1、HLAB27檢測及其臨床應用強制性脊柱炎強制性脊柱炎ASl強制性脊柱炎強制性脊柱炎（AS）是一種主要累及脊柱，中軸骨和四肢大關節，以椎間盤纖維環及其附近結締組織纖維化和骨化及關節強直為病變特點的慢性炎癥。其特征是病變從骶髂關節開始，逐步上升蔓延至脊柱關節，造成骨性強直。病理變化病理變化l本病早期病理變化為肌腱，韌帶骨附著點炎，也可發生一定程度的滑膜炎癥，常以骶髂關節發病最早，以后可發生關節粘連，纖維性和骨性強直，組織學改變為關節囊，肌腱，韌帶的慢性炎癥，伴有淋巴細胞，漿細胞浸潤，這些炎性細胞成團分布于較小的滑膜血管周圍。l骶髂關節炎骶髂關節炎是強直性脊柱炎的病理標志，也常是其最早的病理表現之一

2、，骶髂關節炎的早期病理變化包括軟骨下肉芽組織形成，組織學上可見滑膜增生和淋巴樣細胞及漿細胞聚集，淋巴樣濾泡形成以及含有IgG，IgA和IgM的漿細胞，骨骼的侵蝕和軟骨的破壞隨之發生，然后逐漸被退變的纖維軟骨替代，最終發生骨性強直，脊柱的最初損害是椎間盤纖維環和椎骨邊緣連接處的肉芽組織形成，纖維環外層可能最終被骨替代，形成韌帶骨贅，進一步發展將形成X線所見的竹節樣脊柱。AS的檢查的檢查l體格檢查 l影像學檢查 早期表現為骶髂關節炎，可根據疾病不同時期選擇X線，CT,MRI檢查。l實驗室檢查 活動期可有ESR,CRP,PLT和血清IGA升高，類風濕因子陰性 90%患者HLA-B27陽性7HLA-B

3、27HLA-B27檢測及其臨床應用檢測及其臨床應用什么是HLA及HLA-B27MHC、HLA，HLA-B27HLA-B27與哪些疾病相關血清陰性脊柱關節病 類型及特點強直性脊柱炎 特點及其與B27關聯機制HLA-B27 怎么檢測MLCT、FCM、PCR-SSP8HLA相關概念相關概念主要組織相容性抗原主要組織相容性復合體（ MHC 類)：H-2 SLA HLAMHC、HLA復合體基因MHC分子、HLA分子抗原HLA：人類白細胞抗原（ Human Leukocyte Antigen）lHLA抗原是人類主要組織相容性復合體（Major Histocompatibity Complex， MHC）的

4、表達產物，在免疫系統中主要負責細胞之間的相互識別和誘導免疫反應，調節免疫應答的功能。根據HLA抗原結構，功能與組織分布的不同，可分為三類：類分子為HLA-A、-B、-C系列抗原，廣泛分布于各組織有核細胞表面，包括血小板和網織紅細胞，成熟的紅細胞一般不含HLA抗原；類分子為HLA-D/DR、-DP、-DQ系列抗原，主要在B細胞和抗原提呈細胞上表達，這兩類抗原都與移植有關，其中類抗原更為重要；類分子為補體成分。lHLA-B27基因屬于型MHC基因，基本上表達在機體中所有含核的細胞上，尤其是淋巴細胞的表面有豐富的含量l早在二十多年前，人們就已發現HLA-B27抗原的表達與強直性脊椎炎有著高度相關性，

5、超過90%的強直性脊椎炎患者其HLA-B27抗原表達為陽性，普通人群中僅5-10%的為陽性，而強直性脊椎炎由于其癥狀與許多疾病相似而難以確診，因此HLA-B27的檢測在病情的診斷中有著重要意義。 11HLA-B27相關疾病相關疾病 疾病HLA-B27陽性率(%)強直性脊椎炎90銀屑病性關節炎 55Reiters綜合癥37反應性關節炎沙門氏菌感染29.7志賀氏菌感染20.7耶爾森氏菌感染17.6淋病雙球菌感染14.0正常人群 2712HLA-B27相關疾病：強直性脊柱相關疾病：強直性脊柱炎炎患病率：0.3%，20-30歲，男女比例 10:1，有家族傾向；主要侵犯：中軸關節（骶髂關節、脊柱骨突、脊

6、柱旁軟組織）可伴發外周關節及關節外表現，嚴重者發生脊柱畸形和關節強直B27檢測可作為有相關癥狀或高危人群AS早期的篩選方法！AS不是RA的一種特殊類型！強直性脊柱炎強直性脊柱炎類風濕性關節炎類風濕性關節炎地區分布種族差異大世界性性別分布男女女男年齡20-3030-50家族史明顯不明顯類風濕因子（）（）13HLA-B27陰性的AS約5-10%的AS患者為HLA-B27陰性AS患者的HLA-B27陽性率達90-95%我國漢族人群HLA-B27陽性率2-7%（3千萬-1億），AS患病率為0.3%（4百萬），大部分HLA-B27陽性者并不發生AS。HLA-B27與與AS14HLA-B27與與AS健康人

7、群HLA-B27陽性率及AS患病率各地區、種族有顯著的差異HLAB27與強直性脊柱炎的發病有很強的相關性兩種錯誤認識需糾正：HLA-B27陽性AS！ HLA-B27陽性不會轉陰！15HLA-B27與與AS的關聯機制的關聯機制連鎖不平衡學說分子模擬學說關節源性肽假說其他：T細胞受體庫假說超抗原假說B27修飾因子假說Cys67模型張谷香醫學綜述，2012,18(4):498-501HLA基因座位的等位基因和真正的疾病易感基因處于緊密連鎖不平衡，而HLA基因本身并不是引起疾病的真正基因，僅僅是遺傳標志。B27抗原與某些G（-）菌之間存在類似的分子結構，能發生分子模擬或交叉反應，機體免疫系統把B27當

8、作病原體抗原產生免疫應答，對機體產生免疫損害。認為關節源性肽只存在于關節組織中，特異性地由HLAB27提呈，正常情況下遞呈水平低，反應T細胞處于耐受狀態；當某些具有同源結構蛋白的病毒或細菌感染時，則可致敏耐受的T細胞，從而識別以低水平遞呈的關節源性肽，引起自身免疫反應而損傷組織。lAS發病原因機制目前尚未完全闡明，大多數學者認為其與遺傳，感染，免疫，環境因素等有關。 17HLA-B27檢測方法檢測方法抗原水平微量細胞毒法 流式細胞術法 基因水平PCR-SSP 18微量細胞毒法（微量細胞毒法（MLCT）原理：如果受試者淋巴細胞表面表達有相應的HLA-B27抗原，就可以與B27抗體結合，形成Ag-

9、Ab復合物激活補體，發生對細胞膜的破壞及細胞殺傷作用，通過染色法觀察，死細胞的細胞膜通透性改變，染料能夠進入使之著色，而活細胞細胞膜完整不被染色。根據死細胞占全部細胞的百分比，可以判斷受試者淋巴細胞表面是否存在HLA-B27抗原及其與抗體的反應強度。優點：不需特殊儀器設備，易于操作，一般的實驗室都可開展。缺點：標本存放不能超過8小時；感染可以使細胞膜表面的B27分子的數量或結構改變，影響MLCT的結果，易出現假陰性。J.Kirveskari, et al. British Journal of Rheumatology, 1997,36:185-18919流式細胞術法流式細胞術法利用熒光標記的

10、HLA-B27單克隆抗體，與細胞表面的B27抗原結合，使結合后的淋巴細胞具有一定的熒光強度，這種熒光強度可由流式細胞儀測得的通道值來反映，以其值的高低判斷HLA-B27抗原表達百分比，從而判斷HLA-B27是否陽性。優點：全自動儀器檢測，減少了人為因素的影響，重復性高，結果判斷準確，為目前較為理想的方法，目前已將FCM法檢測HLA-B27作為AS 診斷的常規檢測方法。缺點：儀器昂貴，目前只在較大醫院應用，且熒光易淬滅。Levering WH，et al. JCytometry B Clin Cytom，2003,54(1):28-3820PCR-SSP通過設計基因序列特異的引物SSP，特異性的擴增出標本中的HLA-B27基因片段，以瓊脂糖凝膠電泳分析PCR擴增產物，若出現目的條帶則表示HLA-B27為陽性。優點：基因水平的檢測 直接對HLA-B27原基因進行擴增分型，靈敏度高，特異性強。缺點：耗時長，需要跑電泳，需要特定的實驗儀器及嚴格的實驗條件，在臨床上普遍開展此項檢查有一定的難處。Olerup OTissue A