1、窗體頂端窗體底端窗體頂端窗體底端%name% 普通生物化學第一章導論重點:生物化學的概念、研究內容；生物化學與其他學科的關系。第一節 生命、細胞和生物分子一、生物分子生物分子是含碳化合物碳能形成四個共價鍵與自身形成共價鍵與H、O、N形成共價鍵被鍵合碳原子周圍四個共價鍵的四面體性質便于碳形成線性、有分支的或環狀的化合物， H、O、N的參與更擴大其多樣性。生物分子是分級的代謝物和大分子前體物：水、二氧化碳和三種無機氮化合物代謝物：簡單有機物細胞能量轉化和合成大分子的構件時的中間物構件：小分子化合物大分子：構件分子通過共價鍵構成超分子復合物：一類或幾類大分子中不同成員相互作用聚集形成具重要亞細胞功能

2、的特殊裝配體。細胞器膜二、細胞是生命的基本單位三、生物分子的特性方向性某些生物大分子是信息分子具特征性結構非共價作用力維持生物大分子的結構結構互補性影響生物分子的相互作用和生命狀態生命活動限制在窄小環境范圍內第三節 生物化學與其他學科的關系（一）生物化學的概念、研究內容概念：生物化學(Biochemistry)：研究生命現象化學基礎的一門科學。研究內容： 靜態生物化學：構成生物體的基本物質的結構、性質及結構與功能的關系。動態生物化學：生物體基本化學成分在生命活動過程中的化學變化規律。信息生物化學：核酸生物合成，蛋白質生物合成，物質代謝與基因表達的調控等。 現代生物化學與分子生物學研究的重點和熱

3、點：功能基因組學（functional genomics）；蛋白質組學（proteomics）；細胞信號轉導（signal transduction）等。（二）生物化學的研究發展簡史準備和醞釀階段（18c中期-20c初）：研究生物體的化學組成建立與發展階段(20c初-20c中葉)：重要分子的發現和物質代謝途徑的確定深入發展階段(20c中葉-20c末)：分子生物學時期黃金時期（本世紀初）：后基因組時期我國科學家的貢獻：1965年，結晶牛胰島素：1981年，酵母丙氨酰tRNA：人類基因組計劃（1%）等等。（三）生物化學與其他學科的關系化學是學習生物化學的基礎課程。隨著生物學研究深入，物理學、數學及

4、信息學也滲透到生物化學中。生物化學是生物學各學科的最基礎的學科，生物化學的進步極大地推動了生物學各學科的發展。分子生物學（Molecular Biology）：從分子水平認識和研究生命現象的科學，是生物化學學科的重要組成部分。生物化學是醫學的一門重要基礎課程，為其提供必要的理論基礎生物化學是食品學的一門基礎課程，為其提供必要的理論基礎。（四）學習內容靜態生物化學：蛋白質、酶、維生素、核酸動態生物化學：糖類、脂類、蛋白質、核酸代謝信息生物化學：核酸生物合成，蛋白質生物合成，物質代謝與基因表達調控 小結：生物化學的概念、研究內容；生物化學與其他學科的關系。 第二章、第三章蛋白質化學重點：

5、蛋白質組成、結構、性質及蛋白質的結構與功能的關系；蛋白質的分離、純化和鑒定。蛋白質重要性：是構成生物體的基本成分，生命活動的執行者,生命的物質基礎。蛋白質的生物學功能：生物催化；代謝調節；免疫保護；物質轉運和貯存等。蛋白質的分類：按組成分類：單純蛋白質和結合蛋白質按肽鏈數目分類：單體蛋白質和寡聚或多體蛋白質按功能分類:非活性蛋白和活性蛋白按溶解度分類：可溶性蛋白質、醇溶性蛋白質和不溶性蛋白質按分子形狀分類：纖維狀蛋白質、球狀蛋白質和膜蛋白。(一)蛋白質的結構一、蛋白質的元素組成：C（5055%）、H（68%）、O（2023%）、N（1518%）、 S（04%）、P、I、Se等，特點：氮元素的含

6、量平均約16%凱氏（Kjadehl）定氮法二、蛋白質的結構單位 氨基酸 (amino acid)蛋白質氨基酸：編碼氨基酸（標準或基本氨基酸：20種）和非編碼氨基酸1、氨基酸的結構通式：結構特點：（1）C結合（-NH3+）、（-COOH）、H原子和各種側鏈（R）（Pro除外）；（2）C是不對稱C，具有手性（Gly除外），蛋白質氨基酸都是L-型。2、氨基酸的分類：來源；營養學；側鏈（R）。根據R的化學結構：（1）脂肪族氨基酸：Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Met、Cys、Arg、Lys、Asp、Glu、Asn、Gln、Ser、Thr；（2）芳香族氨基酸：Phe、Tyr；（3）雜環氨基酸：

7、Trp、His；（4）雜環亞氨基酸：Pro。根據R的極性：（1）非極性、疏水性氨基酸：R為烴基、苯甲基等；（2）極性、中性氨基酸：R為羥基、巰基、酰胺基等；（3）極性、酸性氨基酸；（4）極性、堿性氨基酸。胱氨酸和二硫鍵3.氨基酸的理化性質(1).一般物理性質：無色或白色結晶，熔點>200，不同味道；均可溶于強酸、強堿和水，不溶于有機溶劑。(2).兩性電離性質：氨基酸分子帶有能解離出質子的NH3+正離子和能接受質子的COO-負離子。結合或釋放質子取決于環境pH。等電點（pI：Isoelectric point)：在一定pH環境下，氨基酸游離成陰、陽離子的程度及趨勢相等或為兼性離子(Zwit

8、terion)，氨基酸溶液的凈電荷為零在電場中既不向陽極也不向陰極遷移時的pH值。    等電點的確定：酸堿滴定（滴定曲線）；    根據pK值（等電點等于兩性離子兩側pK值的算術平均數）。側鏈不含離解基團的中性氨基酸：pI = (pK1 + pK2 )/2 側鏈含有可解離基團的氨基酸：酸性氨基酸：pI = (pK1 + pKR-COO- )/2 堿性氨基酸：pI = (pK2 + pKR-NH2 )/2 (3).紫外吸收性質：20種氨基酸可見光區：都沒有光吸收遠紫外區(<220nm)：均有光吸收近紫外區(220-300nm)： 酪氨酸、苯丙氨酸和

9、色氨酸有光吸收Trp、Tyr和Phe含共軛雙鍵苯環，280nm處有最大吸收峰。分光光度法：測定蛋白質的含量，也可粗略估計核酸中蛋白質污染程度(A260/A280 <1.7)(4).化學性質:-NH2、-COOH和R側鏈的活性基團可發生相關化學反應。 1）-NH2發生的化學反應與甲醛反應:-NH2與甲醛反應生成二羥甲基氨基酸。甲醛滴定法與2,4-二硝基氟苯(DNFB或FDNB)反應：Sanger反應，-NH2的H原子被烴基取代生成黃色DNP-氨基酸（二硝基苯基氨基酸）。烴基化反應，用于N端分析。與5-二甲氨基萘磺酰氯（DNS-Cl）反應：-NH2的H原子被酰基取代生成5-二甲氨基

10、萘磺酰氨基酸（DNS-氨基酸：熒光）。酰基化反應，取代DNFB測定蛋白質N端氨基酸，用于多肽分析。與異硫氰酸苯酯（PITC）反應：Edman降解,-NH2的H原子被烴基取代生成苯氨基硫甲酰氨基酸（PTC-氨基酸），無水HF中生成苯乙內酰硫脲衍生物（PTH-氨基酸：無色）。氨基酸自動分析的基礎。 脫氨基反應：生物體內氨基酸分解代謝的重要方式之一。2）-COOH發生的化學反應成酯和成鹽反應：羧基的化學性質被掩蔽，氨基的化學性質突出地顯示出來。成酰氯反應：氨基酸的羧基活化，易與另一氨基酸的氨基結合。成酰胺反應：Asp（Glu）轉化成Asn（Gln）。脫羧反應：生物體內氨基酸分解代謝的重要方

11、式之一。3）-NH2和-COOH共同參與的化學反應與茚三酮反應：氨基酸與茚三酮在弱酸性溶液中加熱可產生有色化合物,含游離-氨基的氨基酸和肽類生成藍紫色化合物,脯氨酸(Pro)生成黃色化合物。成肽反應4）R側鏈的活性基團發生的化學反應氨基酸以肽鍵共價連接形成線性序列多肽鏈，多肽鏈折疊形成特殊的構象成熟蛋白質。蛋白質的結構層次：一級結構（primary structure ）；二級結構（secondary structure ）；三級結構（tertiary structure ）；四級結構（quaternary structure ）。三、蛋白質的一級結構：蛋白質分子中氨基酸的線性序列。肽：（1）

12、概念：氨基酸通過肽鍵相連而形成的化合物。肽鍵：一個氨基酸的-羧基與另一氨基酸的-氨基脫水縮合形成的鍵。多肽鏈結構共性:N-端：肽鏈有游離氨基一端 C-端：肽鏈有游離羧基一端 氨基酸殘基(amino acid residues)：肽鏈中的每個氨基酸部分多肽鏈主鏈（main chain of polypeptide chain ）：由肽鍵連接各氨基酸殘基形成的長鏈骨架多肽鏈結構差異性：多肽鏈側鏈(side chain)：多肽鏈中各氨基酸側鏈基團寡肽(oligopeptide)（20個以下氨基酸殘基）多肽 (polypeptide )（多于20個氨基酸殘基）蛋白質:由一條或幾條多

13、肽鏈組成的生物大分子。（2）肽的書寫格式及化學名稱：游離-氨基在左，游離-羧基在右，氨基酸之間用“-”表示肽鍵。化學名稱：某氨酰某氨酰 某氨酰某氨酰某氨酸 （3）肽的理化性質：酸堿性質肽的酸堿性質決定于游離末端-NH2、-COOH及側鏈R基上的可解離基團，肽鍵的酰氨氫不解離；可解離基團具特征性pKa值，末端-羧基的pKa值比游離氨基酸的大，末端 -氨基的pKa值比游離氨基酸的小；環境pH值決定其電荷變化，pH>pKa：共軛堿形式（-COO -，NH2），pH<pKa：共軛酸形式（-COOH，+NH3）；具等電點（pI) ，由滴定曲線可確定。旋光性蛋白質部分水解后所得的肽若

14、不發生消旋，具有旋光性，短肽的旋光度約等于組成氨基酸的旋光度之和，較長的肽的旋光度則不是簡單加和。化學反應游離的-氨基、 -羧基和R基可發生與氨基酸中相應的類似反應。（4）重要的多肽生物活性肽谷胱甘肽 (glutathione,GSH)：谷氨酰-半胱氨酰-甘氨酸（三肽：結構） 多肽類激素多肽類抗生素等等。一級結構(primary structure)：氨基酸的線性序列蛋白質分子中氨基酸殘基的排列順序。化學結構一級結構中的共價鍵：肽鍵和二硫鍵（disulfide bond）。一級結構是蛋白質的基本結構，決定蛋白質的空間結構。一級結構測定步驟（1）純化樣品，N-端或C-端末端分析，測定由

15、幾條肽鏈組成。N-末端氨基酸的分析：Sanger法：Sanger反應生成二硝基苯衍生物,酸水解得到黃色DNP-氨基酸,可用乙醚抽提再進行色譜分析；丹磺酰氯法：有很強熒光,靈敏度高；Edman法：苯異硫腈(PITC)與a氨基反應生成PTC-多肽,酸水解后得到PTH-氨基酸,用乙酸乙酯抽提后進行鑒定；氨肽酶法：外肽酶肽鏈外切酶C-末端氨基酸的分析：羧肽酶法：羧肽酶A水解脂肪或芳香族氨基酸的C-末端,羧肽酶B水解堿性氨基酸的C-末端；與苯甲醛沉淀等。（2）拆分二硫鍵：還原法：含巰基化合物（-SH）如2巰基乙醇使-SS-還原產生兩個半胱氨酸殘基（Cys-SH）,烷化劑（如碘乙酸）修飾-SH，阻止二硫鍵

16、再生成；氧化法：過甲酸使-SS-氧化斷裂，生成半胱氨磺酸。（3）氨基酸組成分析：水解樣品，氨基酸自動分析儀測定。酸水解法：6mol/L HCl110加熱回流1624h, 完全水解，Trp被破壞，Gln,Asn酰胺基水解變成Glu,Asp(Glx,Asx)近年來用甲基磺酸代替鹽酸。堿水解法： 6mol/L NaOH 煮沸6h,完全水解，消旋，Ser、Thr、Arg、Lys和Cys破壞 。（4）多肽鏈的部分斷裂和肽段分離：將蛋白質分解為若干個一定長度的小片段。酶水解法：內肽酶（肽鏈內切酶）胰蛋白酶法：水解Lys或Arg的羧基形成的肽鍵糜蛋白酶（胰凝乳蛋白酶）法：水解Phe 、Trp 和Tyr 等疏

17、水氨基酸的羧基形成的肽鍵胃蛋白酶法：被斷裂鍵兩側的殘基都是疏水性氨基酸如：-Phe-Phe-化學法CNBr法：裂解由Met羧基形成的肽鍵。（5）測定每條小肽片段中的氨基酸排列順序：Edman降解法（6）推斷蛋白質的氨基酸排列順序：重疊肽拼湊（7）確定二硫鍵和酰胺基的位置。四、蛋白質的空間結構（構象：conformation）：高級結構，蛋白質分子中所有原子在三維空間的排列分布和肽鏈的走向。構象決定著蛋白質的分子形狀、理化性質和生物學活性。1、蛋白質的二級結構(secondary structure):多肽鏈本身的折疊和盤繞方式，空間結構單元。（1）、肽鍵平面：與肽鍵相關的6個原子（肽鍵-CO-

18、NH-中的4個原子和它相鄰的兩個-碳原子）形成一個剛性平面。N-Ca鍵（）和Ca-C鍵（）：（180°180°）旋轉。二面角（，）決定了相鄰肽平面的相對空間位置。蛋白質的構象取決于肽單位繞N-Ca鍵和Ca-N鍵的旋轉，旋轉受到肽鏈的主鏈和相鄰殘基的側鏈原子之間的立體干擾的限制。（2）、二級結構的型式1）、-螺旋 (-helix)：肽平面通過碳原子旋轉，使碳鏈主鏈沿中心軸盤曲成穩定的右手螺旋構象。許多纖維蛋白和球蛋白存在。結構要點：一般右手螺旋，57°，47°。每個螺旋圈：3.6個氨基酸殘基，每個殘基沿軸旋轉100°，上升0.15nm，螺距0.5

19、4nm；螺旋圈之間通過氫鍵維持結構穩定：第N個氨基酸殘基的羰基氧與第N4個氨基酸殘基的氨基氫形成氫鍵，氫鍵的走向平行于螺旋軸；R側鏈基團伸向螺旋的外側，其大小、形狀及電荷等是影響此結構形成的主要因素。表示：3.613螺旋。（ns螺旋：310螺旋，4.416螺旋-螺旋）。2）、-折疊片層(-pleated sheet)：肽鏈按層排列，以肽鍵平面為單位折疊成鋸齒狀的較伸展片層結構。許多纖維蛋白和球蛋白存在。結構要點：每個殘基大約占0.320.34nm，肽鍵平面遇C發生折疊,形成鋸齒狀結構，R側鏈交錯位于折疊片的上面和下面，兩個殘基形成一個重復單位；肽鏈按層排列，兩條或多條肽鏈片段平行排列，形成片層

20、結構，相鄰多肽鏈的走向順向或反向平行；相鄰肽鏈上所有的羰基氧和氨基氫形成鏈間氫鍵維持結構的穩定性。平行(Parallel)：119°，113°；重復單位0.65nm。反平行(Anti-parallel)：140°，135°；重復單位0.70nm。3）、-轉角(-turn):多肽鏈反轉方向180。的回折形成發夾形狀。球蛋白存在。結構要點：常位于三維結構的表面；一般四個氨基酸組成；氫鍵維持穩定：第1個氨基酸殘基的C=O與第4個殘基的N-H之間形成氫鍵。4）、不規則卷曲(random coil)：沒有確定規律性的松散肽鏈結構。2、蛋白質的三級結構(tertia

21、ry structure)（1）、超二級結構（super-secondary structure）：三級結構的“建筑模塊”1）、模體或模序（motif）：在空間上靠近的二級結構單元彼此相互作用，形成的有規則的、在空間上能辨認的二級結構組合體。常見類型：、等2）、結構域（domain）：球狀蛋白質的折疊單位。在模體或模序的基礎上進一步繞曲折疊形成的具有部分生物功能的緊密的近似球形的空間結構區域。對于較大的蛋白質分子或亞基，多肽鏈往往由兩個以上結構域締合而成三級結構。（2）蛋白質的三級結構(tertiary structure)：多肽鏈上的所有原子（包括主鏈和側鏈）在三維空間的分布。結構特點：大多

22、數可離子化的殘基都位于分子表面，疏水氨基酸殘基大部分埋藏在分子內部（特別是一些疏水性強的氨基酸），多肽鏈高度折疊成緊密球形或橢球形結構；穩定維系三級結構的作用力有：氫鍵、離子鍵、疏水鍵、二硫鍵和配位鍵。三級結構對于蛋白質的分子形狀和生物學活性非常重要。肌紅蛋白（Myoglobin ），丙糖磷酸異構酶等。3、蛋白質的四級結構(quaternary structure)：兩個以上多肽亞基（subunit）（非共價鍵連接）在蛋白質分子內的空間排布和相互關系。亞基或亞單位（subunit）：每一條具有獨立三級結構的多肽鏈。血紅蛋白（Hemoglobin） 五、蛋白質分子中的共價鍵與次級鍵1、共價鍵：肽

23、鍵，二硫鍵2、次級鍵：氫鍵，疏水鍵，鹽鍵，范德華力維持蛋白質空間結構的化學鍵：氫鍵，疏水鍵，鹽鍵，范德華力，二硫鍵，配位鍵。六、蛋白質的折疊（protein folding）：伸展的肽鏈形成特定的三維結構，使無活性的分子成為具有特定生物學功能的蛋白質。參與體內多肽鏈折疊的蛋白質分子伴侶（molecular chaperone）：幫助其他含多肽結構的物質在體內進行正確的非共價的組裝的蛋白質。酶：蛋白質二硫鍵異構酶，肽基脯氨酸順-反異構酶等。七、膠原蛋白（collagen）：原膠原蛋白分子頭尾相連，交錯排列，分子間共價交連，形成特征性的帶狀纖維束。原膠原蛋白：3條左手螺旋多肽鏈相互纏繞形成右手超螺

24、旋分子，長300nm，直徑為1.5nm；靠鏈間氫鍵以及螺旋和超螺旋的反向盤繞維持超螺旋結構穩定性。膠原鏈：每一圈螺旋含3個氨基酸殘基，每一個氨基酸殘基軸向距離為0.31nm，螺距為0.94nm；三聯體序列-Gly-Pro-Hyp-常重復出現。（二）蛋白質結構與功能的關系一、蛋白質一級結構與構象和功能的關系1、一級結構不同,生物學功能各異：加壓素和催產素2、一級結構的關鍵部分相同，其功能也相同：同源蛋白3、一級結構的關鍵部分變化,生物學活性改變或喪失4、一級結構的變化與疾病的關系：鐮刀狀紅細胞性貧血(Sickle cell anemia)二、蛋白質構象與功能的關系1、酶原的激活空間構象的改變2、

25、蛋白質的變構現象別構效應(allosterism)別（變）構作用：含亞基的蛋白質由于一個亞基的構象改變而引起其余亞基和整個分子構象、性質和功能發生改變的作用。別構效應(allosterism)：因別構而產生的效應稱別構效應。別構蛋白：具有別構效應的蛋白質。血紅蛋白的正協同效應（positive cooperativity）：第一個氧分子與一個亞基結合，使余下的3個亞基的血紅素更容易與其它的氧分子結合。結合每一氧分子都會使血紅蛋白對氧的親和性增加，這種互相作用的結合現象稱之結合的正協同性。波爾效應（Bohr effect）：CO2濃度的增加降低細胞內的pH，血紅蛋白結合H和CO2使得血紅蛋白對氧

26、親和力下降，血紅蛋白的P50升高。（三）蛋白質的理化性質及其分離純化一、蛋白質的理化性質1、蛋白質兩性解離特性：蛋白質具有可解離H+的酸性基團和結合H+的堿性基團，具有兩性解離特性，在溶液中起酸堿緩沖作用。（1）等電點（pI）: 使某一蛋白質所帶正負電荷相等時的溶液pH值稱為該蛋白質的等電點。pHpI,蛋白質帶正電；pH>pI,蛋白質帶負電,體內蛋白質的pI多5左右,生理條件下一般負離子；等電點pH時為兩性離子。（2）各蛋白質的一級結構不同，pI不同，荷電種類和數量也不同。（3）應用：等電點沉淀、離子交換層析和電泳。電泳：帶電顆粒在電場中移動的現象。離子交換層析（Ion Exchange

27、 Chromatography簡稱為IEC）：是依據流動相中的組分離子與離子交換劑（固定相）上的平衡離子進行可逆交換時的結合力大小的差別而進行分離的一種層析方法。陰離子交換層析基本分離過程：陰離子交換劑裝柱平衡（RX+Y-）加樣（待分離溶液：可能有正電基團、負電基團和中性基團）：負電基團（A-）與平衡離子（Y-）進行可逆置換，結合到離子交換劑上（RX+A-）。正電基團和中性基團不能與離子交換劑結合，隨流動相流出而被去除。洗脫；洗脫液中的離子與結合在離子交換劑上的各種負電基團（A-）進行置換，各種負電基團（A-）按其與離子交換劑結合力從小到大的順序逐步被洗脫下來，隨洗脫液流出。2、蛋白質的親水特

28、性（1）、球狀的水溶性蛋白親水基團分布于分子表面，疏水基團由疏水作用聚合在分子內部。（2）、分子表面的親水基團與周圍水分子結合形成水化層(水膜)。（3）、分子表面的親水基團可結合或釋放H+,帶一定電荷，水溶液中蛋白質顆粒帶相同電荷。3、蛋白質的膠體性質：蛋白質水溶液是穩定的膠體溶液，具有膠體溶液的特點。蛋白質膠體溶液穩定的原因：1）膠體顆粒直徑；2）表面形成水膜（水化層）；3）帶相同電荷。4、蛋白質的沉淀反應：破壞膠體溶液穩定的因素。（1）、中性鹽沉淀反應：高鹽破壞水膜、中和電荷,蛋白質聚集沉淀鹽析，蛋白質不變性。鹽溶作用：稀鹽使蛋白質表面同性電荷增加，增加蛋白質分子間的排斥,同時與水分子間的

29、作用增強,而增加溶解性。分級（段）鹽析：不同蛋白質鹽析的鹽濃度不同,用不同鹽濃度分級沉淀蛋白質。（2）、有機溶劑沉淀反應：用與水互溶的乙醇、丙酮等奪取水膜,等電點時加入更易沉淀,易引起變性（與有機溶劑濃度、作用時間和沉淀溫度有關）。（3）、重金屬鹽沉淀反應：蛋白質在體內一般為負離子,可與Cu2+，Hg2+，Ag+和Pb2+等結合為不溶性蛋白鹽而沉淀。（4）、生物堿試劑的沉淀反應：蛋白質在pH<pI時帶正電荷,可與苦味酸、磷鎢酸、鞣酸、三氯醋酸、磺基水楊酸等結合沉淀。（5）、加熱沉淀反應 ：蛋白質熱變性沉淀，等電點時最易沉淀。凝固：變性蛋白質分子互相凝集為固體的現象。5、蛋白質的變性與復性

30、（1）、蛋白質變性:概念：在理化因素作用下,蛋白質分子內的二硫鍵和非共價鍵被破壞,分子內部原有的高度規律性的空間排列發生變化，天然構象發生變化,引起蛋白質理化性質和活性的改變（原有性質發生部分或全部喪失）。變性本質:空間構象的改變或破壞。變性特征:1）生物活性喪失（主要標志）。2）理化性質改變：分子形狀改變，肽鏈松散伸展，反應基團增加，易被水解,易被酶消化。蛋白質變性后親水基團被掩埋,溶解度降低、失去水膜，易形成沉淀析出;但若溶液pH與蛋白質的pI差別較大,蛋白質仍不易沉淀。球狀蛋白質的不對稱性增加、粘度增加、擴散系數降低,某些蛋白質結晶能力喪失。（2）、蛋白質復性：有些蛋白質的變性作用是可逆

31、的，其變性如不超過一定限度，經適當處理后，可重新變為天然蛋白質。6、蛋白質的其它特性（1）、紫外吸收特性：Trp、Tyr、Phe等氨基酸殘基可特異地吸收紫外光:max=280nm（2）、顏色反應雙縮脲反應：肽鍵與堿性銅溶液產生蘭色絡合物，肽鍵越多顏色越深。用于蛋白質定性定量和檢測蛋白質水解程度。酚試劑反應：堿性條件下,Tyr和Trp可與含磷鎢酸-磷鉬酸的酚試劑化合物生成蘭色物,蘭色強度與蛋白質量成正比,測定蛋白質常用方法。米倫反應、黃色反應、乙醛酸反應(Hopking-Cole反應、坂口反應(Sakaguchi反應)、茚三酮反應等。二、蛋白質的分離純化蛋白質研究基本步驟：一般溫和物理方法（鹽析

32、、透析、電泳、層析和超速離心等）提取和純化蛋白質；測定氨基酸組成，分析氨基酸順序；確定空間結構（X射線衍射法、NMR或生物學軟件推測）并進行生物學活性的鑒定。1、生物大分子的制備（1）、生物大分子制備的特點(與化學產品的分離制備比較)1）許多生物大分子含量微，耗用生物材料多；2）分離純化的步驟多，流程長；3）分離純化方法差別大，沒有標準方法；4）生物大分子極易失活，分離純化時要選用最適宜的環境和條件防止失活；5）制備中各種參數的綜合影響，很難準確估計和判斷，實驗的重復性較差；6）制備過程復雜困難，更需百折不撓的鉆研精神。（2）、生物大分子制備的基本步驟1）確定制備目的和要求；2）掌握目的產物的物理化學性質；3）建立相應的可靠的分析測定方法；4）生物材料