1、微生物的利用微生物的利用微生物所需的營養物質微生物所需的營養物質1、碳源：、碳源：能為微生物提供生長繁殖所需碳元素的營養物質能為微生物提供生長繁殖所需碳元素的營養物質COCO2 2、NaHCONaHCO3 3、糖類、脂肪酸、花生餅、石油等、糖類、脂肪酸、花生餅、石油等有些碳源還是異養微生物是能源物質有些碳源還是異養微生物是能源物質能為微生物提供所需氮元素的營養物質能為微生物提供所需氮元素的營養物質2、氮源：、氮源：分子態氮、氨、銨鹽、硝酸鹽、尿素、牛肉膏、蛋白胨等分子態氮、氨、銨鹽、硝酸鹽、尿素、牛肉膏、蛋白胨等對異養微生物，含對異養微生物，含C C、H H、O O、N N的化合物既是碳源，又

2、是的化合物既是碳源，又是氮源氮源3、無機鹽：、無機鹽：4、水：、水：注意：注意： 培養基還需要滿足微生物生長對培養基還需要滿足微生物生長對PH、特殊營養物質（維生素）及氧氣。特殊營養物質（維生素）及氧氣。1 1、培養基的營養成分培養基組分培養基組分含量含量提供的主要營養提供的主要營養牛肉膏牛肉膏5g5g蛋白胨蛋白胨10g10gNaClNaCl5g5g水水定容至定容至1000ml1000ml1000ml1000ml牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨培養基的營養構成培養基的營養構成碳源、磷酸鹽、維碳源、磷酸鹽、維生素、氮源生素、氮源氮源、碳源、維生素氮源、碳源、維生素無機鹽無機鹽氫、氧元素氫、氧元素培養基培

3、養基2、培養基的類別、培養基的類別按培養基的化學成分按培養基的化學成分天然培養基天然培養基合成培養基合成培養基按培養基制成后的形式按培養基制成后的形式（根據物理性質）（根據物理性質）液體培養基（用于擴大培養）液體培養基（用于擴大培養）固體培養基（分離純化）固體培養基（分離純化）按培養基使用的用途按培養基使用的用途選擇培養基選擇培養基鑒別培養基鑒別培養基選擇培養基是在培養基中加入某種選擇培養基是在培養基中加入某種化學物質化學物質，以以抑制抑制不需要的微生物的生長，不需要的微生物的生長，促進促進所需要的所需要的微生物的生長微生物的生長如需要霉菌和酵母菌是，可加入青霉素，抑制細如需要霉菌和酵母菌是，

4、可加入青霉素，抑制細菌、放線菌的生長。菌、放線菌的生長。加入高濃度的食鹽可抑制多種細菌的生長，但不加入高濃度的食鹽可抑制多種細菌的生長，但不影響金黃色葡萄球菌的生長影響金黃色葡萄球菌的生長鑒別培養基是根據微生物的代謝特點，在培養基中鑒別培養基是根據微生物的代謝特點，在培養基中加入加入某種某種指示劑或化學藥品指示劑或化學藥品配制而成的，用以配制而成的，用以鑒別鑒別不同種類的不同種類的微生物微生物。如在培養基中加入伊紅和美藍，可用來鑒別飲用如在培養基中加入伊紅和美藍，可用來鑒別飲用水和乳制品中是否存在大腸桿菌等細菌。如有大水和乳制品中是否存在大腸桿菌等細菌。如有大腸桿菌，其代謝產物（有機酸）就與伊

5、紅和美藍腸桿菌，其代謝產物（有機酸）就與伊紅和美藍結合，使菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤結合，使菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤微生物培養的無菌技術微生物培養的無菌技術無菌操作泛指無菌操作泛指在培養微生物的操作中，所有防止雜菌在培養微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。污染的方法。1、實驗室常用的消毒和滅菌方法、實驗室常用的消毒和滅菌方法滅菌滅菌：利用強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生：利用強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子。物，包括芽孢和孢子。消毒消毒：用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體：用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內部一部分對人體有害的微生物（不包括表面或

6、內部一部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。芽孢和孢子）。消毒不一定能達到滅菌的要求，而滅菌則可達到消消毒不一定能達到滅菌的要求，而滅菌則可達到消毒的目的。毒的目的。2、實驗室常用的消毒和滅菌方法、實驗室常用的消毒和滅菌方法化學藥劑消毒化學藥劑消毒 如酒精擦雙手如酒精擦雙手紫外線消毒紫外線消毒煮沸消毒法煮沸消毒法巴氏消毒法巴氏消毒法灼燒滅菌灼燒滅菌干熱滅菌干熱滅菌高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌常見消毒方常見消毒方法：法：常見滅菌方常見滅菌方法：法：大腸桿菌培養和分離純化的基本操作程序大腸桿菌培養和分離純化的基本操作程序1、配制培養基配制培養基2 2、滅菌（、滅菌（1Kg1Kg，滅菌，滅菌15m

7、in15min）3、倒平板倒平板（冷卻到冷卻到50左右）左右） 注意事項注意事項4、分離分離 注意事項注意事項5、菌種的保存、菌種的保存冰箱保存冰箱保存甘油管藏甘油管藏制備制備LBLB培養基培養基（牛肉膏蛋白胨培養基牛肉膏蛋白胨培養基）（適合細菌生長）（適合細菌生長）2.2.調調pHpH：pH6pH6.5-7.55-7.53.3.分裝：分裝過程中注意不要使培養基沾在分裝：分裝過程中注意不要使培養基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。一半為宜。5.5.加塞加塞6.6.

8、包扎包扎1.1.計算、稱量、溶化、定容計算、稱量、溶化、定容為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養基。培養基。平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？在倒平板的過程中，如果不小心將培養基濺在在倒平板的過程中，如果不小心將培養基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養微生物嗎？為什么？養微生物嗎？為什么？平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以

9、使基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養基表面的水分更好地揮發，又可以防止皿蓋培養基表面的水分更好地揮發，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染。上的水珠落入培養基，造成污染。空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養基上滋生，因此最好不要用這個平板培養微生基上滋生，因此最好不要用這個平板培養微生物。物。細菌的分離（接種方法）細菌的分離（接種方法）平板劃線法平板劃線法固體培養基上劃線分離固體培養基上劃線分離稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法將菌液稀釋將菌液稀釋1010-5-5-10-10-7-7倍倍固固體培養基上涂布體培養基上涂布0.2ml 0.2m

10、l 優點：方法簡單優點：方法簡單優點：單菌落更易分開優點：單菌落更易分開為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環？在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環嗎？種環？在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環嗎？為什么？為什么？操作的第一步灼燒接種環是為了避免接種環上可能存操作的第一步灼燒接種環是為了避免接種環上可能存在的微生物污染培養物；在的微生物污染培養物；每次劃線前灼燒接種環是為每次劃線前灼燒接種環是為了殺死上次劃線結束后，接種環上殘留的菌種，使下了殺死上次劃線結束后，接種環上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環上的菌種直接來源于上次劃線的一次劃

11、線時，接種環上的菌種直接來源于上次劃線的末端，末端，從而通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌種從而通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌種的數目逐漸減少，以便得到菌落。的數目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結束后灼燒接劃線結束后灼燒接種環，能及時殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污種環，能及時殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者。染環境和感染操作者。在灼燒接種環之后，為什么要等其冷卻后再進在灼燒接種環之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？行劃線？以免接種環溫度太高，殺死菌種。以免接種環溫度太高，殺死菌種。在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的