1、1酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme Linked Immunosorbsent Assay,ELISAEnzyme Linked Immunosorbsent Assay,ELISA）2免疫標(biāo)記技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù) 將已知將已知抗體抗體或或抗原抗原標(biāo)記上標(biāo)記上易示蹤易示蹤物質(zhì)物質(zhì)（如酶、熒光素、放射性同位素、（如酶、熒光素、放射性同位素、膠體金等），通過檢測(cè)標(biāo)記物來反映膠體金等），通過檢測(cè)標(biāo)記物來反映有無抗原抗體反應(yīng)，從而測(cè)出微量的有無抗原抗體反應(yīng)，從而測(cè)出微量的抗原或抗體。抗原或抗體。3酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理 利用標(biāo)記技術(shù)將利用標(biāo)記技術(shù)將酶酶標(biāo)記到標(biāo)記到抗體（抗原

2、）抗體（抗原）上，上，使待檢物中相應(yīng)的抗原（抗體）與酶標(biāo)記抗體使待檢物中相應(yīng)的抗原（抗體）與酶標(biāo)記抗體（抗原）發(fā)生特異性反應(yīng)。在遇到相應(yīng)的酶底（抗原）發(fā)生特異性反應(yīng)。在遇到相應(yīng)的酶底物時(shí)，酶分解底物，生成有顏色的產(chǎn)物。根據(jù)物時(shí)，酶分解底物，生成有顏色的產(chǎn)物。根據(jù)顏色的深淺顏色的深淺, ,可以判斷待檢物中有無特異的抗原可以判斷待檢物中有無特異的抗原（抗體）以及量的多少。檢測(cè)方法有直接法、（抗體）以及量的多少。檢測(cè)方法有直接法、間接法、雙抗體法和抗原競(jìng)爭(zhēng)法。間接法、雙抗體法和抗原競(jìng)爭(zhēng)法。 4 直接直接ELISA 間接間接ELISA 雙抗體夾心法雙抗體夾心法包被包被(未知抗原）未知抗原） 加入酶標(biāo)抗

3、體加入酶標(biāo)抗體洗板洗板 加底物加底物加終止液加終止液包被包被(已知抗原）已知抗原）加入待檢標(biāo)本加入待檢標(biāo)本（未知抗體）（未知抗體）加入酶標(biāo)第二抗體加入酶標(biāo)第二抗體抗抗體抗抗體洗板洗板加底物加底物加終止液加終止液包被包被(已知抗體）已知抗體）加入待檢標(biāo)本加入待檢標(biāo)本（未知抗原）（未知抗原）加入酶標(biāo)抗體加入酶標(biāo)抗體洗板洗板加底物加底物加終止液加終止液原理示意圖原理示意圖6人血清人血清IgG抗體的檢測(cè)抗體的檢測(cè) 直接直接ELISA法法測(cè)定原理：測(cè)定原理： 將待檢標(biāo)本包被反應(yīng)板，再加入酶標(biāo)羊抗將待檢標(biāo)本包被反應(yīng)板，再加入酶標(biāo)羊抗人人IgG抗體。當(dāng)標(biāo)本中存在抗體。當(dāng)標(biāo)本中存在IgG時(shí)，該抗體與包時(shí)，該抗

4、體與包被被IgG結(jié)合，最后形成結(jié)合，最后形成IgG-酶標(biāo)羊抗人酶標(biāo)羊抗人IgG抗體抗體復(fù)合物，加入底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)。復(fù)合物，加入底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)。7包被：包被：用包被緩沖液將純化抗體做用包被緩沖液將純化抗體做10倍稀釋，在每個(gè)倍稀釋，在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml稀釋液，稀釋液，4過夜。過夜。加酶標(biāo)抗體：加酶標(biāo)抗體：每孔加入稀釋至工作濃度的酶每孔加入稀釋至工作濃度的酶標(biāo)抗體標(biāo)抗體100l，37孵育孵育1h。洗滌：洗滌：用洗滌液洗滌用洗滌液洗滌3次，每次次，每次3min，甩凈，拍干。，甩凈，拍干。洗滌：洗滌：手工洗板，棄液拍干，重復(fù)手工洗板，棄液拍干，重復(fù)5次次加底物顯色：加底物顯色：每孔加底物液每孔加底物液50l，置，置37孵育孵育15min。終止反應(yīng)：終止反應(yīng)：每孔加入每孔加入50l的的