光免疫分析熒光素標(biāo)記抗原或抗體，直接或間接參加發(fā)光反應(yīng)。電化學(xué)發(fā)光免疫分析所采用的發(fā)光試劑標(biāo)記物為三氯聯(lián)口比咤釘Ru（bpy） 32+N羥基琥珀酰胺酯。此種方法較常用。

13、發(fā)光免疫分析基本測(cè)定方法根據(jù)發(fā)光反應(yīng)檢測(cè)方式的不同可分為下列主要的測(cè)定方法。液相法 免疫反應(yīng)在液相中進(jìn)行，反應(yīng)后經(jīng)離心或分離措施后，再進(jìn)行測(cè)定發(fā)光強(qiáng)度。所用分離 方法包括葡聚糖包被的活性炭末、Sephadex 25層析柱、第二抗體等。固相法 將抗原抗體復(fù)合物結(jié)合在固相載體（如聚苯乙烯管）或分離介質(zhì)上（如磁性微粒球、纖維素、聚丙烯酰胺微球等），再進(jìn)行測(cè)定發(fā)光強(qiáng)度，此法較常用。試驗(yàn)原理與固相RIA和ELISA方法基本相同。均相法 如同均相酶免疫測(cè)定一樣，在免疫反應(yīng)后，不需要經(jīng)過(guò)離心或分離步驟，即可直接進(jìn)行 發(fā)光強(qiáng)度檢測(cè)。其原理是某些化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物（如雷體類激素的發(fā)光標(biāo)記物）與抗體或蛋白結(jié)合后，就能

14、增強(qiáng)發(fā)光反應(yīng)的發(fā)光強(qiáng)度。發(fā)光免疫分析儀的種類、工作原理和基本結(jié)構(gòu)重點(diǎn)：全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)、全自動(dòng)微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)和全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免 疫分析儀。（一）全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)采用化學(xué)發(fā)光技術(shù)和磁性微粒子分離技術(shù)相結(jié)合的免疫分析系統(tǒng)。在 90年代初首次應(yīng)用 后又不斷改進(jìn)，將微機(jī)與主機(jī)分開(kāi)，軟件程序加以改進(jìn)，使操作更靈活，試劑貯存 時(shí)間長(zhǎng)，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)。儀器測(cè)定原理該類分析技術(shù)有兩種方法，小分子抗原物質(zhì)測(cè)定采用的是競(jìng)爭(zhēng)法，而大分子抗原物質(zhì)測(cè)定采用的是夾心法。儀器所用固相磁粉顆粒極微小，其直徑僅1.0科m）這樣大大增加了包被表面積，增

15、加抗原或抗體的吸附量，使反應(yīng)速度加快，也使清洗和分離更簡(jiǎn)便。其反應(yīng)基本過(guò)程有：競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)；夾心法。儀器組成一般由主機(jī)和微機(jī)兩部分組成。主機(jī)部分：是儀器的運(yùn)行反應(yīng)測(cè)定部分，包括原材料配備部分、液路部分、機(jī)械傳動(dòng)部分、光路檢 測(cè)部分。材料配備部分包括反應(yīng)杯、樣品盤、試劑盤、純凈水、清洗液、廢水在機(jī)器上的貯存和處理裝 置；液路部分包括過(guò)濾器、密封圈、真空泵、管道、樣品及試劑探針等；機(jī)械傳動(dòng)部分包括傳感器、運(yùn) 輸軌道等；電路部分包括光電倍增管和線路控制板。微機(jī)系統(tǒng) 是儀器的核心部分，是指揮控制中心。其功能有程控操作、自動(dòng)監(jiān)測(cè)、指示判斷、數(shù)據(jù) 處理、故障診斷等，并配有光盤。主機(jī)還配有預(yù)留接口，可通過(guò)外部貯

16、存器自動(dòng)處理其它數(shù)據(jù)，并搖控 操作，用于實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化延伸發(fā)展。（二）全自動(dòng)微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)全自動(dòng)微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)采用微粒子化學(xué)發(fā)光技術(shù)對(duì)人體內(nèi)的微量成分以及藥物濃度進(jìn)行定量測(cè)定。系統(tǒng)具有高度的特異性、高度的敏感性和高度的穩(wěn)定性等特點(diǎn)。分析方法及過(guò)程采用磁性微粒作為固相載體，以堿性磷酸酶作為發(fā)光劑，固相載體的應(yīng)用擴(kuò)大了測(cè)定的范圍。以競(jìng)爭(zhēng)法、夾心法和抗體檢測(cè)等免疫測(cè)定方法為基礎(chǔ)：（1）抗原抗體結(jié)合將包被單克隆抗體的順磁性微粒和待測(cè)標(biāo)本加入反應(yīng)管中，標(biāo)本中的抗原與微粒子表面的抗體結(jié)合，再加入堿性磷酸酶標(biāo)記的抗體，經(jīng)溫育后形成固相包被抗體一抗原一酶標(biāo)記抗體 復(fù)合物；（2）洗滌、分離

17、（3）加入底物（AMPPD）發(fā)光劑，AMPPDt結(jié)合在磁性粒子表面的堿性磷酸酶的 催化下迅速去磷酸基因，生成不穩(wěn)定的中介體AMPD AMP/艮快分解，從高能激發(fā)態(tài)回到低能量的穩(wěn)定態(tài)，同時(shí)發(fā)射出光子，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出待測(cè)抗原的濃度。儀器組成 一般由微電腦控制、樣品處理系統(tǒng)、實(shí)驗(yàn)運(yùn)行系統(tǒng)、中心供給系統(tǒng)和中心控制系統(tǒng)四部分組成。（三）全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)在新一代實(shí)驗(yàn)室免疫檢測(cè)技術(shù)中很有特點(diǎn)，它在20世紀(jì)90年代一問(wèn)世就引起廣泛的關(guān)注。德國(guó)公司在鏈酶親和素一生物素包被技術(shù)基礎(chǔ)上，引用電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)并開(kāi) 發(fā)出相應(yīng)的檢測(cè)系統(tǒng)。測(cè)定原理及過(guò)程該類分析儀集多種技術(shù)于一身，

18、應(yīng)用了免疫學(xué)、鏈酶親合素生物包被技術(shù)及電化學(xué)發(fā)光標(biāo)記技術(shù)。將待測(cè)標(biāo)本與包被抗體的順磁性微粒和發(fā)光劑標(biāo)記的抗體加在反應(yīng)杯中共同溫育，形成磁性微珠包被抗體一抗原一發(fā)光劑標(biāo)記抗體復(fù)合物。復(fù)合物吸人流動(dòng)室，同時(shí)用TPA緩沖液沖洗。7當(dāng)磁性微粒流經(jīng)電極表面時(shí)，被安裝在電極下的磁鐵吸引住，而游離的發(fā)光劑標(biāo)記抗體被沖洗走。同時(shí)2+在電極加電壓，啟動(dòng)電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，使發(fā)光試劑標(biāo)記物三氯聯(lián)口比呢釘Ru(bpy) 3 TPA在電極表面進(jìn)行電子轉(zhuǎn)移，產(chǎn)生電化學(xué)發(fā)光。光的強(qiáng)度與待測(cè)抗原的濃度成正比。儀器組成及特點(diǎn)主要由樣品盤、試劑盒、溫育反應(yīng)盤、電化學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)及計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)組成，該類儀器特點(diǎn)為：測(cè)定速度快、樣品盤可

19、放置較多標(biāo)本、試劑盤帶有內(nèi)置恒溫裝置，以利于試劑保存。全自動(dòng)二維條碼識(shí)別系統(tǒng)靈敏度高。按照免疫學(xué)的方法原理可應(yīng)用三種抗原抗體反應(yīng)方法：抑制免疫法用于小分子量蛋白抗原檢測(cè)；夾心免疫法用于大分子量物質(zhì)檢測(cè)和橋聯(lián)免疫法用 于抗體如IgG、IgM檢測(cè)。還有釘標(biāo)記用于DNA/ RN琳針?lè)治觥０l(fā)光免疫分析儀的臨床應(yīng)用甲狀腺系統(tǒng)檢測(cè)總T3、總T4、游離T3、游離T4、促甲狀腺素、超敏促甲狀腺素、T3攝取量等；性腺系統(tǒng)檢測(cè)絨毛膜促性腺激素、泌乳素、雌二醇、雌三醇、促卵泡成熟素、促黃體生成素、孕酮、睪酮等；血液系統(tǒng)檢測(cè)維生素B2、葉酸、鐵蛋白等；腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)甲胎蛋白、癌胚抗原、CA153 CA125 CA19

20、9 3 2微球蛋白、前列腺特異抗原、游離前列腺特異抗原等；心血管系統(tǒng)檢測(cè)肌紅蛋白、肌鈣蛋白、磷酸肌酶-MB等；血藥濃度檢測(cè)地高辛、苯巴比妥、苯妥英、茶堿、萬(wàn)古霉素、慶大霉素、洋地黃、馬可西平等；感染性疾病：檢測(cè) Anti-HAV , Anti-HAV-IgM , HBsAg Anti-HBc , Anti-HBs , Anti-HBe , HBeAg Anti-HCV , HIV-Ag 等；其他 檢測(cè)IgE、血清皮質(zhì)醇、尿皮質(zhì)醇、尿游離脫氧毗咤等。放射免疫分析放射免疫技術(shù)(radio immunoassay ,RIA )類型主要包括經(jīng)典的 放射免疫分析(radioimmunoassay, RI

21、A)和免疫放射分析或免疫放射度量分析(immunoradiometric assay , IRMA)。由于受接觸放射性物質(zhì)， 損害操作人員的身體，測(cè)定完成后放射性材料的處置等問(wèn)題的存在，再加上80年代初出現(xiàn)的非同位素標(biāo)記技術(shù)得到了極大的發(fā)展和廣泛應(yīng)用，放射免疫技術(shù)的應(yīng)用有下降的趨勢(shì)。放射性核素的種類特點(diǎn)放射性核素的種類和特點(diǎn)放射性核素依衰變方式分 a、3、丫三種，用于放射性標(biāo)記的有 3和丫兩類；分別用液體閃爍計(jì)數(shù)器及 丫計(jì)數(shù)器測(cè)定。目前常用的是丫型放射性核素，如125I、131I、51Cr和60Co, 以125I最常用；3型放射性核素有3H14C和32巳以3H最常用。現(xiàn)以125I和3H為例比較

22、兩者的特點(diǎn)(見(jiàn)下表)。125i和3h標(biāo)記物特點(diǎn)比較125i標(biāo)記物3H標(biāo)記物方法簡(jiǎn)便，易獲得高比放射性標(biāo)記物方法較難，不易獲得高比放射性標(biāo)記標(biāo)記方法物對(duì)標(biāo)記化標(biāo)記日以I代替H1改變物質(zhì)結(jié)構(gòu)，可影響抗不改變抗原結(jié)構(gòu)，一般不影響抗原免合物影響原免疫學(xué)活性疫活性測(cè)量方法方法簡(jiǎn)便、效率高方法復(fù)雜，效率低測(cè)量?jī)x器丫計(jì)數(shù)器液體閃爍計(jì)數(shù)器60.2 天約11年廢棄物處理容易較難放射性核素選擇原則是應(yīng)具有高比活度、適宜半衰期、對(duì)抗原或抗體沒(méi)損害并且容易標(biāo)記。125i最接近理想條件，其比活度為6.438 X 1014Bq/g ,而14C的最大比活度為16.65 X 1010 Bq/g ,如果標(biāo)記量相同，125|敏感

23、度比14C大3900倍。RIA以放射性核素標(biāo)記抗原可用直接或間接法進(jìn)行標(biāo)記，而放射性核素標(biāo)記抗體制備用蛋白質(zhì)的標(biāo)記方法進(jìn)行。放射免疫分析儀的應(yīng)用放射免疫分析由于敏感度高、特異性強(qiáng)、精密度高、可測(cè)定小分子和大分子物質(zhì)，所以在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn) 中應(yīng)用極為廣泛。常用于測(cè)定各種激素（如甲狀腺激素、性激素、胰島素等）、微量蛋白質(zhì)、腫瘤標(biāo)志物（如 AFP、CEA CA-125、CA-199等）和藥物（如苯巴比妥、氯丙嗪、慶大霉素等）等。各種檢測(cè)項(xiàng) 目均有試劑盒供應(yīng)，所以被廣泛采用。近年來(lái)其他標(biāo)記免疫分析技術(shù)如酶免疫分析、發(fā)光免疫分析等在 技術(shù)上有飛躍的進(jìn)展，放射免疫分析有被取代的趨勢(shì)。但在生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究中，新發(fā)

24、現(xiàn)的生物活性物 質(zhì)日益增多，對(duì)它們的研究也是基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)科研中的熱門課題。研究這些新的活性物質(zhì)和某些疾病發(fā)生及 發(fā)展的關(guān)系，需要高靈敏度、高特異性的檢測(cè)方法，其中放射免疫分析技術(shù)仍為首選。免疫比濁分析儀臨床上測(cè)定微量蛋白（如Ig等）由最初的試管沉淀反應(yīng)、瓊脂凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)，發(fā)展到現(xiàn)代自動(dòng)免疫分析技術(shù)，其靈敏度逐步提高，檢測(cè)水平由微克（ 科g）發(fā)展到納克（ng）,甚至皮克（pg）水平。微量蛋白 免疫分析隨著自動(dòng)化程度不斷提高，在臨床上得到廣泛應(yīng)用，其自動(dòng)化檢測(cè)方法主要為免疫比濁法。根據(jù)檢測(cè)原理的不同，又分為透射比濁法和散射比濁法。小疫透射濁度測(cè)定法涔點(diǎn)散射比濁法免疫透射比濁法Y免疫散射比濁法Y免疫膠乳

25、濁度測(cè)定法L率散射比濁法9自動(dòng)化免疫分析比濁技術(shù)的主要優(yōu)勢(shì)在于:(1)穩(wěn)定性好(2)分析簡(jiǎn)便、快速(3)避免污染；(4)標(biāo)本用量少4. 4. 1免疫比濁測(cè)定的基本原理(一)免疫透射比濁測(cè)定免疫透射比濁度測(cè)定(turbidimetry)可分為沉淀反應(yīng)免疫透射比濁測(cè)定和免疫膠乳濁度測(cè)定法。免疫比濁法測(cè)定的光路示意見(jiàn)圖11-3 )免疫透射比濁測(cè)定原理：抗原抗體在特殊緩沖液中快速形成抗原抗體復(fù)合物，使反應(yīng)液出現(xiàn)濁度。當(dāng)反應(yīng)液中保持抗體過(guò)剩時(shí)，形成的復(fù)合物隨抗原增加而增加，反應(yīng)液的濁度亦隨之增加。免疫膠乳濁度測(cè)定法原理：選擇一種大小適中、均勻一致的膠乳顆粒，吸附抗體后，當(dāng)遇到相應(yīng)抗原時(shí)，則發(fā)生凝集。單個(gè)

26、膠乳顆粒在入射光波長(zhǎng)之內(nèi)，光線可透過(guò)。當(dāng)兩個(gè)膠乳顆粒凝集時(shí)，則使透過(guò)光減少，這種減少的程度與膠乳凝聚成正比。(二)激光散射濁度測(cè)定激光散射濁度測(cè)定(nephelometry)按測(cè)試的方式不同分二種比濁法：即終點(diǎn)散射比濁法 (endnephelometry)和速率散射比濁法(rate nephelometry) 。10激光散射濁度的基本原理是：激光散射光系沿水平軸照射，通過(guò)溶液時(shí)碰到小顆粒的抗原一抗體免 疫復(fù)合物時(shí)，導(dǎo)致光線被折射，發(fā)生偏轉(zhuǎn)。偏轉(zhuǎn)角度可以從090,這種偏轉(zhuǎn)的角度可因光線波長(zhǎng)和離子大小不同而有所區(qū)別。散射光的強(qiáng)度與抗原一抗體復(fù)合物的含量成正比，同時(shí)也和散射夾角成正比， 和波長(zhǎng)成反比

27、。終點(diǎn)散射比濁法在抗原一抗體反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)，即復(fù)合物形成后作用一定時(shí)間，通常為30-60分鐘，復(fù)合物濁度不再受時(shí)間的影響，但又必須在聚合產(chǎn)生絮狀沉淀之前進(jìn)行濁度測(cè)定。因此，終點(diǎn)散 射比濁法是測(cè)定抗原與抗體結(jié)合完成后測(cè)定其復(fù)合物的量。速率散射比濁法是一種先進(jìn)的動(dòng)力學(xué)測(cè)定法。所謂速率是指抗原一抗體結(jié)合反應(yīng)過(guò)程中，在單位時(shí)間內(nèi)兩者結(jié)合的速度。因此，速率散射比濁法是在抗原與抗體反應(yīng)的最高峰（約在1分鐘內(nèi)）測(cè)定其復(fù)合物形成的量，該法具有快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn)。速率法的靈敏度和特異性都比終點(diǎn)法好，前者的靈敏度可比后者高3個(gè)數(shù)量級(jí)之大。自動(dòng)化速率法的精密度也較好，但這與儀器的質(zhì)量和性能關(guān)系密切。濁度法速率法的校正

28、結(jié)果也較穩(wěn)定，故可貯存使 用一定時(shí)間。4. 2免疫比濁分析儀的種類和檢測(cè)原理免疫透射比濁測(cè)定用自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)，雖可達(dá)到快速混勻目的，但I(xiàn)C很可能在離心力作用下沉淀，引起誤差。如果抗原或抗體量大大過(guò)剩，出現(xiàn)可溶性復(fù)合物，對(duì)于單克隆蛋白的測(cè)定，這種 誤差更易出現(xiàn)，另外還可受血脂濃度的影響，造成假性升高。激光散射濁度測(cè)定特別是速率散射比濁法具有快速、準(zhǔn)確、靈敏度和特異性好的特點(diǎn)，在臨床上已推廣應(yīng)用，下面介紹目前國(guó)內(nèi)常用的該類儀器。（一）ARRAY寺種蛋白分析測(cè)定系統(tǒng)由微電腦控制，可以定量檢測(cè)體液中微量蛋白的全自動(dòng)組合儀器。儀器主要部件：（1）散射測(cè)濁儀（2）加液系統(tǒng)（3）試劑和樣品轉(zhuǎn)盤（4）

29、分析儀上閱讀器儀器主要特點(diǎn)：.速率信號(hào)的獲取.抗原過(guò)剩的監(jiān)測(cè)。.使用抗體、標(biāo)準(zhǔn)血清、抗體卡片和校正卡片，保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和精密度。（二）DB100特種蛋白分析測(cè)定系統(tǒng)儀器組成 DB 100 特種蛋白分析測(cè)定系統(tǒng)，由分析儀、計(jì)算機(jī)（主機(jī)、CRT顯示屏和鍵盤，用于數(shù)11據(jù)輸入和程序運(yùn)行的操作，并可在顯示屏上顯示出來(lái)）、打印機(jī)、條碼讀取器四部分組成。分析儀是該系統(tǒng)的主要部分，包括：（1）散射測(cè)濁儀；（2）加液系統(tǒng)還有標(biāo)本、抗體智能探針，具有液體感知裝置，控制加液體積的準(zhǔn)確性；（3）支架運(yùn)輸裝置；（4）比色杯裝置。儀器主要特點(diǎn)：BN 100特種蛋白分析測(cè)定系統(tǒng)測(cè)定方法實(shí)質(zhì)上是透射比濁的一種改良，利

30、用發(fā)光二極管（840nm）作為光源，檢測(cè)在前向角1324的散射光，由硅化光電二極管接收散射光信號(hào)，這種散射光的強(qiáng)度與免疫復(fù)合物濃度成正比。散射光電信號(hào)與貯存在計(jì)算機(jī)內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，然后轉(zhuǎn)換成檢測(cè)物的濃 度單位。固定時(shí)間測(cè)定 分析儀通過(guò)48個(gè)標(biāo)準(zhǔn)濃度對(duì)校準(zhǔn)曲線進(jìn)行校正。校準(zhǔn)曲線可以貯存在計(jì)算機(jī)終端 記憶器中7天；終點(diǎn)檢測(cè)法。（三）IMMAG胡疫分析測(cè)定系統(tǒng)IMMAG胡疫分析測(cè)定儀是繼 ARRAH60CE特種蛋白分析測(cè)定系統(tǒng)之后，推出的新一代全自動(dòng)特種蛋 白分析、藥物濃度監(jiān)測(cè)為一體的免疫分析系統(tǒng)。IMMAGE 免疫分析測(cè)定儀使用760nm和近紅外 940nm波長(zhǎng)作為光源，采用速率散射比濁（R

31、ateNephelometry）、速率抑制散射比濁 （Rate Inhibition Nephelometry） 、速率近紅外顆粒透射法（RateNearhfrared Particlemmunoassa）、速率抑制近紅外顆粒透射法（Rate Inhibition Near InfraredParticle Immunoassay ）四種檢測(cè)技術(shù)，并采用不同的散射角度測(cè)量發(fā)散的散射光強(qiáng)度，90角度的散射法測(cè)定小顆粒（直接反應(yīng)產(chǎn)物），0角度的透射度檢測(cè)大顆粒 （抗體顆粒結(jié)合物），擴(kuò)大檢測(cè)免疫項(xiàng)目范圍， 增強(qiáng)了檢測(cè)敏感度和精度，減少了非特異性顆粒的干擾。IMMAGE免疫分析測(cè)定儀加大抗原過(guò)量檢測(cè)范

32、圍以區(qū)分非特異性反應(yīng)使檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠，添加了試劑冷藏系統(tǒng)增加試劑的穩(wěn)定性，采用全方位的條形碼系統(tǒng)可以自動(dòng)檢測(cè)試劑及試劑的批號(hào)、校正的 狀態(tài)、試劑過(guò)期的日期、試劑的體積及質(zhì)控、標(biāo)準(zhǔn)和樣品標(biāo)本，具有雙試劑加樣探針（避免交叉污染）和智能液面感應(yīng)器，處理標(biāo)本自動(dòng)化程度高（75 180測(cè)試/ h）。（四）、BN Prospec特種蛋白免疫分析儀BN Prospec特種蛋白免疫分析儀是2000年推出的新一代全自動(dòng)特種蛋白免疫分析系統(tǒng)，儀器由主機(jī)、計(jì)算機(jī)、顯示器和打印機(jī)組成。BN Prospec 特種蛋白免疫分析儀使用遠(yuǎn)紅外發(fā)光二極管作為光源，采用固定時(shí)間散射比濁（Fixedtime Nephelom

33、etry）、終點(diǎn)散射比濁（Final Measurement Nephelometry ） 和 Vlin Integral 散射比濁 法三種檢測(cè)技術(shù)，部分試劑采用了乳膠增強(qiáng)劑，提高反應(yīng)靈敏度，大大加強(qiáng)檢測(cè)范圍。12BNProspec特種蛋白免疫分析儀主機(jī)由樣品盤、冷藏試劑盤、稀釋盤、反應(yīng)盤、探針和注射器組成。4. 3免疫比濁分析的臨床應(yīng)用范圍包括：免疫功能監(jiān)測(cè)免疫球蛋白A、免疫球蛋白 C免疫千蛋白 M免疫球蛋白輕鏈？、免疫球蛋白輕鏈入、補(bǔ)體Q、補(bǔ)體C4、C反應(yīng)蛋白等。心血管疾病檢測(cè)載脂蛋白A1、載脂蛋白 日脂蛋白a、C反應(yīng)蛋白等。炎癥狀況監(jiān)測(cè) C反應(yīng)蛋白、a 1一酸性糖蛋白、觸珠蛋白、銅藍(lán)蛋白

34、等。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的檢測(cè)類風(fēng)濕因子、C反應(yīng)蛋白、抗鏈 O等。腎臟功能監(jiān)測(cè) 微量白蛋白、a 1一微球蛋白、3 2微球蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、免疫球蛋白G等。營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)監(jiān)測(cè)白蛋白、前白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等。新生兒體檢 C 反應(yīng)蛋白、免疫球蛋白A、前白蛋白、免疫球蛋白 G等。凝血及出血性疾病的檢測(cè)抗凝血酶出、轉(zhuǎn)鐵蛋白、觸珠蛋白等。貧血監(jiān)測(cè) 觸球蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等。血腦屏障監(jiān)測(cè)腦脊液白蛋白、免疫球蛋白A免疫千蛋白 G免疫千蛋白 M4.5時(shí)間分辨熒光免疫分析儀熒光免疫測(cè)定同酶免疫測(cè)定一樣，根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后是否需要分離結(jié)合的/游離的熒光標(biāo)記物而分為均相和非均相兩種類型，基本反應(yīng)式如下：Ab+Ag-AbAg+Ab （Ab

35、 Ag代表結(jié)合的標(biāo)記物，Ab為游離的標(biāo)記物）。在抗原抗體反應(yīng)后，先把Ab*Ag與Ab*分離，然后測(cè)定 Ab*Ag或Ab*中的標(biāo)記物的量，從而推算出標(biāo)本中的 Ag量，該方法稱為非均相熒光免疫測(cè)定法，如時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定（time-resolvedfluorescence immunoassay, TRFIA）本章節(jié)重點(diǎn)介紹非均相熒光免疫測(cè)定法的時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定儀。時(shí)間分辨熒光免疫檢測(cè)原理該技術(shù)的基本原理為：用例系三價(jià)稀土離子及其螯合物（如Eu3+螯合物）作為示蹤物標(biāo)記抗原、抗體、核酸探針等物質(zhì)；當(dāng)免疫反應(yīng)發(fā)生后，根據(jù)稀土離子螯合物的熒光光譜的特點(diǎn)（ 特異性強(qiáng)、巨大Stokes 位移、熒光壽

36、命長(zhǎng)），用時(shí)間分辨熒光分析儀延緩測(cè)量時(shí)間，排除標(biāo)本中非特異性熒光的干擾，所得信 號(hào)完全是稀土元素螯合物發(fā)射的特異熒光，測(cè)定免疫反應(yīng)最后產(chǎn)物的特異性熒光信號(hào)。根據(jù)熒光強(qiáng)度判 斷反應(yīng)體系中分析物的濃度，達(dá)到定量分析的目的。13時(shí)間分辨熒光原理班遲時(shí)向發(fā)射光券命Q 400B001000微發(fā)光K=34 0nm1g。周廊抄圖11-4時(shí)間分辨熒光原理與一般的熒光分光光度儀不同，時(shí)間分辨熒光分析儀的激發(fā)光與熒光的波長(zhǎng)差別顯著，其波長(zhǎng)轉(zhuǎn)變達(dá)280nm采用脈沖光源（每秒閃爍1000次以上的氤燈），照射樣品后即短暫熄滅，以電子設(shè)備控制延緩時(shí)間，待非特異熒光本底衰退后，再測(cè)定樣品發(fā)出的長(zhǎng)壽命例系熒光（見(jiàn)圖11-4）

37、。時(shí)間分辨熒光免疫分析的特點(diǎn)特異性強(qiáng)標(biāo)記物為具有獨(dú)特?zé)晒馓匦缘南⊥两饘?例系元素，主要包括鋪（Eu）、杉（Sn）、卒（Dy）、得（Te）四種。稀土離子的熒光激發(fā)光波長(zhǎng)范圍較寬，而發(fā)射光波長(zhǎng)范圍甚窄，同時(shí)激發(fā)光和發(fā)射光之間有一個(gè)較大的 Stokes位移（大約290nm,如鋪元素發(fā)射光 613nm激發(fā)光340nm,熒光素的Stokes 位移為280nm；這十分有利于排除非特異熒光的干擾，采用干涉濾波片就可以消除散射光引起的干擾， 從而提高了熒光信號(hào)測(cè)量的特異性。靈敏度高稀土離子鰲合物所產(chǎn)生的熒光不僅強(qiáng)度高，而且半衰期長(zhǎng)（例如：鋪元素的半衰期為 43011 s,普通熒光免疫分析中熒光團(tuán)的衰變時(shí)間只有

38、1100s,樣品中的一些蛋白質(zhì)的熒光衰變時(shí)間僅為110ws）,因此利用延長(zhǎng)測(cè)量時(shí)間，待測(cè)樣品中短壽命的自然熒光完全衰變后再測(cè)稀土離子鰲合物的 熒光信號(hào)，即將特異性熒光與非特異性熒光分辨開(kāi)來(lái)消除了來(lái)自樣品熒光的干擾，大大提高了檢測(cè)靈敏 度，同時(shí)擴(kuò)大了檢測(cè)范圍。標(biāo)記物穩(wěn)定三價(jià)稀土離子與雙功能鰲合劑鰲合，形成穩(wěn)定的鰲合物，從而使標(biāo)準(zhǔn)曲線穩(wěn)定，試劑保質(zhì)期長(zhǎng)。時(shí)間分辨熒光免疫檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線相當(dāng)穩(wěn)定，同一批次的試劑盒可用兩點(diǎn)法加批次的參考曲線定標(biāo)。線性范圍寬，重復(fù)性好解離增強(qiáng)時(shí)間分辨熒光免疫分析法（DELFIA）熒光檢測(cè)分析中加入一種酸性增強(qiáng)液，稀土離子從免疫復(fù)合物中解離出來(lái)，并和增強(qiáng)液中的一些成分形成一

39、種穩(wěn)定的微囊，當(dāng) 微囊被激光激發(fā)后則稀土離子發(fā)出長(zhǎng)壽命的熒光信號(hào)，使原來(lái)微弱的熒光信號(hào)增強(qiáng)100萬(wàn)倍。時(shí)間分辨熒光免疫分析儀測(cè)試原理和基本結(jié)構(gòu)14/分析系統(tǒng)，并有相應(yīng)配套試劑目前國(guó)內(nèi)已經(jīng)開(kāi)發(fā)生產(chǎn)出不同型號(hào)的時(shí)間分辨熒光免疫強(qiáng)度測(cè)試儀 可供臨床實(shí)驗(yàn)室選用，現(xiàn)將該類分析儀的測(cè)試原理和基本結(jié)構(gòu)介紹如下。為了解該類儀器的基本結(jié)構(gòu)，工作原理和使用方法，以DELFIA 1230時(shí)間分辨熒光儀為例作一介紹,定標(biāo)器見(jiàn)圖11-5。圖11-5 DELFIA1230時(shí)間分辨熒光儀的原理圖在該系統(tǒng)中，氤閃爍燈是脈沖激發(fā)光源，脈沖寬度10ps,頻率為1000次/秒。激發(fā)光經(jīng)二個(gè)石英透鏡和一個(gè)濾色片把激發(fā)光束聚焦到被測(cè)樣

40、品，濾色片選出的激發(fā)光波長(zhǎng)是340nm半透明鏡反射部分激發(fā)光束到光電二極管，它測(cè)量激發(fā)光的光通量，而且當(dāng)激發(fā)樣品的光能達(dá)到規(guī)定量時(shí)，停止氤燈閃爍，以保證每個(gè)樣品得到相等的激發(fā)能。每測(cè)量一個(gè)樣品是由約1000次激發(fā)一測(cè)量循環(huán)組成的，每個(gè)循環(huán)的持續(xù)時(shí)間是l ms=由定標(biāo)器累積記錄熒光計(jì)數(shù)。反復(fù)閃爍的激發(fā)光能量的總和用光電二極管一反饋電 路積分，當(dāng)達(dá)到了預(yù)置的閾電壓水平，閃爍燈的驅(qū)動(dòng)器停止其閃爍。因此，它是用控制激發(fā)脈沖數(shù)來(lái)穩(wěn) 定激發(fā)能量，而不是用調(diào)節(jié)閃爍能量來(lái)穩(wěn)定激發(fā)能量。激發(fā)光穿過(guò)樣品管（孔）的側(cè)面激發(fā)樣品，而樣品的發(fā)射光則穿過(guò)孔的底部后被測(cè)量，這樣激發(fā)光 和發(fā)射光的方向成直角，減小前者對(duì)后者的

41、干擾。類似用于激發(fā)光的一組透鏡被用來(lái)聚焦發(fā)射光速。透 鏡之間有一個(gè)窄帶干涉濾色片，選出相關(guān)的發(fā)射波長(zhǎng)，對(duì) Eu即為615nmio最后這個(gè)透鏡聚集 615nm波長(zhǎng) 發(fā)射光束進(jìn)入探測(cè)器一光電倍增管，它是側(cè)窗式的，其光陰極是紅光敏感的多堿光陰極，它有良好的光15譜響應(yīng)。經(jīng)嚴(yán)格選擇的光電倍增管，以保證暗電流低和溫度效應(yīng)穩(wěn)定。光電倍增管輸出脈沖由一個(gè)快前置放大器放大，而后送到前置定標(biāo)器，在測(cè)量周期完成后，微處理 機(jī)讀取定標(biāo)器中的內(nèi)容而且存儲(chǔ)這累積計(jì)數(shù)。DELFIA1230時(shí)間分辨熒光儀是測(cè)量 Eu單標(biāo)記樣品的，其通常測(cè)量條件為延遲時(shí)間400 ds ,測(cè)量時(shí)間400ds ,儀器恢復(fù)時(shí)間200 s, 一次循

42、環(huán)共1 ms。測(cè)一個(gè)樣品約經(jīng)1000次循環(huán)，需時(shí)1s。最后 計(jì)數(shù)是這1000次循環(huán)中所測(cè)計(jì)數(shù)之累積。固相分離：在解離增強(qiáng)之前，需要分離例系元素（如Eu）標(biāo)記抗體的結(jié)合部分與未結(jié)合部分。最方便的方法是利用固定免疫反應(yīng)物的固相支撐材料進(jìn)行分離。隨著TRFIA技術(shù)的發(fā)展，試用了聚苯乙烯、聚丙烯和聚乙烯碳酸酯等多種塑料，它們都能結(jié)合蛋白，但磷光本底則不同。目前在TRFIA中最常用的是聚苯乙烯板條，通常一板含 8個(gè)分離的條，每條 12孔。這是因?yàn)榫郾揭蚁┑牧坠獗镜椎停矣钟邢?滌板條的自動(dòng)裝置。值得注意的是不同廠家用同樣原棚料生產(chǎn)的板條，其磷光本底也有很大差異，應(yīng)進(jìn) 行選擇。把在一種適宜的緩沖液中的足夠量的抗體或抗原加入聚苯乙烯微滴定板條孔中，然后溫育，借助物理吸附，就能完成抗體或抗原的包被。如果用一種載體蛋白，如牛血清白蛋白（BSA）,作穩(wěn)定劑。包被抗體可在幾個(gè)月內(nèi)保持穩(wěn)定。對(duì)于小分子抗原和半抗原可用同樣辦法包被，但在包被之前先要把它們連 接到一種非免疫反應(yīng)載體蛋白（non immunoreactive carrier protein）上，如對(duì)考的松和睪酮用卵蛋白作載體蛋白，而對(duì)地高辛則用兔血清白蛋白作載體蛋白。應(yīng)用這種易于處理，易于洗滌的固相分離技術(shù)，可減少分析中的非特異熒光