1、藥品生產質量管理規范(2010年修訂）無菌藥品附錄培訓1第1頁，共164頁。培訓內容簡介一、無菌藥品（第一章范圍）二、無菌藥品（第二章原則）三、無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）四、無菌藥品（第四章隔離操作技術）五、無菌藥品（第五章吹灌封技術）六、無菌藥品（第六章人員）七、無菌藥品（第七章廠房）第2頁，共164頁。八、無菌藥品（第八章設備）九、無菌藥品（第九章消毒）十、無菌藥品（第十章生產管理）十一、無菌藥品（第十一章滅菌工藝）十二、無菌藥品（第十二章滅菌方法）十三、無菌藥品（第十三章滅菌藥品的最終處理）十四、無菌藥品（第十四章質量控制）培訓內容簡介第3頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第一章范

2、圍）第一章范圍第4頁，共164頁。條款解讀：第一條 無菌藥品是指法定藥品標準中列有無菌檢查項目的制劑和原料藥，包括無菌制劑和無菌原料藥。1、明確無菌藥品的概念及涵蓋的范圍。無菌藥品是指法定藥品標準中列有無菌檢查項目的制劑和原料藥。2、無菌：是指沒有活的微生物的存在。3、無菌制劑包括注射劑、眼用制劑、無菌軟膏劑、無菌混懸劑等。4、所謂原料藥,是指專門供給藥品制劑生產所用的化學物質。原料藥作為藥品制劑企業的上游產品，原料藥據其制成藥劑需求可分非無菌原料藥與無菌原料藥兩大類，其中無菌原料藥指其中不含任何活性的微生物如霉菌、細菌、病毒等；反之，對此沒有嚴格要求就是非無菌原料藥。附錄1無菌藥品（第一章范

3、圍）第5頁，共164頁。第二條 本附錄適用于無菌制劑生產全過程以及無菌原料藥的滅菌和無菌生產過程。 1、明確無菌藥品附錄的涵蓋范圍。附錄1無菌藥品（第一章范圍）第6頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第二章原則）第二章原則第7頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第二章原則）第三條 無菌藥品的生產須滿足其質量和預定用途的要求，應當最大限度降低微生物、各種微粒和熱原的污染。生產人員的技能、所接受的培訓及其工作態度是達到上述目標的關鍵因素，無菌藥品的生產必須嚴格按照精心設計并經驗證的方法及規程進行，產品的無菌或其它質量特性絕不能只依賴于任何形式的最終處理或成品檢驗（包括無菌檢查）。1、無菌藥品生產應滿足質量

4、要求和預訂用途的要求，質量要求是指滿足包括每種無菌藥品的質量標準，并且保證藥品能夠起到相應的療效。2、無菌藥品的生產過程應對可能引起微粒、微生物和內毒素的潛在污染進行嚴格控制，無菌工藝的本質就是減少或者消除這些潛在污染源。3、影響無菌藥品的最為關鍵的因素就是人員，生產人員的技能、所接受的培訓及工作態度是人員因素的核心內容。第8頁，共164頁。4、評價無菌保證工藝是否有效曾一度主要通過對終產品抽樣進行無菌檢驗來判斷，由于微生物在產品中的分布是不均勻的，且抽檢樣品的數量有限，故抽檢的結果不能代表整批產品的無菌狀態。國際上更為注重無菌保證工藝的設計是否合理，所用的設備與工藝是否經過充分驗證，在此基礎

5、上是否嚴格按照驗證后的工藝進行生產，這樣才能保證無菌的可靠性。 在業界常用無菌保證水平（Sterility Assurance Level，SAL）概念來評價滅菌（無菌）工藝的效果，SAL定義為產品經滅菌或除菌后微生物殘存的概率。該值越小證明產品中微生物存在的概率越小。為了保證注射劑的無菌安全性，國際上一致規定，采用濕熱滅菌法的SAL不得大于10-6，即滅菌后微生物存活的概率不得大于百萬分之一；而采用無菌生產工藝生產的產品，其SAL只能達到10-3，故僅限于臨床必須注射給藥而確實無法耐受最終滅菌的產品，無菌生產工藝只是用于粉針劑和部分小容量注射劑。附錄1無菌藥品（第二章原則）第9頁，共164頁

6、。附錄1無菌藥品（第二章原則）5、熱原（pyrogen）：指由微生物產生的能引起恒溫動物體溫異常升高的致熱物質。它包括細菌性熱原、內源性高分子熱原、內源性低分子熱原及化學熱原等。這里所指的“熱原”，主要是指細菌性熱原，是某些細菌的代謝產物、細菌尸體及內毒素。致熱能力最強的是革蘭氏陰性桿菌的產物，其次是革蘭陽性桿菌類，革蘭陽性球菌則較弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能產生熱原。熱原通常是磷脂多醇與蛋白質結合而成的復合物。磷脂多醇是復合物的活性中心，致熱作用最強。其化學組成因菌種不同而有所差異。6、熱原反應：注入人體的注射劑中含有熱原量達1g/kg就可引起不良反應，發熱反應通常在注入1小時后出現，可使

7、人體產生發冷、寒顫、發熱、出汗、惡心、嘔吐等癥狀，有時體溫可升至40以上，嚴重者甚至昏迷、虛脫，如不及時搶救，可危及生命。該現象稱為“熱原反應”。 10第10頁，共164頁。7、細菌內毒素：藥品中的熱原主要是細菌內毒素。一般可以認為：細菌內毒素就是熱原，但是熱原不等于細菌內毒素。8、 中國藥典2005年版規定熱原檢查采用家兔法，細菌內毒素檢查采用鱟試劑法。細菌內毒素檢查包括凝膠法和光度測定法兩種方法，前者利用鱟試劑與細菌內毒素產生凝集反應的原理來檢測或半定量內毒素，后者包括濁度法和顯色基質法，系分別利用鱟試劑與內毒素反應過程中的濁度變化及產生的凝固酶使特定底物釋放出呈色團的多少來測定內毒素。

8、鱟試劑法檢查內毒素的靈敏度為0.0001g/ml,比家兔法靈敏10倍，操作簡單易行，試驗費用低，結果迅速可靠，適用于注射劑生產過程中的熱原控制和家兔法不能檢測的某些細胞毒性藥物制劑，但其對革蘭陰性菌以外的內毒素不靈敏，目前尚不能完全代替家兔法。附錄1無菌藥品（第二章原則）11第11頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第二章原則）9、鱟（hu），屬節肢動物門，肢口綱， 劍尾目鱟科，鱟屬。俗稱三刺鱟、兩公婆、海怪，因其長相既像蝦又像蟹，因此人們又稱之為“馬蹄蟹”,是一種棲生于海洋的低等無脊椎動物并且是一類與三葉蟲 (現在只有化石)一樣古老的動物。鱟的祖先出現在地質歷史時期古生代的泥盆紀，泥盆紀常被稱為

9、“魚類時代”。當時恐龍尚未崛起，原始魚類剛剛問世，隨著時間的推移，與它同時代的動物或者進化、或者滅絕，而惟獨只有鱟從4 億多年前問世至今仍保留其原始而古老的相貌，所以鱟有“活化石”之稱。現存于世的鱟有三屬四種，常見的有兩種美洲鱟和東方鱟。12第12頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第二章原則）第四條 無菌藥品按生產工藝可分為兩類：采用最終滅菌工藝的為最終滅菌產品；部分或全部工序采用無菌生產工藝的為非最終滅菌產品。1、 最終滅菌工藝：在控制微生物污染量的基礎上，在藥品灌封后，通過濕熱滅菌方式除菌。一般來說本方法成本低，無菌保證水平高，適用于大容量注射劑及小容量注射劑的滅菌。2、 無菌生產工藝：在無

10、菌系統環境下，通過除菌過濾法及無菌操作法，以防止過程污染為目的，消除導致污染的各種可能性來保證無菌水平。一般來說，由于本工藝對環境系統要求高，且影響無菌操作的因素多而使得無菌保證水平比終端滅菌水平低。適用于粉針劑，亦可適用于臨床需要但是不能進行終端滅菌的小容量注射劑。13第13頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第二章原則）第五條 無菌藥品生產的人員、設備和物料應通過氣鎖間進入潔凈區，采用機械連續傳輸物料的，應當用正壓氣流保護并監測壓差。1、 明確無菌生產的人員、設備及物料必須通過氣閘間才能進行潔凈區。2、氣閘間：歐盟：也可以叫氣鎖（Air-lock）,設置于兩個或數個房間之間（如不同潔凈級別的房

11、間之間）的具有兩扇或多扇門的隔離空間。設置氣鎖的目的是在人員或物料出入該房間時，對氣流進行控制。氣閘間有人員和物料之分。FDA：氣閘 帶連鎖門的小房間，用于保持臨近房間之間的氣壓控制(通常所述臨近房間的潔凈級別不同)。無菌工藝氣閘的目的是排除從較低級別區域的塵埃粒子和微生物污染侵入。14第14頁，共164頁。3、 明確機械方式傳輸物料，應確保高級別區域對低級別區域的相對正壓，并且應監測壓差。目前采用機械傳輸物料主要是西林瓶清洗后通過滅菌隧道傳輸至A級區進行無菌灌裝。附錄1無菌藥品（第二章原則）15第15頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第二章原則）第六條 物料準備、產品配制和灌裝或分裝等操作必須

12、在潔凈區內分區域（室）進行。1、 明確物料準備、配制和灌裝首先必須在潔凈區內進行，并且必須在不同的功能區域或房間進行，物料準備、產品配制劑灌裝的一系列過程無菌要求是逐級提高的，目的是避免交叉污染。2、灌裝主要是指裝入內包裝材料的物料的狀態為液體。16第16頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第二章原則）第七條 應當根據產品特性、工藝和設備等因素，確定無菌藥品生產用潔凈區的級別。每一步生產操作的環境都應當達到適當的動態潔凈度標準，盡可能降低產品或所處理的物料被微粒或微生物污染的風險。1、 明確無菌藥品生產的不同區域（房間）的潔凈級別的確定原則。2、明確不同的潔凈級別均應當達到相應的動態潔凈度標準，在

13、98版GMP中只要求達到靜態潔凈度要求。并且在設計相應的無菌工藝操作時應盡可能降低物料及產品被污染的風險。3、微生物（microbe）：個體微小，結構簡單，通常要用光學顯微鏡和電子顯微鏡才能看清楚的生物，統稱為微生物。 微生物包括細菌、病毒、霉菌、酵母菌等。（但有些微生物是可以看見的，像屬于真菌的蘑菇、靈芝等。）4、微粒（particle）：懸浮在空氣中的、固態的或液態的、活性的或非活性的物質，其粒徑在10nm100m的范圍。17第17頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）第三章潔凈度級別及監測18第18頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）第八條 潔凈區的

14、設計必須符合相應的潔凈度要求，包括達到“靜態”和“動態”的標準。1、 潔凈區潔凈室(Clean Room)，亦稱為無塵室或清凈室，是指將一定空間范圍內之空氣中的微粒子、有害空氣、細菌等污染物排除，并將室內的溫度、潔凈度、室內壓力、氣流速度與氣流分布、噪音振動及照明、靜電控制在某一需求范圍內，而所給予特別設計的房間。亦即是不論外在之空氣條件如何變化，其室內均能具有維持原先所設定要求的潔凈度、溫濕度及壓力等性能的特性。 2、潔凈度：潔凈度指潔凈空氣中空氣含塵（包括微生物）量多少的程度。3、靜態：指所有生產設備均已安裝就緒，但沒有生產活動且無操作人員在場的狀態。4、動態：指生產設備按預定的工藝模式運

15、行并有規定數量的操作人員在現場操作的狀態。5、空態：條件下測試是指系統(潔凈室)已處于正常運行狀態，但工藝設備、生產人員還未進入情況下測試的。19第19頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）第九條 無菌藥品生產所需的潔凈區可分為以下4個級別：A級：高風險操作區，如灌裝區、放置膠塞桶和與無菌制劑直接接觸的敞口包裝容器的區域及無菌裝配或連接操作的區域，應當用單向流操作臺（罩）維持該區的環境狀態。單向流系統在其工作區域必須均勻送風，風速為0.36-0.54m/s（指導值）。應當有數據證明單向流的狀態并經過驗證。在密閉的隔離操作器或手套箱內，可使用較低的風速。B級：指無菌配制和灌裝等

16、高風險操作A級潔凈區所處的背景區域。C級和D級：指無菌藥品生產過程中重要程度較低操作步驟的潔凈區。 20第20頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）1、 單向流潔凈室：由方向單一、流線平行并且速度均勻穩定的單向流流過房間工作區整個截面的潔凈室。單向流可以是一個房間、一個房間的局部或、超凈工作臺、生物安全柜或隔離倉等。21第21頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）2、單向流潔凈室的風速必須均勻，指導值為0.360.54m/s，即0.45m/s20%，按照法定的方法進行風速檢測，并采用煙霧試驗證明單向流潔凈室（或區域）的氣體流型。22第22頁，共164頁。附錄

17、1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）以上各級別空氣懸浮粒子的標準規定如下表：潔凈度級別懸浮粒子最大允許數/立方米靜態動態(3)0.5m5.0m(2)0.5m5.0mA級(1)352020352020B級3520293520002900C級3520002900352000029000D級352000029000不作規定不作規定23第23頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）注：（1）為確認A級潔凈區的級別，每個采樣點的采樣量不得少于1立方米。A級潔凈區空氣懸浮粒子的級別為ISO4.8，以5.0m的懸浮粒子為限度標準。B級潔凈區（靜態）的空氣懸浮粒子的級別為ISO5，同時包括表中

18、兩種粒徑的懸浮粒子。對于C級潔凈區（靜態和動態）而言，空氣懸浮粒子的級別分別為ISO7和ISO8。對于D級潔凈區（靜態）空氣懸浮粒子的級別為ISO8。測試方法可參照ISO14644-1。（2）在確認級別時，應當使用采樣管較短的便攜式塵埃粒子計數器，避免5.0m懸浮粒子在遠程采樣系統的長采樣管中沉降。在單向流系統中，應當采用等動力學的取樣頭。（3）動態測試可在常規操作、培養基模擬灌裝過程中進行，證明達到動態的潔凈度級別，但培養基模擬灌裝試驗要求在“最差狀況”下進行動態測試。 24第24頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）1、ISO潔凈度等級、傳統分級及GMP規定的潔凈度 19

19、63年，美國潔凈室標準FED-STD-209中，按每立方英尺中0.5mm粉塵數量的最高允許濃度，將潔凈室分成若干等級，如100級、10,000級、100,000級。世界上許多國家都加以效仿。1999年，國際標準化組織ISO頒布了一項國際標準ISO14644-1 潔凈室與受控潔凈環境第一部分：空氣潔凈度分級。標準中采用了新的分級。2001年，中國新頒布的潔凈室設計標準中采用了ISO分級。25第25頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）ISO 14644EU GMP & 2010版GMPCN GMP 98 0.5m 5mRO 0.5m 5mR 0.5m 5m12433543525

20、352029A & BA352020（B29）百級3500063520029373520002930CB3520002900萬級35000020008352000029300DC352000029000十萬級350000020000935200000293000三十萬級105000006000026第26頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）2、粒子最大允許濃度:Cn:大于或等于被考慮粒徑的粒子最大允許濃度 n : ISO等級級別，最大不超過9D :以微米（m）計的被選粒徑0.1:為一常數，表示以微米（m）計的量綱例如：ISO 8級(D級)C8=108(0.1/ 0.5)2.

21、08 = 3516757 35200027第27頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）3、采樣點：1、根據ISO14644-1.2015標準，表A.1有關潔凈室區域的取樣點2、取樣點的定位a) 使用表格A.1里的取樣點最小數量NL；b) 然后將整個潔凈室或潔凈區劃分為NL個等面積區塊；c) 每個區塊都選定一個可代表該區塊特征的取樣點；d) 在每個取樣點，將粒子計數器采樣探頭置于工作活動的平面或另一個指定點。 28第28頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）4、采樣量：采樣點的每次采樣量：每個采樣點的采樣量至少為2L，采樣時間最少為1 min。為確認A級潔凈區

22、的級別，每個采樣點的采樣量不得少于1立方米。VS：每個采樣點每次最少采樣量（L）Cn,m：為相關等級規定的最大被考慮粒徑之等級限值20：當粒子濃度處于該等級限值時，可被檢測到的粒子數。 29第29頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）5、結果計算：各取樣點的平均粒子濃度：當一個取樣點發生兩次或多次取樣，根據公式(A.3)， 以單份樣品粒子濃度的每個被考慮粒徑來計算和記錄每個點的平均粒子數量。其中： 代表在取樣點i的平均粒子數，i可代表任何取樣點；xi.1到xi.n代表單份樣品的粒子數量；n代表在取樣點i的取樣次數。30第30頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監

23、測）每立方米的濃度計算其中：Ci代表每立方米的粒子濃度； 代表在取樣點i的平均粒子數，i可代表任何取樣點；Vt代表被選擇的單次取樣量（升）如果各取樣點測量的平均粒子濃度（每立方米的粒子數）不超過ISO14644-1.2015表格1里規定的濃度限值，潔凈室或潔凈區被視為已達到規定的空氣潔凈度分級要求。最低取樣量的設定是基于以上所示的最低取樣量計算，也決定了粒子計數器運行1分鐘得到的取樣量。每個取樣點的取樣必須至少進行1分鐘；在運行1分鐘的情況下， 如果計算出來的最低取樣量令人滿意，取樣過程可在1分鐘結束時停止。在運行1分鐘和儀器處于某流量的情況下，如果不能獲得計算的最低取樣量，取樣必須持續更長時

24、間直到獲得至少最低取樣量。當判定所需取樣時間時，需同時滿足1分鐘要求和計算的最低取樣量這兩個條件，用戶需明確將要使用的規定儀器的流量，因為粒子計數器有幾種可能的流量。 31第31頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）臺式懸浮粒子計數器32第32頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）8、培養基模擬灌裝試驗：（Media Fill Test，縮寫：MFT） 培養基模擬灌裝試驗用于無菌產品的生產過程在確定的環境、人員、工藝、物料、設備和監控條件下，是否能有效地防止微生物污染，保證所提供產品的無菌可靠性的一種方法。 培養基模擬灌裝試驗是無菌生產工藝的驗證手段，是任何

25、非最終滅菌的無菌藥品必須進行的一項驗證。 在培養基模擬灌裝試驗設計時，工藝條件的選擇應該選取合理的“最差條件”，用最差條件對工藝流程、設備和整個體系進行挑戰。如果在最差條件下能夠獲得好的結果，這說明在比最差條件情況要好的實際生產中，無菌保證的可靠性更有保證。最差條件例如：33第33頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）在準備階段將物料、灌裝部件和待灌裝的容器按照工藝要求在無菌條件下保存到被允許的最長時間。灌裝時在關鍵區域保留最多的人員。 最差條件并不僅僅是上述列出的幾點。最差條件是指在工藝允許范圍內正常生產時可能遇到的最差情況，并不包括由于偏差引起的超出工藝要求的特殊情況。3

26、4第34頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）第十條 應當按以下要求對潔凈區的懸浮粒子進行動態監測：（一）根據潔凈度級別和空氣凈化系統確認的結果及風險評估，確定取樣點的位置并進行日常動態監控。1、潔凈區的潔凈級別確認是設備設施驗證的一部分，并需要進行定期再確認。潔凈級別確認和潔凈區監測是兩個環節，應該明確予以區分并分別管理。2、取樣點的位置根據確認的結果及風險評估來確定，例如：在哪些點最有可能造成污染，對產品質量造成不良影響？3、取樣點的確定還應注意下列問題：取樣點一般布置在距離地面0.81.5m之間或操作平臺的高度。盡量避免在回風口附近取樣，而且測試人員應站在取樣口的下風側

27、。35第35頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）（二）在關鍵操作的全過程中，包括設備組裝操作，應當對A級潔凈區進行懸浮粒子監測。生產過程中的污染（如活生物）可能損壞塵埃粒子計數器時，應當在設備調試操作和模擬操作期間進行測試。A級潔凈區監測的頻率及取樣量，應能及時發現所有人為干預、偶發事件及任何系統的損壞。灌裝時，由于產品本身產生粒子或液滴，允許灌裝點5.0m的懸浮粒子出現不符合標準的情況。1、明確要求對A級區的關鍵操作的全過程包括設備組裝操作進行懸浮粒子監測。2、明確提出了A級潔凈區監測的頻率及取樣量的確定原則。3、灌裝點位在監測過程中很有可能出現5.0m的懸浮粒子超標的情

28、況，但是這種超標情況是允許的。36第36頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）4、為避免監測過程對正常生產過程的干擾，一般采用在線懸浮粒子監測系統。37第37頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）38第38頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）（三）在B級潔凈區可采用與A級潔凈區相似的監測系統。可根據B級潔凈區對相鄰A級潔凈區的影響程度，調整采樣頻率和采樣量。（四）懸浮粒子的監測系統應當考慮采樣管的長度和彎管的半徑對測試結果的影響。 （五）日常監測的采樣量可與潔凈度級別和空氣凈化系統確認時的空氣采樣量不同。 （六）在A級潔凈區和B級潔凈區，

29、連續或有規律地出現少量5.0 m的懸浮粒子時，應當進行調查。 39第39頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）（七）生產操作全部結束、操作人員撤出生產現場并經1520分鐘（指導值）自凈后，潔凈區的懸浮粒子應當達到表中的“靜態”標準。1、一個房間的潔凈度與三個因素有關，進入房間的空氣質量和風量；潔凈空氣在房間中混合均勻的程度以及房間的體積。因此，簡單的用換氣次數來要求房間的潔凈度是不全面的。比如說，換氣次數很高，但流型很差的房間（進風吹到地板，然后返回天花板，其余部分空氣懸停），其自凈能力自然也很差，所以現在評價潔凈室自凈能力用恢復時間來衡量，也即一個潔凈室從動態恢復至靜態所需

30、要的時間。這個指標綜合了換氣次數，流型等因素，更能評價一個潔凈室自凈能力的大小。因此EUGMP及新版GMP取消了關于換氣次數的規定。但是按照ISPE新的HVAC系統指南，建議換氣次數如下:D級：620次/小時；C級：2040次/小時；B級：4060次/小時。40第40頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）（八）應當按照質量風險管理的原則對C級潔凈區和D級潔凈區（必要時）進行動態監測。監控要求以及警戒限度和糾偏限度可根據操作的性質確定，但自凈時間應當達到規定要求。1、對于C級潔凈區和D級潔凈區進行動態監測前首先根據風險管理的原則確定取樣點、取樣量及取樣頻次。2、警戒限度和糾偏限

31、度的確定：可以根據歷史數據，結合不同潔凈區域的標準制訂，如采用數理統計（正態分布法）的方法，一般可以將平均值加上2倍的標準差作為警戒限度，加上3倍的標準差作為糾偏限度。糾偏限度不得高于相應潔凈級別的參照性限度標準。41第41頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）42第42頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）（九）應當根據產品及操作的性質制定溫度、相對濕度等參數，這些參數不應對規定的潔凈度造成不良影響。1、新版GMP中取消了對于溫濕度的規定，決定潔凈室溫濕度的因素包括：操作者的舒適、減少微生物生長、靜電污染、工藝的需要、節能和降耗。2、從人的角度分析，人是潔

32、凈室內主要的發塵源，作業人員進入潔凈區必須穿戴與潔凈室的空氣潔凈度等級相適應的工作服、口罩等，由于潔凈工作服的透氣性較差，為了保證作業人員的工作環境，提高勞動生產率，在潔凈室生產工藝對環境的溫濕度沒有特殊要求時，潔凈室內的溫濕度主要是考慮作業人員的舒適程度。從生產工藝的角度分析，每個生產線應有不同的控制參數要求，例如，口服固體制劑生產線，主要生產顆粒劑、片劑，其濕度低一些對生產是有利的；從衛生學角度分析，濕度高容易使細菌特別是霉菌滋生繁殖，溫濕度越低越能抑制細菌的繁殖，雖然濕度低易起塵，使細菌擴散，但綜合分析，濕度偏低些還是有利的。43第43頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監

33、測）第十一條 應當對微生物進行動態監測，評估無菌生產的微生物狀況。監測方法有沉降菌法、定量空氣浮游菌采樣法和表面取樣法（如棉簽擦拭法和接觸碟法）等。動態取樣應當避免對潔凈區造成不良影響。成品批記錄的審核應當包括環境監測的結果。對表面和操作人員的監測，應當在關鍵操作完成后進行。在正常的生產操作監測外，可在系統驗證、清潔或消毒等操作完成后增加微生物監測。潔凈區微生物監測的動態標準(1)如下： 潔凈度級別浮游菌cfu/m3沉降菌（）cfu /4小時(2)表面微生物接觸（）cfu /碟5指手套cfu /手套A級1111B級10555C級1005025D級20010050注：（1）表中各數值均為平均值。

34、（2）單個沉降碟的暴露時間可以少于4小時，同一位置可使用多個沉降碟連續進行監測并累積計數。 44第44頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）1、雖然粒子取樣可以用來評價空氣的質量，但是微生物的污染是生產環境最重要因素，它與最終產品的微生物負荷控制相關。雖然在所有生產的最終產品都要求控制微生物污染，但是對于無菌生產過程顯得尤為重要。2、本條款明確在無菌生產過程中應對微生物進行動態監測，微生物監測的方法包括沉降菌法、浮游菌法和表面取樣法。并且環境微生物的動態監測結果必須納入批記錄中作為產品的放行依據之一。45第45頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）3、沉降菌

35、法：作為被動式取樣的沉降碟（平皿直徑一般為90mm），用于環境中沉降菌監測。沉降碟以其價廉、輕便、對空氣環境破壞較小等優點而被廣泛應用于潔凈區的環境監測。不足之處在于它只能作為定性測試，所獲得數據的準確性較差。但是在層流區域，沉降碟不會干擾氣流方向，不失為一種比較好的方法。為了盡可能地獲得可靠數據，沉降菌碟放置時間不宜過短，至少為半小時。一般情況下，將沉降菌碟暴露于被測環境中4小時。應對沉降碟的暴露時間進行確認，以保證暴露后的培養基不會因失水等原因而影響微生物的正常生長。46第46頁，共164頁。4、定量空氣浮游菌采樣法：也叫空氣浮游菌測試，目前常規監測空氣浮游菌的設備有很多類型，有些還有其他

36、功能比如微生物大小分類，在生產車間中使用空氣浮游菌取樣來監測浮游菌污染水平是有意義的，浮游菌采樣儀可以測量已知體積的空氣，使空氣中污染物的量轉化為單位體積的量。目前應用最廣泛的是固體培養基撞擊式浮游菌采樣儀。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）47第47頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）5、表面取樣法：表面微生物監測用來監測生產區域表面以及設備和與產品接觸表面的微生物量，這種監測方法必須要考慮取樣的準確性和代表性，基本的取樣方法包括：接觸碟、擦拭法以及表面沖洗法。每種方法所得的結果均可以用于產品質量評價，測試方法可以定性和定量。而且取樣的準確性受手機和處理樣品的過程影

37、響，所以必須對取樣進行培訓和驗證。接觸碟：容易操作而且可以定量。因此被廣泛使用，適用于憑證的規則性表面進行取樣監測，通常碟子的直徑是50mm的，培養基充滿碟子形成圓頂，取樣面積一般為25cm2。取樣時打開碟蓋，使無菌培養基表面與取樣面直接接觸，均勻按壓接觸碟底板，確保全部瓊脂表面與取樣點表面均勻接觸10秒鐘左右，再蓋上菌碟。取樣后應使用蘸有70%乙醇溶液的無菌擦拭布擦拭被取樣表面，以除去瓊脂殘留。缺點：不適用于非常規表面并且如果培養基太過濕潤，菌落會連片生長導致不易計數。人員衛生監測的方法與接觸菌碟法相同。48第48頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）擦拭法：該方法通常用于

38、不規則表面（尤其是設備內表面）進行取樣。拭子通常為一根棒狀物，其頂端由吸水性材料制成，拭子頭在取樣前應先行浸濕，取樣時手握拭子柄，以30角與取樣表面接觸，緩慢并充分擦拭，取樣面積約25cm2左右（可用特定的無菌模板確定擦拭面積），然后將取樣頭折斷放入上述溶液中（無菌生理鹽水或0.1%的蛋白胨溶液約5ml），充分振蕩，再用平皿涂布法或鋪平板法技術。缺點：取樣和轉移技術可能會影響結果；樣品處理后才能培養。49第49頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）表面沖洗法：該法適用于監測大面積區域內表面的微生物含量，包括設備軌道、儲水罐等。用定量的無菌水沖洗表面，收集淋洗水，用膜過濾法來計

39、算微生物的數量。缺點：適用性不廣，需要額外的操作，取樣和處理過程可能會影響結果。50第50頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）6、取樣點的選擇：常規監測取樣點位選擇主要考慮以下幾點：-在哪些點最有可能造成微生物污染，對產品質量造成不良影響？ 在生產過程中，什么地點最有可能性發生最嚴重的微生物繁殖？ 取樣點選擇是否需要基于網格法?在常規監測中，一些取樣點是否需要更換？哪些取樣點代表了清潔、消毒或滅菌時最不能覆蓋到的地方？在某一點位的太多取樣是否會引起收集的數據不準確或污染產品？對于反應產品的微生物含量有代表性的取樣點必須取樣和進行環境監測。還應考慮環境監測是否會增加產品的污染

40、，例如生產過程中污染的幾率很小，關鍵區域的取樣就不需要。 潔凈區監測的取樣點和取樣量可以比潔凈級別確認時的取樣點和取樣量少，應該通過風險分析研究和對監測結果的分析（至少6個月以上的數據）來確定監測頻次和限度。51第51頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）7、取樣要求：沉降菌：-除受潔凈區的設備限制外，取樣點應在整個潔凈區均勻布置。那些與產品相鄰近的區域，以及可能與產品直接接觸的空氣及設備附近均應考慮增加取樣點和取樣頻次。人員活動頻繁或人員較集中的區域也應考慮增加取樣點和取樣頻次。 取樣點一般布置在距離地面0.81.5m之間或操作平臺的高度。盡量避免在回風口附近取樣，而且測試

41、人員應站在取樣口的下風側。進行動態測試時，單向流區內應以沉降菌測試為主，單向流區域外非單向流區域以浮游菌測試為主。52第52頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）浮游菌：-除受潔凈區的設備限制外，取樣點應在整個潔凈區均勻布置。那些與產品相鄰近的區域，以及可能與產品直接接觸的空氣及設備附近均應考慮增加取樣點和取樣頻次。人員活動頻繁或人員較集中的區域也應考慮增加取樣點和取樣頻次。 取樣點一般布置在距離地面0.81.5m之間或操作平臺的高度。盡量避免在回風口附近取樣（距離1m以上），而且測試人員應站在取樣口的下風側。應根據被測區域的浮游菌控制限度和取樣方式為決定取樣量，通常每點只需

42、取樣一次，在C級以上區域取樣量不得少于500L/次，在D級（包括D級）取樣量不得少于100L/次。53第53頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）表面微生物取樣：-表面微生物取樣點數的確定以考慮潔凈區的大小、設備管路的復雜程度、生產活動的重要性及易污染的部位等。應至少包括如下部位：每扇門、每個門把手、地面、墻壁、公用介質的管路、生產設備的關鍵性部位（如灌裝針、易于人員接觸的隔簾、膠塞桶、傳輸帶等）。即使確定了取樣點，也不宜每次均固定在同一點取樣，而應考慮在取樣點附近不同位置取樣，這樣使測試結果更具代表性。為避免干擾最好在生產活動結束后取樣。 54第54頁，共164頁。附錄1無

43、菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）人員監測：-對無菌生產區的每位工作人員進行每班測試，甚至要對每次更衣進行監測。取樣部位包括手套、操作服的易遭污染部位、鞋套、確認時還應包括頭罩及口罩。手套和操作服表面的微生物監測是人員衛生監測的關鍵。手套監測時還應包括雙手的手指和手掌，操作服表面取樣主要是前臂的袖管、肩前下部等，鞋套的取樣最好在套筒的上面。人員衛生監測時每點取樣面積最好控制在25cm2左右。為避免干擾，最好在生產活動結束時取樣（人員離開無菌生產區前取樣）。55第55頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）第十二條 應當制定適當的懸浮粒子和微生物監測警戒限度和糾偏限度。操作規程中應

44、當詳細說明結果超標時需采取的糾偏措施。1、如果發生偏差時，數據可能會高于設定限度，必須調查發生偏差的原因并制定措施如何防止再次發生，針對環境監測結果超標的偏差調查其目的就是找到導致環境超標的最大可能原因（如污染來源）。2、必須建立系統的處理偏差的方法，必須預先制定調查和糾偏措施的步驟。對于連續或多個超標情況要比單一或單獨的超標采取更進一步的調查/糾偏措施。3、在進行偏差調查前首先應排除實驗室或取樣因素。56第56頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）Environmental Monitoring Systems 無菌室環境監測系統示意圖ENODEReal-Time Stat

45、ion實時工作站Central vacuum system中央真空采集泵Particle sensor 激光粒子傳感器Ethernet Switch網絡交換機Alarms報警器Server服務器T/RH, DP, etc 溫濕度信號 Cleanroom HMI 無菌室操作站Site LAN局域網Network Stations網絡工作站Portable particle counter 便攜式激光粒子計數器Microbial sampler 微生物采樣器Microbial control (valve)微生物控制閥Control & Automation 自動控制信號Microbial mon

46、itoring(flow meter) 微生物監測流量計Portable microbial sampler便攜式微生物采集器57第57頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）潔凈度級別最終滅菌產品生產操作示例C級背景下的局部A級高污染風險(1)的產品灌裝（或灌封）C級1.產品灌裝（或灌封）；2.高污染風險(2)產品的配制和過濾；3.眼用制劑、無菌軟膏劑、無菌混懸劑等的配制、灌裝（或灌封）；4.直接接觸藥品的包裝材料和器具最終清洗后的處理。D級1.灌裝前物料的準備；2.產品配制（指濃配或采用密閉系統的配制）和過濾直接接觸藥品的包裝材料和器具的最終清洗。第十三條 無菌藥品的生產操

47、作環境可參照表格中的示例進行選擇。58第58頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第三章潔凈度級別及監測）注：（1）此處的高污染風險是指產品容易長菌、灌裝速度慢、灌裝用容器為廣口瓶、容器須暴露數秒后方可密封等狀況；（2）此處的高污染風險是指產品容易長菌、配制后需等待較長時間方可滅菌或不在密閉系統中配制等狀況。 59第59頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第四章隔離操作技術）第四章隔離操作技術60第60頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第四章隔離操作技術）第十四條 高污染風險的操作宜在隔離操作器中完成。隔離操作器及其所處環境的設計，應當能夠保證相應區域空氣的質量達到設定標準。傳輸裝置可設計成單門或雙門，也

48、可是同滅菌設備相連的全密封系統。物品進出隔離操作器應當特別注意防止污染。隔離操作器所處環境取決于其設計及應用，無菌生產的隔離操作器所處的環境至少應為D級潔凈區。 1、隔離：采用物理屏障的手段將受控空間與外部環境相互隔絕的技術，是一種絕對隔離，它源于第二次世界大戰。隔離技術的應用主要有3方面的考慮：保護無菌藥品在生產過程中不受交叉污染或外部環境的影響；保護人員遠離高活性、高致敏性和毒性物質的侵害(例如：青霉素類、細胞毒素類、激素類、抗腫瘤類、放射性藥物等藥品)；保護環境免受高活性、高致敏性和毒性物質在無控制的條件下傳播。61第61頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第四章隔離操作技術）62第62頁，

49、共164頁。附錄1無菌藥品（第四章隔離操作技術）2、現代隔離/屏障技術主要分為三類：簡單屏障或分區；限制進入屏障系統（RABS）；隔離式屏障系統（ISOLATOR）。作為隔離器，必須是完全密封的，這樣才便于控制、并處理成無菌狀態。一個完整的操作過程可能需要若干個隔離器組成的系統來完成，從而將整個流程與可能的污染源（如：周圍的設備和操作者）徹底分開。生產環境下的隔離，不外乎兩個原因：保護工藝流程或者保護環境（操作人員）。為了達到不同的目的，調節隔離器內的壓力水平以符合要求，這就是一個關鍵因素。如果需要保護環境及工作人員，則隔離器內應一直保持負壓狀態，這樣即便隔離器出現微小的泄露，有害物質也不會泄

50、出；而保護工藝流程時，隔離器應當保持正壓狀態。63第63頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第四章隔離操作技術） 隔離器是一個完全密閉的環境，可對潛在的污染源進行控制（通過高效過濾器、傳遞裝置等），也同時對人員進行了隔離。為了達到這個目的，通過使用強制通風系統來維持隔離器艙內艙外的壓差（根據需要來進行調節為正壓或者負壓），氣流保持湍流就足以維持無菌或者安全的狀態或者環境。（非單向流及單向流）特定情況下，單向流（產生和維持成本很高）的用處很大，可以保證重點區域中的顆粒被快速清除（一個方向上），例如，在隔離器內的操作者需使用一些材料或者機械性工具，而這些材料或工具在使用過程中可能會產生顆粒，從而污染操

51、作過程。64第64頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第四章隔離操作技術）項目傳統潔凈室無菌隔離技術消毒/滅菌方法消毒劑擦拭熏蒸紫外線照射方法，受空間等諸多因素影響，效果難以驗證。自動氣體滅菌器滅菌,省時省力，氣體分布均勻，效果較好容易驗證。潔凈環境的控制易受人員物料等諸多因素影響，易受污染難以控制。與外界完全隔離，僅通過HEPA進行氣體交換，并可恒定艙內壓力以阻絕外界污染。物料傳遞易造成環境污染直接和滅菌器連接對操作人員的防護取決于操作人員自身安全人員進出需要復雜的換鞋更衣程序僅通過戴手套穿半身工作服即可運行所需能耗高低誤操作導致的無菌污染的風險大可能性極小操作和維護成本高低3、無菌隔離技術與傳

52、統潔凈室的對比：65第65頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第四章隔離操作技術）第十五條 隔離操作器只有經過適當的確認后方可投入使用。確認時應當考慮隔離技術的所有關鍵因素，如隔離系統內部和外部所處環境的空氣質量、隔離操作器的消毒、傳遞操作以及隔離系統的完整性。1、隔離系統用于無菌生產和試驗之前必須得到驗證。目前歐洲和美國藥典的無菌檢查法均已收載隔離系統及其驗證方法，中國藥典自2005版無菌檢查法也已經收載了無菌隔離系統。2、確認隔離系統以及所有相關設備是否使用的驗證分為三個階段進行：安裝確認（IQ）、運行確認（OQ）和性能確認（PQ）。66第66頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第四章隔離操作技術

53、）67第67頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第四章隔離操作技術）第十六條 隔離操作器和隔離用袖管或手套系統應當進行常規監測，包括經常進行必要的檢漏試驗。1、手套和袖管是隔離器完整性測試中的一個重要部分，因為手套是唯一可能接觸到無菌容器和物料的部分，然而在使用過程中有時即使使用壓降試驗合格，手套上也有可能存在難以發現的極微小的破洞，這樣就有必要定期專門檢查手套的完整性，現在國外有專門手套測漏儀，操作人員應確保在最接近實際使用情況的條件下用測漏儀監測手套。68第68頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第五章吹灌封技術）第五章吹灌封技術69第69頁，共164頁。第十七條 用于生產非最終滅菌產品的吹灌封設

54、備自身應裝有A級空氣風淋裝置，人員著裝應當符合A/B級潔凈區的式樣，該設備至少應當安裝在C級潔凈區環境中。在靜態條件下，此環境的懸浮粒子和微生物均應當達到標準，在動態條件下，此環境的微生物應當達到標準。用于生產最終滅菌產品的吹灌封設備至少應當安裝在D級潔凈區環境中。 1、什么是BFS？應用于醫藥行業的吹灌封三合一(BFS)技術(BlowFillSeal)是一種無菌包裝技術是一套專用的機械設備，連續操作，從一個熱塑顆粒吹制成容器至灌裝和密封，整個過程由一臺前自動設備完成。用于無菌生產的吹灌封設備本身裝有A級風淋裝置，在操作人員按A/B級區要求著裝的條件下，該設備可安裝在C級環境中。靜態條件下，此

55、環境微粒和微生物均應達到標準，在動態條件下，此環境的微生物應達到標準，用于生產最終滅菌產品的吹灌封設備至少應當安裝在D級潔凈區環境中。附錄1無菌藥品（第五章吹灌封技術）70第70頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第五章吹灌封技術）2、吹灌封設備可全自動運行，縮短了停機時間，整臺設備的運行理念是盡可能地減少人員操作，從而減少管理成本，提高設備運行穩定性。每臺設備一般都將在線清洗（CIP）和在線滅菌（SIP）整合在系統中，大大增加了設備的生產工作時間，提高了機器運轉效率。71第71頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第五章吹灌封技術）第十八條 因吹灌封技術的特殊性，應當特別注意設備的設計和確認、在線清潔

56、和在線滅菌的驗證及結果的重現性、設備所處的潔凈區環境、操作人員的培訓和著裝，以及設備關鍵區域內的操作，包括灌裝開始前設備的無菌裝配。1、對吹灌封技術的驗證要求，這里不再詳細說明。72第72頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第六章人員）第六章人員73第73頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第六章人員）第十九條 潔凈區內的人數應當嚴加控制，檢查和監督應當盡可能在無菌生產的潔凈區外進行。1、人員是最大的污染源，控制無菌生產區的人數非常關鍵，盡量減少進入無菌區（甚至包括整體潔凈區）的人數，這個數量應能保持工作需要的最低人數，檢查和控制工作盡可能在潔凈區外面進行，輔助工作人員盡量靠單向流區域的外側，生產無關

57、的人員盡量不進入潔凈區，進入無菌區的人數應通過驗證來確定。74第74頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第六章人員）第二十條 凡在潔凈區工作的人員（包括清潔工和設備維修工）應當定期培訓，使無菌藥品的操作符合要求。培訓的內容應當包括衛生和微生物方面的基礎知識。未受培訓的外部人員（如外部施工人員或維修人員）在生產期間需進入潔凈區時，應當對他們進行特別詳細的指導和監督。1、所有無菌藥品生產應該由經培訓的人員操作。無菌藥品生產的管理者應有相關的知識，在無菌藥品的制備中有實際經驗和理論知識，在微生物學方面經過適當的培訓。2、所有與無菌藥品生產的相關人員都應該完全意識到偏離了驗證規程可能對產品和病人帶來的風險

58、。3、無菌分裝崗位的操作人員的無菌操作技能，無菌生產過程可能發生的停機故障處理方法（維修和清潔）應通過無菌工藝模擬試驗來進行確認。75第75頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第六章人員）4、無菌生產直接相關人員的培訓內容應包括但不限于：藥品生產質量管理規范（GMP）；無菌操作技術；潔凈室行為；微生物學；衛生學；穿潔凈衣的技術；接觸法取樣；無菌生產過程污染控制；受微生物污染的藥物對病人安全的危害；關鍵工藝特性；無菌生產過程的相關工藝規程和SOP；76第76頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第六章人員）5、對于進入無菌關鍵區域的人員必須接受嚴格的培訓，培訓包括理論知識和現場實踐。培訓可以從實施非關鍵操

59、作開始，所從事的非關鍵操作同樣必須在授權人員的監督之下，經過一段時間的實踐后，通過無菌模擬試驗對這些人員進行關鍵技術確認和無菌考核，考核通過這些人員才能被允許在關鍵區域獨立進行關鍵操作。6、無菌生產部門的管理人員應該對潔凈區和潔凈區設施的相關內容有所理解，對部門所屬的特殊設計如凈化空調系統、HEPA過濾器的位置和級別、工作臺類型、隔離器設計等有詳盡的知識。7、只有經過批準，經過專門培訓的人員方可進入無菌生產區內，無論何時均應遵守這個原則，例如非無菌操作區的人員或外來參觀者需進入操作區時，必須經過有關部門的批準，并由無菌區的經培訓的操作人員指導并監督其著裝是否合適，是否按照相關規定執行，生產期盡

60、量避免外來人員進入無菌生產區。77第77頁，共164頁。附錄1無菌藥品（第六章人員）8、進入無菌區所有人員應具備良好的行為規范以最大限度降低污染發生的可能，包括：盡量減少進入潔凈區的人數和次數。人員在進入無菌區前應用無菌的消毒劑消毒雙手，待消毒劑揮發干后方可進入無菌區。 僅用無菌工具接觸物料。 緩慢和小心移動。快速移動會在關鍵區域產生紊流，從而破壞單向流，緩慢和小心移動是在無菌區工作始終遵循的基本原則。動作應盡量平緩，盡量避免下蹲動作，更不應該躺在地面或坐在地面上。如果因為維修不可避免這些動作時，維修后應立即更換潔凈服避免交叉污染。保持整個身體在單向流通道外，以避免破壞單向流造成產品污染。78