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文檔簡介

1、PBMCs的分離和計數 實驗目的和要求掌握PBMC(Peripheral blood mononuclear cell)分離的方法掌握細胞計數的方法 實驗原理 外周血中細胞種類 細胞密度 紅細胞和多核白細胞 1.092-1.093 PBMC(淋巴細胞和單核細胞) 1.074 淋巴細胞分離液：Ficoll-Hypague 1.077密度梯度離心法：利用一種密度介于1.075-1.092之間而近于等滲的溶液做密度梯度離心，使一定密度的細胞按相應密度梯度分布，從而將各種細胞加以分離。 實驗方案抽取外周血分離PBMCs 細胞計數 實驗材料1. 肝素抗凝血2. Hanks液3. 淋巴細胞分離液4. 水平

2、離心機5. 顯微鏡6. 細胞計數板實驗步驟肝素抗凝靜脈血1-1.5 ml加等體積的Hanks液稀釋置于2ml淋巴細胞分離液上(交界液面：一定不要打亂)稀釋后的抗凝血淋巴細胞分離液用Hanks液洗、離心(1500 rpm，5min) 重復2次血漿分層液紅細胞粒細胞離心（2000rpm，25min）PBMCs層細胞計數板細胞計數數上不數下，數左不數右。用100ulHanks液重懸細胞取10ul細胞懸液+40ul Hanks液+50ul臺盼蘭, 混勻 取10ul于細胞計數板上進行細胞計數細胞計數實驗結果計算22個大方格內細胞總數單個核細胞濃度（細胞數/ml)104稀釋倍數=活細胞百分率=活細胞數細胞總數100%細胞活力檢測：（臺盼蘭染色：死細胞被染成藍色，活細胞不著色） 細胞數量： 純度在90%以上 淋巴細胞約占90-95% 細胞收獲率可達80-90% 活細胞百分率在95%以上密度梯度離心法分離PBMCs： 注意事項 稀釋的肝素抗凝血，沿管壁輕輕疊加于分離液上，使兩者

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