1、生物煉制大宗化學(xué)品的研究現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢（李彥彬、郝俊冉）摘要：當(dāng)前社會經(jīng)濟的發(fā)展面臨能源資源短缺、生態(tài)環(huán)境惡化的空前挑戰(zhàn)。能源的來源是多元化的，而材料的來源除化石資源外主要依靠生物質(zhì)。以可再生的生物質(zhì)資源替代不可再生的化石資源，建立能夠生產(chǎn)各種大宗化學(xué)品的細(xì)胞工廠，是轉(zhuǎn)變高污染高耗能的經(jīng)濟增長模式、實現(xiàn)社會經(jīng)濟的可持續(xù)發(fā)展的必由之路。本文對生物煉制大宗化學(xué)品的研究現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢進(jìn)行了簡要介紹。關(guān)鍵詞：生物煉制 大宗化學(xué)品 細(xì)胞工廠 可持續(xù)發(fā)展Abstract: Nowadays sustainable development of social economy is faced with th

2、e unprecedented crises of lack of resources and energy and the deterioration of the environment. The form of energy is diversiform, while the material resources still mainly come from biomass and fossil resources. The only solution for transforming the heavily polluting and high energy-intensive mod

3、e of economic improvement and securing sustainable development of social economics is to build cell factories ,which are capable of producing a variety of bulk chemicals,and substitute renewable biomass for unrenewable fossil resource. In this article, the Current Status and trends of bulk chemicals

4、 from biorefinery were briefly introduced.Keywords: Biorefinery, Bulk chemicals, Cell factory, Sustainable development.引言當(dāng)前全球經(jīng)濟的可持續(xù)發(fā)展面臨著節(jié)約能源、資源與保護環(huán)境的多重壓力，因此當(dāng)前首要的任務(wù)是尋找一種新的手段來替代或減少以大量能源資源消耗為代價的傳統(tǒng)化工工業(yè)。近幾年持續(xù)升高的油價敲響了后石油時代到來的警鐘1，高油價已經(jīng)影響世界經(jīng)濟的發(fā)展，而后石油時代到來，石油價格還會繼續(xù)升高。能源的來源是多樣化的 (風(fēng)、太陽、水、核裂變與融合、生物質(zhì)等)，但材料經(jīng)濟除化石資源

5、外主要依賴于生物質(zhì)資源，尤其是植物生物質(zhì)資源。因此，可持續(xù)發(fā)展的目標(biāo)要求我們盡可能最大程度地將當(dāng)前社會的物質(zhì)生產(chǎn)和生活基礎(chǔ)從化石原料轉(zhuǎn)向生物質(zhì)原料。一、生物煉制的概念與優(yōu)勢1982年，Bungay在science上首次提出了生物煉制的概念2。NREL (美國國家再生能源實驗室) 將生物煉制定義為：類似于石油煉制廠，以生物質(zhì)為原料，將生物質(zhì)轉(zhuǎn)化工藝和設(shè)備相結(jié)合，用來生產(chǎn)燃料、能源和生物基化學(xué)品的過程。從本質(zhì)上說，生物煉制細(xì)胞工廠就是通過一系列的生物化學(xué)途徑，利用生物質(zhì)原料高效地轉(zhuǎn)化為燃料、材料或平臺化合物等各類化學(xué)品的自然生產(chǎn)線。與石油煉制相對應(yīng)，生物煉制利用多種生物質(zhì)原料，通過不同技術(shù)過程的整

6、合來生產(chǎn)多樣的產(chǎn)品系列，為社會發(fā)展所大量需要的大宗化學(xué)品提供了全新的生產(chǎn)途徑。生物煉制細(xì)胞工廠煉制大宗化學(xué)品有著巨大的優(yōu)越性：（1）微生物具有優(yōu)越高效的化學(xué)合成能力，幾乎能合成地球上所有的有機化學(xué)品。（2）生物煉制由于其溫和的反應(yīng)條件及高度的手性選擇性而受到人們的青睞，在生產(chǎn)含氧有機化學(xué)品（醇、羧酸和酯等）3和手型化合物(尤其是藥物生產(chǎn))上具有明顯優(yōu)勢，能夠免除傳統(tǒng)化工工業(yè)中規(guī)模浩大的氧化過程和昂貴的手性催化過程。（3）與生物質(zhì)能源工程不同，現(xiàn)代生物煉制平行于石油煉制，通過高效地制備能夠替代石油化工原料的關(guān)鍵平臺化合物，進(jìn)而利用現(xiàn)有化工技術(shù)和化工產(chǎn)業(yè)，大規(guī)模生產(chǎn)各種大宗化學(xué)品，從而構(gòu)建出一條可

7、行的現(xiàn)代生物煉制之路。（4）生物煉制細(xì)胞工廠煉制大宗化學(xué)品符合環(huán)境友好可持續(xù)性發(fā)展的要求。總之，生物煉制技術(shù)不但可以逐漸減少人類社會經(jīng)濟發(fā)展對化石資源的依賴，而且能有效地減少溫室氣體的排放，維護人類賴以生存的地球環(huán)境，因此生物煉制是符合可持續(xù)發(fā)展要求的典范4。二、生物煉制大宗化學(xué)品的研究現(xiàn)狀與背景以生物催化為特點的工業(yè)生物技術(shù)應(yīng)用于大宗化學(xué)品的生產(chǎn)已初見端倪，近年來該行業(yè)呈現(xiàn)快速增長的趨勢。據(jù)預(yù)測，化工領(lǐng)域20%30%的化學(xué)工藝過程將會被生物煉制技術(shù)所取代5，生物煉制產(chǎn)業(yè)將成為21 世紀(jì)的重大化工產(chǎn)業(yè)。通過生物煉制細(xì)胞工廠生產(chǎn)生物基甲醇、乙醇、乙酸、1，3-丙二醇、丁醇、丙酮、聚乳酸、丙烯酰胺

8、、纖維素衍生物等，各有萬t到上千萬t的市場規(guī)模6。世界各國競相開展生物煉制的研究開發(fā)工作7，在政策上、資金上給予大量支持。美國在2002年提出了發(fā)展和推進(jìn)生物質(zhì)基產(chǎn)品和生物能源報告和生物質(zhì)技術(shù)路線圖，成立了生物質(zhì)項目辦公室和生物質(zhì)技術(shù)咨詢委員會，計劃到2030年用生物基產(chǎn)品替代25%的有機化學(xué)品8。美國能源部近日頒布了20092014年6年總額達(dá)2億美元的招標(biāo)聲明（FOA），以支持生物煉制工廠的中試和規(guī)模化示范項目9。日本政府從2001年開始實施“基于利用生物機能的循環(huán)產(chǎn)業(yè)體系的創(chuàng)造”的計劃10，重點開發(fā)用于生產(chǎn)各種化學(xué)物質(zhì)的細(xì)胞及相關(guān)應(yīng)用體系，將生物催化和生物煉制技術(shù)視為能夠形成與環(huán)境協(xié)調(diào)的

9、產(chǎn)業(yè)體系的現(xiàn)實技術(shù)。歐盟通過法規(guī)和資金支持生物煉制產(chǎn)業(yè)的發(fā)展， 2006年歐盟提出的歐盟生物燃料戰(zhàn)略，確立發(fā)展生物煉制技術(shù)和生物燃料的目標(biāo)和主要政策措施。在歐洲，傳統(tǒng)化工產(chǎn)品市場正逐漸被生物煉制的生物基化工產(chǎn)品所取代。發(fā)展中國家中最令人關(guān)注的是巴西，巴西充分發(fā)揮本國的地理資源優(yōu)勢，其生物煉制產(chǎn)業(yè)一直走在世界前列。目前巴西政府規(guī)定，在柴油中添加2%的生物柴油，到2013年將增加到7%，巴西的生物煉制柴油每年能夠節(jié)約進(jìn)口資金約4.25億美元11。與此同時，許多大型的國際化工企業(yè)也投入巨資和龐大的科技力量進(jìn)行相關(guān)技術(shù)的研究。生物煉制基礎(chǔ)研究上的持續(xù)高投入和大批科研人員的技術(shù)創(chuàng)新正在使生物煉制從概念逐

10、漸變?yōu)楝F(xiàn)實。最值得稱道的是美國杜邦公司研發(fā)了以葡萄糖為原料，通過微生物發(fā)酵生產(chǎn)1，3-丙二醇（1，3-PDO）的技術(shù)，采用此技術(shù)生產(chǎn)1，3-PDO的成本比化學(xué)法降低了約25%。其在美國伊利諾斯州迪凱特建有1座產(chǎn)能為20萬t/a的PDO工廠12。以甘蔗、玉米等為原料生產(chǎn)的生物乙醇是目前全球產(chǎn)量最高的生物煉制產(chǎn)品，年產(chǎn)量達(dá)2600 kt·a-113。以玉米為原料生產(chǎn)可降解塑料聚乳酸的技術(shù)已經(jīng)成熟，已廣泛應(yīng)用于服裝、建筑、農(nóng)林業(yè)等，聚乳酸的上市標(biāo)志了生物煉制技術(shù)的核心工業(yè)生物技術(shù)（White biotechnology）的興起14。三、生物煉制大宗化學(xué)品的關(guān)鍵技術(shù)生物煉制細(xì)胞工廠的構(gòu)建和低

11、成本原料的高效綜合利用是生物煉制生產(chǎn)大宗化學(xué)品的關(guān)鍵。生物煉制細(xì)胞工廠生產(chǎn)大宗化工產(chǎn)品與以往生產(chǎn)的高附加值精細(xì)化工產(chǎn)品（蛋白質(zhì)、藥物等）不同，其低附加值要求必須要降低原料成本。目前，木材、秸桿等木質(zhì)纖維素原料是生物煉制生產(chǎn)的最廉價來源15,16。木質(zhì)生物資源的主要成分是纖維素、半纖維素和木素。其中，纖維素、 半纖維素是可發(fā)酵糖的來源，含量占66%75%（纖維質(zhì)原料的絕干重量）17。木質(zhì)纖維素不僅廉價可再生，而且有巨大的開發(fā)潛力。現(xiàn)存的木質(zhì)纖維素如雜草、農(nóng)作物殘體，森林木材等若能被有效利用以生產(chǎn)乙醇，將能夠替代當(dāng)今30%的石油消耗18。1、重構(gòu)生物煉制細(xì)胞工廠代謝網(wǎng)絡(luò)生物煉制生產(chǎn)大宗化學(xué)品依賴于

12、微生物細(xì)胞工廠的構(gòu)建。擁有約40億年歷史的微生物在漫長的進(jìn)化過程中形成了的基因庫種質(zhì)資源極其豐富，幾乎可以分解利用所有的生物質(zhì)資源，將其轉(zhuǎn)化為各種可利用的大宗化工原料。但是自然界中的任一種微生物由于自身酶系的限制，不能按照人類的要求大量且高效地生產(chǎn)大宗化學(xué)品，從而滿足工業(yè)化生產(chǎn)大宗化學(xué)品的需要。因此要取得生物煉制技術(shù)的重大突破，微生物細(xì)胞工廠的成功構(gòu)建將是至關(guān)重要的核心。生物煉制細(xì)胞工廠的基本原理是經(jīng)過人為的重組、優(yōu)化，利用微生物的糖酵解途徑，以丙酮酸、乙酰輔酶A等關(guān)鍵中間代謝產(chǎn)物為調(diào)控節(jié)點， 重新分配微生物細(xì)胞代謝的物質(zhì)流和能量流，過量積累目標(biāo)產(chǎn)品19。對于細(xì)胞代謝生化途徑清楚的，通過代謝工

13、程策略可以容易地選擇菌種改良靶點；而對于生化代謝途徑不清楚的菌株，也可通過系統(tǒng)生物學(xué)技術(shù)、基因組改組、核糖體工程和表觀遺傳修飾等手段進(jìn)行選育。應(yīng)用代謝工程構(gòu)建微生物細(xì)胞工廠主要體現(xiàn)在提高關(guān)鍵調(diào)控節(jié)點處的限制酶的活力，對全局性調(diào)控基因或整個基因簇的操作，增強菌種代謝產(chǎn)物耐受性及其合成途徑的異源表達(dá)20。現(xiàn)代代謝工程中的控制分析，不再拘泥由于單個途徑或限制條件的分析，而在于全局性地考察細(xì)胞代謝流的走向21，為微生物的遺傳操作提供剛性的與柔性的節(jié)點的比較，比傳統(tǒng)理性篩選更具有定向性。目前最成功的細(xì)胞工廠為美國杜邦公司構(gòu)建的能夠生產(chǎn)1，3-PDO的重組大腸桿菌。構(gòu)建過程中將釀酒酵母中的3-磷酸甘油脫氫

14、酶和3-磷酸甘油磷酸化酶的基因?qū)氪竽c桿菌，使宿主細(xì)胞能夠利用葡萄糖產(chǎn)生甘油；繼而將克氏肺炎桿菌中的甘油脫水酶和1，3-PDO氧化還原酶的基因?qū)耄怪亟M大腸桿菌獲得將甘油轉(zhuǎn)化為1，3-PDO的能力。整個研究過程中一共對70多個大腸桿菌的基因進(jìn)行單個或組合的修飾，最后得到的工程菌中有18個基因被敲除或過量表達(dá)19。發(fā)酵結(jié)束1，3-PDO的濃度高達(dá)135g/L，生產(chǎn)強度為3.5g/(L·h)。該工作被評為2002年美國年度綠色化學(xué)獎。生化網(wǎng)絡(luò)具有高度復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，目標(biāo)產(chǎn)品的生化途徑完全清楚的只是個別的，因而基于高通量組學(xué)（包括轉(zhuǎn)錄組、蛋白質(zhì)組、代謝組、通量組學(xué)）分析技術(shù)和計算生物學(xué)的以整

15、體性研究為特征的系統(tǒng)生物技術(shù)就顯得更加重要。系統(tǒng)生物學(xué)是研究一個生物系統(tǒng)中所有組成成分（基因、mRNA、蛋白質(zhì)等）的構(gòu)成，以及在特定條件下這些組成成分間的相互關(guān)系的學(xué)科。近些年來高通量組學(xué)（尤其是基因組學(xué)）的快速發(fā)展為生物煉制細(xì)胞工廠的構(gòu)建提供了必要的基礎(chǔ)。系統(tǒng)生物學(xué)識別分析生物煉制細(xì)胞工廠中各種調(diào)控節(jié)點分子及其相互作用，解析代謝途徑與網(wǎng)絡(luò)的功能和調(diào)控機制，最終完成整個微生物代謝活動的路線圖22，使理論預(yù)測能夠反映出生物系統(tǒng)的真實性。系統(tǒng)生物技術(shù)為生物煉制細(xì)胞工廠的設(shè)計、構(gòu)建和優(yōu)化展現(xiàn)了微生物的代謝網(wǎng)絡(luò)全景式的展現(xiàn)，促進(jìn)微生物生物煉制的能力和效率的全面提高。2、高效利用木質(zhì)纖維素生物煉制細(xì)胞工

16、廠生產(chǎn)大宗化學(xué)品的低附加值要求不斷提高微生物的原料利用能力與定向轉(zhuǎn)化效率。如何高效利用木質(zhì)纖維素等廉價生物質(zhì)原料，是生物煉制細(xì)胞工廠所面臨的重要問題。木質(zhì)纖維素分子對纖維素酶的高抗性限制了可發(fā)酵糖的轉(zhuǎn)化23。因此采用酶解法以木質(zhì)纖維素為原料制糖發(fā)酵生產(chǎn)乙醇，必須對木質(zhì)纖維素進(jìn)行預(yù)處理。目前，木質(zhì)纖維原料預(yù)處理的方法主要有物理法，化學(xué)法，物理化學(xué)法，生物法等。常用的物理方法有剪切和研磨、高溫分解、微波處理、蒸汽爆破和高能輻射等；常用的化學(xué)法有臭氧法、酸水解法、堿法、氧化脫木素法、有機溶劑法等；常用的物理化學(xué)法有蒸汽爆裂法、氨纖維爆裂、CO2爆破法、氨冷凍爆破法等；在生物預(yù)處理法中，常用褐腐菌、白

17、腐菌和軟腐菌等微生物降解木素和半纖維素。總的來說，物理法與化學(xué)法的能耗較高，生產(chǎn)成本高，生產(chǎn)效率低，比較有發(fā)展前途的方法不多。而生物法預(yù)處木質(zhì)纖維為近些年研究開發(fā)的熱點，有研究結(jié)果24證明采用白腐菌雜色云芝（Trametes vesicolor)生物預(yù)處理對柳木(Salix babylonica，硬木)和杉木(Cunninghamia lanceolata，軟木)纖維素酶水解，使硬木和軟木的最終轉(zhuǎn)化率分別增加4.78倍和4.02倍。3、同等利用五碳糖與六碳糖五碳糖與六碳糖的同等利用也是當(dāng)前研究的熱點，此問題的解決能夠為生物煉制提供更廣泛和更經(jīng)濟的原材料來源。由己糖通過釀酒酵母發(fā)酵生成乙醇是很成

18、熟的工藝，但是工程菌對木糖和阿拉伯糖等五碳糖的利用速度和效率都明顯低于葡萄糖。提高利用混合糖為原料生產(chǎn)乙醇的效率，就必須解決五碳糖和六碳糖的同等利用問題。利用木質(zhì)纖維素生產(chǎn)乙醇的研究中，研究較多的菌種有：釀酒酵母、木霉、運動發(fā)酵單孢菌、褐色高溫單孢菌、嗜熱菌、大腸桿菌等。最近發(fā)現(xiàn)在梭菌(Clostridia)中存在與纖維素代謝關(guān)系密切的兩個屬C.thermocllum和C.thermosac-charolyticum。前者能夠分泌纖維素酶和半纖維素酶，將纖維素和半纖維素分別降解為纖維二糖和木糖及木二糖并利用纖維二糖生產(chǎn)乙醇25，后者能夠利用纖維二糖、木糖及木二糖生產(chǎn)乙醇。此發(fā)現(xiàn)為五碳糖與六碳糖

19、的同等利用開辟了新的研究方向。四、我國生物煉制大宗化學(xué)品的發(fā)展現(xiàn)狀與機遇我國的人均資源，尤其是人均化石資源很低，而且面臨著嚴(yán)重的環(huán)境污染問題。然而社會的發(fā)展對材料的需求不斷增長，預(yù)計“十一五”期間，我國將成為僅次于美國和日本的世界第三大化學(xué)品生產(chǎn)國27。材料經(jīng)濟的快速可持續(xù)發(fā)展與化石資源的不可再生間的矛盾不斷加劇。因此，發(fā)展生物煉制產(chǎn)業(yè)將有利于減少我國經(jīng)濟對石油資源的依賴程度，培育新的經(jīng)濟增長點，對保障我國社會經(jīng)濟可持續(xù)發(fā)展和國家的能源安全具有重大戰(zhàn)略意義。因此，加速實現(xiàn)材料經(jīng)濟由石油煉制向生物煉制的轉(zhuǎn)變是我國材料經(jīng)濟發(fā)展的必由之路。在客觀條件上，我國有發(fā)展生物煉制生產(chǎn)大宗化學(xué)品的巨大資源優(yōu)勢

20、與潛力，據(jù)報道26我國可利用的木質(zhì)纖維素資源達(dá)到20億t/a以上。如果能夠利用生物煉制技術(shù)實現(xiàn)其高效利用，中國可以走出一條綠色現(xiàn)代化工之路。從總體上來說，我國是生物煉制產(chǎn)業(yè)大國，近些年在某些領(lǐng)域取得一些進(jìn)步，例如我國生產(chǎn)的味精和檸檬酸已達(dá)世界第1位；國內(nèi)以甘油為原料二步發(fā)酵法生產(chǎn)1，3-丙二醇的技術(shù)已擁有完全自主的知識產(chǎn)權(quán)，已有工業(yè)化的生產(chǎn)；我國的生物煉制生產(chǎn)丙烯酰胺取得了巨大的成功，年生產(chǎn)規(guī)模已超過萬噸28。但我國還不是生物煉制技術(shù)強國。針對我國生物煉制產(chǎn)業(yè)的發(fā)展現(xiàn)狀和世界生物經(jīng)濟的發(fā)展潮流，我國政府先后投入大量資金啟動了一批與生物煉制基礎(chǔ)研究相關(guān)的科研項目，包括部分“973”、“863”課

21、題。具有代表性的有：（1）2004年，“973”項目“秸稈資源生態(tài)高值化關(guān)鍵過程的基礎(chǔ)研究”獲得批準(zhǔn)立項，由中國科學(xué)院過程工程研究所陳洪章研究員擔(dān)任首席科學(xué)家；（2）2006年，863重點項目“生物基化學(xué)品的生物煉制技術(shù)” 獲得批準(zhǔn)立項，由大連理工大學(xué)的曲景平教授主持；（3）2007年，“973”項目“生物煉制細(xì)胞工廠的科學(xué)基礎(chǔ)” 獲得批準(zhǔn)立項，中科院微生物所所長助理、中國生物工程學(xué)會副秘書長馬延和擔(dān)任首席科學(xué)家。與此同時，我國也積極制定政策鼓勵生物煉制產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，2006年國務(wù)院發(fā)布國家中長期科學(xué)和技術(shù)發(fā)展規(guī)劃綱要（20062020年），提出將5項生物技術(shù)作為未來15年我國前沿技術(shù)的重點研究

22、領(lǐng)域，表明了我國政府躋身生物煉制強國行列的決心。2007年底，國家發(fā)改委發(fā)出通知，決定于20082009年組織實施生物基材料高技術(shù)產(chǎn)業(yè)化專項，旨在促進(jìn)生物煉制、生物基材料產(chǎn)業(yè)的發(fā)展與壯大。五、前景與展望生物煉制是以生物可再生資源為原料生產(chǎn)能源與化工產(chǎn)品的新型工業(yè)模式。生物煉制不僅是解決能源短缺、環(huán)境污染等問題的有效途徑，也是支援農(nóng)村建設(shè)，增長農(nóng)民收入的生產(chǎn)模式。因此，發(fā)展生物煉制細(xì)胞工廠生產(chǎn)大宗化學(xué)品對我國來說更是實現(xiàn)跨越式發(fā)展和可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略的現(xiàn)實需要。認(rèn)識并利用微生物廣泛的物質(zhì)分解轉(zhuǎn)化與卓越的化學(xué)合成能力，將微生物改造成為高效的生物煉制細(xì)胞工廠，使生物煉制逐步取代傳統(tǒng)石油煉制，對于降低化石

23、資源消耗、最終實現(xiàn)工業(yè)原材料來源的戰(zhàn)略大轉(zhuǎn)移、促進(jìn)經(jīng)濟社會的可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。參考文獻(xiàn)1曹湘洪.后石油時代就在眼前J.化工進(jìn)展,2008,27(11):1617-16822Bungay R R. Biomass refiningJ. Science,1982,218: 643-646.3Birgit K, Patrick R G, Michael K. Biorefineries-industrial processes and productsM. Weinheim Germany: WILEY-VCH GmbH & CoKGaA,2006.4 Ragauskas A J. T

24、he path forward for biofuels and biomaterialsJ. Science,2006,311:484-489·5戎志梅. 21世紀(jì)生物化工產(chǎn)業(yè)發(fā)展趨勢及熱點(上) J. 上海化工，2007，（2）: 27-316中國化工學(xué)會.2006-2007化學(xué)工程學(xué)科發(fā)展報告M. 2007，（3）:77-857杜風(fēng)光,張龍.生物化工基產(chǎn)品國內(nèi)外研究與應(yīng)用現(xiàn)狀J. 新材料產(chǎn)業(yè)，2007，（4）: 37-41.8Biomass Research and Development Technical Advisory CommitteeS. Roadmap for B

25、iomass Technologies in the United States, December, 2002.9美能源部2億美元資助生物煉制J. 化工中間體,2009(1):8.10海野肇,岡田惠雄. Green Biotechnology M. 講談社科學(xué)部,200211張強,周永春,張俊祥.工業(yè)生物技術(shù)為我國提供歷史性戰(zhàn)略機遇J.國際技術(shù)經(jīng)濟研究,2006(2): 3-712徐兆瑜.前景璀璨的生物化工技術(shù)及其熱點產(chǎn)品. 化工科技市場, 2006, 29(3):7-12.13BACAS - report. Industrial Biotechnology and Sustainable

26、Chemistry. Royal Belgian Academy Council of Applied Science,2004.14朱躍釗,盧定強,萬紅貴. 等.工業(yè)生物技術(shù)的研究現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢J. 化工學(xué)報,2004,55(12):1951-1956.15Zhao Y, Wang Y, Zhu JY. et al. Enhanced enzymatic hydrolysis of spruce by alkaline pretreatment at low temperature. Biotechnol Bioeny,2008,99(6):1320-1328.16Pu Y, Zhang D

27、, Singh PM. et al. the new forestry biofuels sector. Biofuels Bioprod Bioref,2008,2(1):58-7317Stuart Earnest D，et al. Treatment method for fibrous lignocellulosicbiomass using fixed stator device having nozzle tool with opposingcoaxial toothed rings to make the biomass more susceptible tohydrolysis P. US 5498766，1996.18Schmer M R, Vogel K P, Mitchell R B, et al. Net energy of cellulosic ethanol from switchgrass.PNAS,2008,105(2):464-469.19黃英明,高振,黃和.等.生物煉制實現(xiàn)可持續(xù)發(fā)展的新型工業(yè)模式J.生物加