1、1 .氨基酸的紙層析分離1 .什么是紙層析技術是利用混合物中各組分物理化學性質差異，使其以不同速度移動的一種物理分離方法。2 .什么是分配系數分配系數是指溶質在固定相中的濃度和溶質在流動相中的濃度的比值。3 .層析技術的種類1吸附層析2分配層析3離子交換層析4凝膠過濾層析5親和層析6氣象層析7固相層析8柱層析9紙層析10薄層層析11高效液相層析4 .影響Rf值的因素有哪些1紙層析時紙層析時要在密閉儀器中加入平衡試劑使紙層析上吸附的溶劑達到飽和.2濾紙要保持潔凈，點樣時要適量斑點不能過大.3樣品物分子結構和極性4濾紙的厚薄和纖維松緊度不一樣，結合的水量也不一樣。2 .酵母RNA的提取和分離1 .

2、試驗中為什么選擇干酵母做實驗材料？酵母中RNA含量較高(2.67%10.0%),DNA含量少2 .提取RNA的方法有幾種？稀堿法和濃鹽法3 .加入酸性乙醇的目的？在堿提取液中加入酸性乙醇溶液可使解聚的核糖核酸沉淀，由此得到RNA的粗制品。4 .如何鑒定RNA的組分？現象如何？RNA中含有核糖，堿基，磷酸各組分。核糖與濃鹽酸和苔黑酚共熱產生綠色；喋吟堿與銀俊絡離子共熱白色絮狀喋吟銀化物沉淀；磷酸與鋁酸俊試劑作用產生黃色的磷鋁酸俊，加硫酸煮沸可使其水解，從水解液中可以測出上述組分的存在。3 .球蛋白提取及含量測定1 .蛋白質沉淀方法有哪些？分可逆沉淀法和不可逆沉淀法兩種。其中可逆沉淀法有等電點沉淀

3、，中性鹽沉淀法，有機溶劑沉淀法；不可逆沉淀法有加熱沉淀，重金屬鹽沉淀，生物堿沉淀。2 .蛋白質含量測定的方法紫外分光光度計，可見光光度計，雙縮月尿法，福林酚法3 .分光光度計的使用及注意事項1接電源，打開樣品室暗箱蓋，預熱20min2調節所需波長3開蓋放黑色比色皿，關蓋，調T%為0%4放空白對照，放樣品液到比色皿2/3到3/4處，用擦鏡紙擦干表面，在對照組處調T為100%5調節T%到ABS,分別測各樣品分光光度值4 .鹽析原理將大量鹽加到蛋白質溶液中，高濃度的鹽離子（如硫酸俊的SO4和NH4）有很強的水化力，可奪取蛋白質分子的水化層，使之失水”于是蛋白質膠粒凝結并沉淀析出鹽析時若溶液pH在蛋白

4、質等電點則效果更好.由于各種蛋白質分子顆粒大小、親水程度不同，故鹽析所需的鹽濃度也不一樣，因此調節混合蛋白質溶液中的中性鹽濃度可使各種蛋白質分段沉淀.4 .影響酶促反應速度的因素1 .影響酶促反應速度的因素有哪些？溫度，pH,抑制劑，激活劑2 .唾液淀粉酶的抑制劑，激活劑分別是？激活劑：Cl-;抑制劑：Cu2+3 .NaOH對v反應實驗，做碘反應實驗前為何加鹽酸因為碘遇NaOH變NaI和NaIO3,而不能與淀粉發生反應，所以加入鹽酸中和氫氧化鈉。4 .溫度如何影響酶活性？一般來講，每種酶的酶活性有最適溫度，在此溫度下，其活性最高，偏離此最適溫度時，溫度越低，或者溫度越高，其活性越小.而且，溫度

5、過高會導致酶失活以及變性.5 .植物組織中丙酮酸含量的測定1 .本實驗中氫氧化鈉的作用？丙酮酸與2,4-二硝基苯腫發生反應，生成的丙酮酸-2,4-二硝基苯腺，在堿性條件下顯紅色，因此氫氧化鈉作用是提供堿性環境。2 .本實驗中所加試劑為何不能顛倒？因為本實驗中所用的丙酮酸與三氯乙酸均為酸性，而2,4-二硝基苯腫與丙酮酸的反應需要在堿性條件下顯色；三氯乙酸的作用是除去蛋白質，使之沉淀，如果后力口，試驗結果可能會被其他蛋白質干擾。3 .制作丙酮酸標準曲線時為什么以8%三氯乙酸為空白對照？因為本實驗所用提取液是8%三氯乙酸溶液，所用丙酮酸均溶解于該溶液中。4 .測定丙酮酸含量的基本原理植物樣品組織經三

6、氯乙酸除去蛋白質后，所含丙酮酸與2,4-二硝基苯腫發生反應,生成的丙酮酸-2,4-二硝基苯腺，在堿性條件下顯紅色。測定樣品吸光度，與丙酮酸標準曲線相比較即可得丙酮酸含量。06.DNA的提取及含量測定1 .DNA提取中各試劑中英文名稱及作用SDS:十二烷基硫酸鈉，使蛋白質變性及破壞脫氧核酸降解酶CHC13:氯仿，使蛋白質沉淀被除去乙醇:使DNA呈纖維狀沉淀出來Na2EDTA:乙二胺四乙酸二鈉，抑制DNA酶活性，與Mg2+結合，保護DNANaCl:使蛋白質溶解CH3CHO:乙醛，提高反應靈敏度2 .加入氯仿后出現什么現象？溶液分三層，上層為DNA溶液，中層為蛋白質沉淀，下成為有機層3 .DNP與R

7、NP在鹽溶液中溶解度有什么不同？DNP和RNP在鹽溶液中的溶解度受鹽濃度的影響而不同。DNP在低濃度鹽溶液中，幾乎不溶解，如在0.14mol/L的氯化鈉溶解度最低，僅為在水中溶解度的1%,隨著鹽濃度的增加溶解度也增加，至1mol/L氯化鈉中的溶解度很大，比純水高2倍。RNP在鹽溶液中的溶解度受鹽濃度的影響較小，在0.14mol/L氯化鈉中溶解度較大。因此，在提取時，常用此法分離這兩種核蛋白。4 .定糖法測定DNA含量的原理DNA分子中2-脫氧核糖殘基在酸性溶液中加熱降解，產生2-脫氧核糖并形成3羥基-丫酮基戊酸，后者與二苯胺試劑反應產生藍色化合物，其反應如下圖。藍色化合物在595nm處有最大吸

8、收，且DNA在40聞400聞范圍內時，吸光度與DNA濃度成正比。在反應液中加入少量乙醛，可以提高反應靈敏度。D、AdK氧核糖殘基）工HOCH個一m一國一6。三色蘭色化冽Q7 .植物過氧化物同工酶聚丙烯酰氨凝膠電泳1 .什么是電泳，同工酶，等電點？在溶液中，蛋白質分子會由于氨基酸的解離而帶電荷，電場中蛋白質帶電粒子會向與自身電荷相反的電極泳動，這就是電泳。指生物體內催化相同反應但分子結構不同的一組酶氨基酸分子靜電荷為零時的PH2 .Acr,Bis,AP,TEMED#自中文名稱及作用？Acr：丙烯酰胺，作為單體；Bis:甲叉雙丙烯酰胺，交聯劑；AP：0.15%過硫酸錢,化學聚合催化劑；TEMED:

9、四甲基乙二胺，加速劑3 .過氧化物酶的底物是什么？H2O24 .澳酚藍的作用？指示電泳前沿：澳酚藍分子帶負電，比蛋白質小遷移速度快，總是位于蛋白質之前。5 .本實驗使用的緩沖溶液是什么？寫出各自的名稱，PH提取液緩沖液：PH=8.0電極緩沖溶液：PH=8.3上樣緩沖溶液：PH=8.98 .蔗糖酶米氏常數的測定1 .為什么說Km是酶的特征常數？什么是Km?單位是什么？一個酶對一個特定的底物有一個特定的Km與之對應；Km是酶促反應最大速度1/2時的底物濃度；單位：mol/L、mmol/L2 .雙倒數作圖法求Km值，橫縱坐標分別是什么？橫：1/s;縱:1/v。（s是底物濃度）3 .NaOH作用？使酶

10、失活，反應停止4 .涉及化學反應：蔗糖水解為葡萄糖；3,5-二硝基水楊酸與葡萄糖加熱反應生成棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸9 .胰蛋白酶活性的測定1 .酶活單位如何定義？一個酶活力單位是指在最適條件下，在一分鐘內能轉化1科mol底物所需要的酶量2 .紫外分光光度計使用方法 設置波長：GotoWL】鍵設置波長 【T%/ABS：按【T%/ABS】可在透光率（T%）和吸光度（ABS啟間切換。 保存參數：可將當前參數保存在內存或數據包內。 測量屏幕：確定參數后按【樣品測定】或【START/STOP鍵的同時進行第一次測量，每按一次得到一個數據。 自動調零：當需要空白校正時，在測量前設置好空白樣品，然后

11、按AUTOZERO鍵，此時的光度值設定為0ABS（100%）放入空白校正一1.光度(按“1)，一|T%/ABg【GotoWL】鍵設置波長一【AUTOZERO少放入待測樣一【START/STOPRETURNS3.BAEE,BA中文名BAEEN-苯甲酰-L-精氨酸乙酯BA:N-苯甲酰-L-精氨酸10.植物體內游離脯氨酸含量的測定1 .植物體內游離脯氨酸有何意義？植物在正常條件下，游離脯氨酸含量很低，但遇到干旱、鹽堿、低溫等逆境時，游離脯氨酸便會大量積累，并且積累指數與植物的抗逆性有關。因此，脯氨酸可作為植物抗逆性的一項生化指標。脯氨酸是水溶性最大的氨基酸，具有很強的水和能力，其水溶液具有很高的水勢

12、。其疏水端可與蛋白質結合，親水端可與水分子結合，蛋白質可借脯氨酸束縛更多的水，從而防止滲透脅迫條件下蛋白質脫水變性。因此脯氨酸在植物的滲透調節中起重要作用。2 .當改變萃取劑時比色應做哪些改變？如何選擇最佳的萃取劑？當萃取劑發生改變時，測定光密度的波長應當改變，具體如何改變，根據實驗而定。萃取劑選用原則：a.萃取機和原溶劑互不相容b.萃取劑和溶質互不發生反應c.溶質在萃取劑中溶解度遠大于在原溶劑中溶解度。11 .植物基因組DNA的提取與純度測定1. CTAB的作用？使核糖體解體，蛋白質和多糖沉淀，DNA溶解2. CTAB溶液中組分有哪些？CTAB:十六烷基三甲基澳化俊Tris-HCl(pH=8

13、.0):提供一個緩沖環境，防止核酸被破壞EDTA螯合Mg2+和Mn2+:抑制DNA酶活性NaCl:提供高鹽環境，使DNA充分溶解，存在于液相當中3-硫基乙醇：抗氧化劑，有效防止酚被氧化成醍，避免褐變，使酚容易去除基因組DNA。3. DNA提取方法有哪些？CTAB法，玻璃珠法，超聲波法，研磨法，凍融法，異硫鼠酸月瓜法，堿法，酶法4. DNA純度鑒定方法OD260/OD280（紫外分光光度法）、電泳5. OD260/OD280值大于1.8及小于1.8的原因等于1.8時表示DNA純度極高，大于時表示提取物混有RNA，小于時表示混有蛋白質。12 .基因組DNA的酶切及瓊脂糖凝膠電泳1 .什么是限制性內

14、切酶？分為哪幾種？是可以識別特定核甘酸序列，并在每條鏈中特定部位的兩個核甘酸之間的磷酸二酯鍵進行切割的一類酶。能識別特定的核甘酸順序，并在識別點附近進行切割，但切割的核甘酸順序無專一性，是隨機的。能識別專一的核甘酸順序，并在該順序內的固定位置上切割能識別的順序是回文順序，可切成粘性末端也可形成平末端。2 .酶切的原理，EcoRI的酶切位點GIAATTCCTTAAIG限制性內切酶識別特定核甘酸序列，并在每條鏈中特定部位的兩個核甘酸之間的磷酸二酯鍵進行切割3 .瓊脂糖凝膠電泳分離核酸的原理DNA在高于等電點PH的溶液中帶負電荷，在電場中向正極移動。由于糖-磷酸骨架在結構上的重復性質相同數量的雙鏈D

15、NA幾乎帶等量的靜電荷。因此能以同樣的速度向正極方向移動。在一定電場強度下，DNA遷移速度取決于分子本身的大小與構型，相對分子質量不同的DNA泳動速率不同。4 .電泳點樣時，加樣孔在哪個電極附近，為什么？負極。DNA在高于等電點PH的溶液中帶負電荷，在電場中向正極移動。13 .植物總RNA的提取與檢測1 .常用RNA提取方法苯酚法，陰離子去污劑法，Licl-尿素法，改良Gomez法，異硫氟酸“瓜法，CTAB法，熱硼酸法，Trizol試劑快速提取法2 .Trizol試劑提取RNA理論上有幾條帶？分別代表什么？四條.5SrRNA,5.8SrRNA,18SrRNA,28SrRNA3 .Trizol試劑提取RNA原理TRIZOL是一種新型總RNA抽提試劑，其含有苯酚、異硫鼠酸月瓜等物質，能迅速破碎細胞并抑制細胞釋放出的核酸酶。在破碎和溶解細胞時能保持RNA的完整性，適用于從多種組織和細胞中快速分離總RNA。4 .植物RNA提取注意事項1、取植物材料新鮮、幼嫩的部分2、移液槍頭，離心管等耗材和試劑需要經過嚴格的去RNA酶處理或用DEPC水配制。3、葉片用足夠液氮快速研磨。4、 100mg葉片對應ImlTRNzol5、提取RNA后立即跑電泳，防止RNA被污染6、跑電泳的槽子需要與RNA專用槽，或經過特殊處理14.SDS-PAGE電泳測定蛋