1、動物細胞工程動物細胞工程動物細胞工程常用的技術手段：動物細胞工程常用的技術手段：動物細胞培養技術、動物細胞培養技術、 動物細胞核移植技術、動物細胞核移植技術、動物細胞融合技術、動物細胞融合技術、 生產單克隆抗體技術生產單克隆抗體技術提問：提問：v植物細胞工程常用的技術手段有哪些？植物細胞工程常用的技術手段有哪些？植物組織培養技術、植物組織培養技術、 植物體細胞雜交技術植物體細胞雜交技術動物細胞培養技術動物細胞培養技術是其他動物細胞工程技術的基礎。是其他動物細胞工程技術的基礎。動物細胞與組織培養動物細胞與組織培養動物細胞融合動物細胞融合單克隆抗體制備單克隆抗體制備體細胞克隆體細胞克隆細胞核移植細

2、胞核移植動物動物細胞細胞工程工程技術技術動物細胞工程動物細胞工程的基礎的基礎一、動物細胞培養一、動物細胞培養 概念概念:就是從動物機體中取出相關的組織就是從動物機體中取出相關的組織,將它分散成單個細胞，然后將它分散成單個細胞，然后,放在適宜的放在適宜的培養基中培養基中,讓這些細胞生長和增殖。讓這些細胞生長和增殖。植物組織培養植物組織培養 在無菌和人工控制的條件下在無菌和人工控制的條件下, ,將離體的植將離體的植物器官、組織、細胞，培養在人工控制的培物器官、組織、細胞，培養在人工控制的培養基上，給予適宜的培養條件，誘導其產生養基上，給予適宜的培養條件，誘導其產生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株

3、。愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。1、動物細胞培養的原理是什么？、動物細胞培養的原理是什么？2、從動物機體中要取出哪些相關組織？并、從動物機體中要取出哪些相關組織？并 解釋解釋原因。原因。3、組織分散成單個細胞的方法是什么？其理論依、組織分散成單個細胞的方法是什么？其理論依據是什么？據是什么？4、動物細胞體外培養需要滿足哪些條件？、動物細胞體外培養需要滿足哪些條件？ 動物胚胎或幼齡動物的組織、器官動物胚胎或幼齡動物的組織、器官 它們細胞增殖能力強，分裂旺盛，分化它們細胞增殖能力強，分裂旺盛，分化程度低，容易培養。程度低，容易培養。細胞增殖細胞增殖閱讀課本閱讀課本P44，簡述動物細胞培養的基

4、，簡述動物細胞培養的基本過程本過程動物動物胚胎胚胎或或幼齡幼齡動動物的組織、器官物的組織、器官胰蛋白酶胰蛋白酶剪碎剪碎單個細胞單個細胞加培養液加培養液制成制成細胞細胞懸浮懸浮液液10代代細胞細胞部分細胞部分細胞“癌變癌變”，遺傳物質改變，無遺傳物質改變，無限傳代限傳代動物細胞培養不能動物細胞培養不能最終培養成動物體最終培養成動物體50代細胞代細胞原代培養原代培養傳代培養傳代培養細胞貼壁細胞貼壁剝離、分瓶剝離、分瓶細胞株細胞株細胞細胞細胞系細胞系動物細胞培養過程動物細胞培養過程動物細胞生長特性動物細胞生長特性細胞貼壁：細胞貼壁： 懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶

5、壁上，稱為細胞貼壁。稱為細胞貼壁。要求：培養瓶或培養皿的內表面光滑、無毒、易于貼附。要求：培養瓶或培養皿的內表面光滑、無毒、易于貼附。細胞的接觸抑制：細胞的接觸抑制： 當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖，這種現象稱為細胞的接觸抑制。停止分裂增殖，這種現象稱為細胞的接觸抑制。細胞貼壁過程有關概念有關概念: 原代培養：原代培養：從機體取出后立即培養的細胞為原代細胞。從機體取出后立即培養的細胞為原代細胞。培養的第培養的第1代細胞與傳代細胞與傳10代以內的細胞稱為原代培養。代以內的細胞稱為原代培養。 傳代培養：傳代培養：將原代細胞從培養

6、瓶中取出，配制成細胞將原代細胞從培養瓶中取出，配制成細胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養瓶中繼續培養，懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養瓶中繼續培養，稱為傳代培養。稱為傳代培養。 細胞株：細胞株：原代細胞一般傳至原代細胞一般傳至10代左右細胞生長停滯，代左右細胞生長停滯，大部分細胞衰老死亡，少數細胞存活到大部分細胞衰老死亡，少數細胞存活到4050代，這代，這種傳代細胞為細胞株。種傳代細胞為細胞株。 細胞系：細胞系：細胞株傳代至細胞株傳代至50代后又出現細胞生長停滯狀代后又出現細胞生長停滯狀態，只有部分細胞由于遺傳物質的改變，使其在培養態，只有部分細胞由于遺傳物質的改變，使其在培養條件下可以無

7、限制傳代，這種傳代細胞為細胞系。條件下可以無限制傳代，這種傳代細胞為細胞系。 細胞株和細胞系的區別：細胞株和細胞系的區別： 細胞系的遺傳物質改變，具細胞系的遺傳物質改變，具有癌細胞的特點，失去接觸抑制，容易傳代培養。有癌細胞的特點，失去接觸抑制，容易傳代培養。細胞細胞懸浮懸浮液液1010代代細胞細胞5050代代細胞細胞無限無限傳代傳代原代培養原代培養傳代培養傳代培養細胞株細胞株細胞系細胞系如何界定原代培養和傳代培養；細胞株和細如何界定原代培養和傳代培養；細胞株和細胞系？胞系？多數組織細胞固定在表面生長和分裂多數組織細胞固定在表面生長和分裂。隨細胞增多，細胞就會停止分裂增殖隨細胞增多，細胞就會停

8、止分裂增殖遺傳物質改變遺傳物質改變思考討論思考討論1.動物細胞培養取材時，一般是取胚胎組織或幼齡動動物細胞培養取材時，一般是取胚胎組織或幼齡動物的組織或器官，請解釋原因。物的組織或器官，請解釋原因。細胞的衰老與動物機體的衰老有著密切的關系，細胞的增殖細胞的衰老與動物機體的衰老有著密切的關系，細胞的增殖能力與供體的年齡有關，幼齡動物細胞增殖能力強，有絲分能力與供體的年齡有關，幼齡動物細胞增殖能力強，有絲分裂旺盛，老齡動物則相反。所以，一般來說幼年動物的組織裂旺盛，老齡動物則相反。所以，一般來說幼年動物的組織細胞比老年動物的組織細胞易于培養。同樣，組織細胞的分細胞比老年動物的組織細胞易于培養。同樣

9、，組織細胞的分化程度越低，則增殖能力越強，所以更容易培養。化程度越低，則增殖能力越強，所以更容易培養。腫瘤組織或細胞腫瘤組織或細胞 正常組織或細胞正常組織或細胞 拓展拓展-動物組織或細胞培養的難易程度動物組織或細胞培養的難易程度幼體組織或細胞幼體組織或細胞 老齡組織或細胞老齡組織或細胞分化程度低的組織或細胞分化程度低的組織或細胞 分化程度高的組織或細胞分化程度高的組織或細胞2、人類一般保存的是哪類細胞呢？為什么？、人類一般保存的是哪類細胞呢？為什么？ 保存保存10代以內的細胞，因為其生物學特性未發生大代以內的細胞，因為其生物學特性未發生大的變化，最接近于體內組織或細胞的生長特性，很適合的變化，

10、最接近于體內組織或細胞的生長特性，很適合用于藥物測試、基因表達等實驗研究。用于藥物測試、基因表達等實驗研究。3、在動物細胞培養過程中，為什么要用胰蛋白酶對、在動物細胞培養過程中，為什么要用胰蛋白酶對取出的動物組織進行處理？取出的動物組織進行處理？ 胰蛋白酶處理動物組織，可以使動物組織細胞胰蛋白酶處理動物組織，可以使動物組織細胞間的膠原纖維和細胞外的其他成分酶解，獲得單間的膠原纖維和細胞外的其他成分酶解，獲得單個細胞個細胞; ;成塊的組織細胞靠在一起成塊的組織細胞靠在一起,彼此限制了細彼此限制了細胞的生長和增殖胞的生長和增殖.植物組織培養過程將組織分散成單個細胞的嗎？植物組織培養過程將組織分散成

11、單個細胞的嗎？.胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細胞間的物質是什胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細胞間的物質是什么成份？么成份？.細胞膜的主要成份是什么？胰蛋白酶能將細胞消化掉嗎？細胞膜的主要成份是什么？胰蛋白酶能將細胞消化掉嗎？.既然胰蛋白酶能將細胞消化掉，那將動物組織分散成單個既然胰蛋白酶能將細胞消化掉，那將動物組織分散成單個細胞要注意什么問題呢？能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？細胞要注意什么問題呢？能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？為什么？進一步思考：進一步思考：否否 胰蛋白酶水解蛋白質胰蛋白酶水解蛋白質蛋白質蛋白質蛋白質和磷脂蛋白質和磷脂能能注意時間的控制注意時間的控制 不能，因

12、為兩者的最適不能，因為兩者的最適PH不同，而正常組織細胞的生存環境與不同，而正常組織細胞的生存環境與胰蛋白酶的最適胰蛋白酶的最適PH較接近較接近 多細胞動物和人體的細胞多細胞動物和人體的細胞都生活在內環境中，根據你所都生活在內環境中，根據你所學的知識，認為體外培養細胞學的知識，認為體外培養細胞應該模擬內環境的哪些內容呢？應該模擬內環境的哪些內容呢？動物細胞培養條件：動物細胞培養條件：1、無菌、無毒的環境、無菌、無毒的環境 （添加一定量的抗生素，定期更換培養液）（添加一定量的抗生素，定期更換培養液）2、必須的營養物質、必須的營養物質（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、核酸、（葡萄糖、氨基酸、無機鹽

13、、維生素、核酸、嘌呤、嘧啶、激素、生長因子、動物血清等。嘌呤、嘧啶、激素、生長因子、動物血清等。）保證細胞順利的保證細胞順利的生長增殖生長增殖3、適宜的溫度、適宜的溫度 36.5+（-）0.5度4、充足的氧氣和適宜的酸堿度、充足的氧氣和適宜的酸堿度 O2和和CO2（95%空氣和空氣和5% CO2 ）問題：問題：1、培養基的類型、培養基的類型（1）天然培養基：營養價值高，成分復雜）天然培養基：營養價值高，成分復雜（2）合成培養基：成分明確，便于控制試驗條件）合成培養基：成分明確，便于控制試驗條件2、動物細胞培養液的主要成分是什么？、動物細胞培養液的主要成分是什么？較植物組織培養基有何獨特之處？較

14、植物組織培養基有何獨特之處？主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。素和動物血清等。獨特之處有：獨特之處有：1、液體培養基（、液體培養基（動物體細胞動物體細胞大都生活在大都生活在液體液體的環境的環境） 2、成分中有動、成分中有動物血清等物血清等獲得細胞獲得細胞細胞的全能性細胞的全能性細胞株、細胞系細胞株、細胞系植物體植物體培養結果培養結果或細胞產物或細胞產物快速繁殖、培育快速繁殖、培育無病毒植株等無病毒植株等培養目的培養目的葡萄糖、動葡萄糖、動物血清物血清蔗糖、植物蔗糖、植物激素激素培養基特有成分培養基特有成分液體培養基液體培養基固體培養基固

15、體培養基培養基性質培養基性質細胞增殖細胞增殖原理原理動物細胞培養動物細胞培養植物組織培養植物組織培養比較項目比較項目植物組織和動物細胞培養的比較植物組織和動物細胞培養的比較動物細胞培養應用動物細胞培養應用 大規模培養生產生物制品（病毒疫苗、干擾素、大規模培養生產生物制品（病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體）單克隆抗體） 獲得大量自身的皮膚細胞，用于植皮獲得大量自身的皮膚細胞，用于植皮 培養的動物細胞可以用于檢測有毒物質，判斷培養的動物細胞可以用于檢測有毒物質，判斷某種物質的毒性某種物質的毒性 為治療和預防癌癥及其他疾病提供理論依據為治療和預防癌癥及其他疾病提供理論依據小結小結 動物細胞和組織培養（原

16、理、材料動物細胞和組織培養（原理、材料選擇及原因、一般過程、培養條件、選擇及原因、一般過程、培養條件、主要應用）主要應用）注意：注意：概念理解：原代培養、傳代培養、細胞株概念理解：原代培養、傳代培養、細胞株 、細胞系細胞系胰蛋白酶處理的原因、目的和注意事項胰蛋白酶處理的原因、目的和注意事項動物細胞培養和植物組織培養的區別動物細胞培養和植物組織培養的區別思考與探究思考與探究：如何用細胞培養技術，為燒傷病如何用細胞培養技術，為燒傷病人植皮？人植皮？ 取該患者的皮膚進行取該患者的皮膚進行細胞培養細胞培養,獲得足量的細獲得足量的細胞后再移植胞后再移植1 1、在動物細胞培養過程中遺傳物質發生改變的細胞是

17、、在動物細胞培養過程中遺傳物質發生改變的細胞是 （ ）A A細胞系細胞系 B B細胞株細胞株 C C原代細胞原代細胞 D D傳代細胞傳代細胞2 2、動物細胞工程技術的基礎是、動物細胞工程技術的基礎是 （ ）A.A.動物細胞融合動物細胞融合 B.B.單克隆抗體單克隆抗體C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.動物動物細胞培養細胞培養3 3、用于動物細胞培養的組織和細胞大都取自胚、用于動物細胞培養的組織和細胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細胞這樣的組織細胞 （ ）A.A.容易產生各種變異容易產生各種變異 B B具有更強

18、的全能性具有更強的全能性C.C.取材十分方便取材十分方便 D D分裂增殖的能力強分裂增殖的能力強4 4、下列屬于動物細胞工程中的工具是（、下列屬于動物細胞工程中的工具是（ ）A A限制性內切酶限制性內切酶 B BDNADNA連接酶連接酶C C胰蛋白酶胰蛋白酶 D D果膠酶果膠酶ADDC5 5、在動物細胞培養的有關敘述中，正確的是（、在動物細胞培養的有關敘述中，正確的是（ ）A A動物細胞培養的目的就是為了獲得大量的細胞分泌蛋白動物細胞培養的目的就是為了獲得大量的細胞分泌蛋白B B動物細胞培養前要用胰蛋白酶處理使細胞分散動物細胞培養前要用胰蛋白酶處理使細胞分散C C細胞遺傳物質的改變發生于原代培

19、養過程中細胞遺傳物質的改變發生于原代培養過程中D D培養至培養至5050代后繼續傳代的細胞是細胞株代后繼續傳代的細胞是細胞株6 6、在動物細胞培養中有部分細胞可能在培養條件下無限制地傳代、在動物細胞培養中有部分細胞可能在培養條件下無限制地傳代下去，這種傳代細胞稱之為（下去，這種傳代細胞稱之為（ ）A A原代培養原代培養 B B傳代培養傳代培養 C C細胞株細胞株 D D細胞系細胞系7 7、動物細胞培養的正確過程是（、動物細胞培養的正確過程是（ ）A.A.原代培養原代培養傳代培養傳代培養細胞株細胞株細胞系細胞系 B. B. 原代培養原代培養傳代培養傳代培養細胞系細胞系細胞株細胞株C.C.傳代培養

20、傳代培養細胞系細胞系原代培養原代培養細胞株細胞株 D. D. 原代培養原代培養細胞系細胞系傳代培養傳代培養細胞株細胞株8 8、下列與動物細胞培養有關的表述中，不正確的是（、下列與動物細胞培養有關的表述中，不正確的是（ ）A A培養液通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清培養液通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清B B原代培養的細胞一般傳至原代培養的細胞一般傳至1010代左右便會出現生長停滯代左右便會出現生長停滯C C動物細胞培養一般能夠傳到動物細胞培養一般能夠傳到40405050代，但其遺傳物質發生了改代，但其遺傳物質發生了改變變D D動物細胞培養可用于檢測有毒物質和獲得

21、大量自身健康細胞動物細胞培養可用于檢測有毒物質和獲得大量自身健康細胞BDAC下圖是動物細胞培養的基本過程示意圖。請據此下圖是動物細胞培養的基本過程示意圖。請據此圖回答圖回答(1)(1)容器容器A A中放置的是動物器官或組織。它一般取自中放置的是動物器官或組織。它一般取自_ 。(2)(2)容器容器A A中的動物器官或組織首先要進行的處理是中的動物器官或組織首先要進行的處理是_，然后用，然后用 酶處理，這是為了使細胞分酶處理，這是為了使細胞分散開來。這樣做的目的是散開來。這樣做的目的是_ _._ _. (3) (3)培養首先在培養首先在B B瓶中進行。瓶中的培養基成分有瓶中進行。瓶中的培養基成分有

22、_ _ 等等。在此瓶中培養一段時間后，一般傳到第。在此瓶中培養一段時間后，一般傳到第 代代，有許多細胞衰老死亡，到這時的培養稱為，有許多細胞衰老死亡，到這時的培養稱為_._.(4)(4)為了把為了把B B瓶中的細胞分裝到瓶中的細胞分裝到C C瓶中，用瓶中，用_ _ _處理，然后配置成處理，然后配置成_，再分裝。，再分裝。(5)(5)在在C C瓶中正常培養了一段時間后，發現細胞全部瓶中正常培養了一段時間后，發現細胞全部死亡。原因是死亡。原因是_。幼齡動物的器官或組織、動物胚胎幼齡動物的器官或組織、動物胚胎剪碎剪碎 胰蛋白胰蛋白 使每個細胞能與培養液接觸使每個細胞能與培養液接觸 葡萄糖、氨基酸、無

23、機鹽、維生素和動物血清葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清 10原代培養原代培養胰蛋白酶胰蛋白酶 細胞懸浮液細胞懸浮液細胞沒有發生瘤變細胞沒有發生瘤變 概念：將動物的一個細胞的細胞核，移入一概念：將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組個已經去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終并發育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發育成動物個體。發育成動物個體。 用核移植的方法得到的動物用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物稱為克隆動物核移植核移植（難度高）（難度高）受體細胞：受體細胞：M期的期的卵母細胞卵母細胞二、動物體細胞核移植技術和克隆動

24、物二、動物體細胞核移植技術和克隆動物胚胎細胞核移植：胚胎細胞核移植：體細胞核移植：體細胞核移植：細胞分化程度低，細胞分化程度低，恢復全能性容易恢復全能性容易卵母卵母細胞細胞去核去核體細體細胞取胞取核核電刺激電刺激使兩細使兩細胞融合胞融合重組細胞重組細胞重組胚胎重組胚胎新個體新個體卵細胞卵細胞母綿羊母綿羊母綿羊母綿羊乳腺細胞乳腺細胞細胞質細胞質細胞核細胞核細胞核移植細胞核移植早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂C母綿羊子宮母綿羊子宮胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多莉羊的培育過程多莉羊的培育過程融合后的卵細胞融合后的卵細胞克克隆隆羊羊培培育育過過程程黑面綿羊去黑面綿羊去核卵細胞核卵細胞白面綿羊乳

25、白面綿羊乳腺細胞核腺細胞核細胞核移植細胞核移植重組細胞重組細胞電脈沖刺激電脈沖刺激早期胚胎早期胚胎胚胎移植胚胎移植另一頭綿羊的子宮另一頭綿羊的子宮妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利、在體細胞的細胞核移植到受體卵母細胞之、在體細胞的細胞核移植到受體卵母細胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細胞的核？前，為什么必須先去掉受體卵母細胞的核？為使核移植動物的遺傳物質全部來自有利用為使核移植動物的遺傳物質全部來自有利用價值的動物提供的細胞。價值的動物提供的細胞。、用于核移植的供體細胞一般都選用傳代、用于核移植的供體細胞一般都選用傳代1010代以內的細胞，為什么？代以內的細胞，為什么？1010代以內的細

26、胞一般保持正常二倍體的核型，代以內的細胞一般保持正常二倍體的核型，未發生突變未發生突變思考題思考題3 3、體細胞核移植方法生產的克隆動物是對體細、體細胞核移植方法生產的克隆動物是對體細胞供體動物進行了胞供體動物進行了100%的復制嗎？為什么？的復制嗎？為什么？不是，克隆動物絕大部分不是，克隆動物絕大部分DNADNA來自供體細胞核，來自供體細胞核，但核外還有少部分但核外還有少部分DNADNA（如線粒體（如線粒體DNADNA）來自）來自受體卵母細胞受體卵母細胞4.動物克隆實例很多，為何多莉就舉世聞名呢？動物克隆實例很多，為何多莉就舉世聞名呢？在在19971997年年2 2月英國羅斯林研究所維爾穆特

27、博士科研組月英國羅斯林研究所維爾穆特博士科研組公布體細胞克隆羊公布體細胞克隆羊“多莉多莉”培育成功之前，胚胎細胞核培育成功之前，胚胎細胞核移植技術已經有了很大的發展。實際上，移植技術已經有了很大的發展。實際上，“多莉多莉”的克的克隆在核移植技術上沿襲了胚胎細胞核移植的全部過程，隆在核移植技術上沿襲了胚胎細胞核移植的全部過程，但這并不能減低但這并不能減低“多莉多莉”的重大意義，因為它是世界上的重大意義，因為它是世界上第一例第一例經體細胞核移植出生的動物，是克隆技術領域研經體細胞核移植出生的動物，是克隆技術領域研究的巨大突破。這一巨大進展意味著：究的巨大突破。這一巨大進展意味著：在理論上證明了，在

28、理論上證明了，同植物細胞一樣，分化了的動物同植物細胞一樣，分化了的動物細胞核細胞核也具有全能性也具有全能性 體細胞核移植技術的應用前景體細胞核移植技術的應用前景 1、加速家畜遺傳改良進程，促進優良畜群繁育、加速家畜遺傳改良進程，促進優良畜群繁育2、保護瀕危物種，增加存活數量、保護瀕危物種，增加存活數量3、克隆動物作為生物反應器，生產醫用蛋白、克隆動物作為生物反應器，生產醫用蛋白4、可以作為異種移植的供體，可以用于組織、可以作為異種移植的供體，可以用于組織器官的移植器官的移植體細胞核移植技術存在的問題：體細胞核移植技術存在的問題：許多克隆動物表現出遺傳和生理缺陷，許多克隆動物表現出遺傳和生理缺陷

29、，如體型過大，異常肥胖，發育困難，臟如體型過大，異常肥胖，發育困難，臟器缺陷，免疫失調等。器缺陷，免疫失調等。在研究方面，克隆動物基因組重新編程的機在研究方面，克隆動物基因組重新編程的機制尚不清楚，克隆技術效率低，克隆動物畸制尚不清楚，克隆技術效率低，克隆動物畸形率高、死亡率高、易出現早衰等問題。這形率高、死亡率高、易出現早衰等問題。這些問題尚在研究中。些問題尚在研究中。在應用上，生產克隆動物費用昂貴，距大規在應用上，生產克隆動物費用昂貴，距大規模應用還有一定距離。模應用還有一定距離。 “番茄番茄馬鈴薯馬鈴薯”理想圖理想圖 通過長期的實驗，科通過長期的實驗，科學家們采用體細胞雜交學家們采用體細

30、胞雜交技術獲得了技術獲得了“番茄番茄馬馬鈴薯鈴薯”植株。植株。雜雜種種植植株株篩選融篩選融合合AB的原生的原生質體質體再再生生出出細細胞胞壁壁脫脫分分化化愈愈傷傷組組織織再再分分化化植物細胞的融合植物細胞的融合植物組織培養植物組織培養植物細胞植物細胞A原生質體原生質體B原生質體原生質體A雜種雜種細胞細胞AB去去 壁壁去去 壁壁人人工工誘誘導導方法？方法？促進融合促進融合的方法？的方法？融合融合完成完成的的標志標志植物細胞植物細胞B植物體細胞雜交技術過程植物體細胞雜交技術過程原理？原理？原理？原理？成果和未解決的問題成果和未解決的問題 成果：克服不同生物遠緣雜交的障礙，出成果：克服不同生物遠緣雜

31、交的障礙，出 現自然界沒有的新品種現自然界沒有的新品種。未解決的問題：未能讓雜種植物按照人們未解決的問題：未能讓雜種植物按照人們 的需要表現出親代的優良。的需要表現出親代的優良。如果將牛的細胞與植物細胞雜交，得到如果將牛的細胞與植物細胞雜交，得到綠色的小奶牛，那豈不是只要曬曬太陽綠色的小奶牛，那豈不是只要曬曬太陽就可以擠出牛奶啦！就可以擠出牛奶啦！動物細胞也能融合嗎？動物細胞也能融合嗎？一、動物細胞融合一、動物細胞融合1、動物融合的過程、動物融合的過程請同學們閱讀課本請同學們閱讀課本P52動物細胞融合內容動物細胞融合內容問題：問題：什么是什么是動物細胞融合？它相當動物細胞融合？它相當于植物體細

32、胞雜交過程的哪一步？于植物體細胞雜交過程的哪一步？它它們的們的過程、基本原理、誘導融合方法過程、基本原理、誘導融合方法和意義是否相同？和意義是否相同？ 不同不同DNADNA的兩個細胞的兩個細胞滅活病毒誘導細胞融合滅活病毒誘導細胞融合融合后的細胞進行有融合后的細胞進行有絲分裂絲分裂1 1、動物細胞融合過程、動物細胞融合過程滅活喪失感染性滅活喪失感染性保留融合活性保留融合活性動物細胞融合過程、原理與誘導方法動物細胞融合過程、原理與誘導方法思考題思考題? ?1、植物體細胞雜交時首先應用什么方法去掉細胞壁？、植物體細胞雜交時首先應用什么方法去掉細胞壁？酶解法，如纖維素酶或果膠酶酶解法，如纖維素酶或果膠

33、酶2 2、動物細胞融合時需要進行去壁處理嗎？為什么？、動物細胞融合時需要進行去壁處理嗎？為什么？無需，因為動物細胞無細胞壁無需，因為動物細胞無細胞壁3 3、植物體細胞雜交誘導原生質體融合常用的方法有哪些？、植物體細胞雜交誘導原生質體融合常用的方法有哪些？離心、電激等物理方法；離心、電激等物理方法；PEG等化學方法等化學方法4 4、動物細胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法、動物細胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法嗎？嗎？能能 還可以利用滅活的病毒進行誘導還可以利用滅活的病毒進行誘導5 5、植物體細胞雜交應先進行原生質體的融合再進行組織、植物體細胞雜交應先進行原生質體的融合再進行組織培

34、養形成完整的雜種個體，動物細胞融合后能形成雜種動培養形成完整的雜種個體，動物細胞融合后能形成雜種動物個體嗎？物個體嗎？不能不能6 6、你能歸納出什么叫做動物細胞融合嗎？、你能歸納出什么叫做動物細胞融合嗎？2、動物細胞融合的概念、動物細胞融合的概念 動物細胞融合也稱細胞雜動物細胞融合也稱細胞雜交，是指在一定條件下將兩交，是指在一定條件下將兩個或多個動物細胞形成一個個或多個動物細胞形成一個細胞的過程細胞的過程.主要用于制備主要用于制備單克隆抗體單克隆抗體獲得雜種植株獲得雜種植株用途用途物理、化學方法物理、化學方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒物理（離心、振物理（離心、振動、電刺激）動、電刺激

35、）化學（聚乙二醇）化學（聚乙二醇）誘導方法誘導方法使細胞分散后誘使細胞分散后誘導細胞融合導細胞融合去除細胞壁后誘去除細胞壁后誘導原生質體融合導原生質體融合細胞融合的方法細胞融合的方法細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞膜的流動性、細胞膜的流動性、植物細胞全能性植物細胞全能性原理原理動物細胞融合動物細胞融合植物體細胞雜交植物體細胞雜交比較項目比較項目植物、動物細胞融合的比植物、動物細胞融合的比較較7、你推測一下動物細胞融合有哪些方面的應用嗎？、你推測一下動物細胞融合有哪些方面的應用嗎？思考題思考題 利用動物細胞融合技術誘導形成雜交瘤細胞利用動物細胞融合技術誘導形成雜交瘤細胞8、在生產實際中雜交瘤細胞

36、有怎樣的應用？、在生產實際中雜交瘤細胞有怎樣的應用？ 生產單克隆抗體生產單克隆抗體提提問問？1.抗體是由何種細胞產生的？抗體是由何種細胞產生的？、一個淋巴細胞、一個淋巴細胞(漿細胞漿細胞)能分泌多種能分泌多種抗體嗎？抗體嗎？、一種抗原侵入機體之后，引起機體免、一種抗原侵入機體之后，引起機體免疫反應產生的抗體只有一種嗎？疫反應產生的抗體只有一種嗎？. 簡述獲得抗體的傳統途徑？簡述獲得抗體的傳統途徑？、這種方法獲得的抗體有什么缺陷？、這種方法獲得的抗體有什么缺陷？二、單克隆抗體二、單克隆抗體問題：問題：抗體由什么抗體由什么細胞產生？其化學細胞產生？其化學本質是什么？與抗本質是什么？與抗原作用的特點

37、？主原作用的特點？主要分布在哪里？要分布在哪里？1抗體抗體 一個天然抗原物質可有多種和多個決定簇一個天然抗原物質可有多種和多個決定簇。教。教材中所說的抗原分子刺激淋巴細胞，說的也就是材中所說的抗原分子刺激淋巴細胞，說的也就是抗抗原決定簇原決定簇刺激刺激B B淋巴細胞，使其分裂分化出淋巴細胞，使其分裂分化出特異性特異性的效應的效應B B細胞細胞，分泌分泌特異性抗體。特異性抗體。抗體的傳統生產方法抗體的傳統生產方法從從血血清清中中分分離離抗抗體體該法制備抗體的特點：該法制備抗體的特點： 產量低、純度低，且抗產量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。體的特異性差、靈敏度低。多多種種效效應應B細細胞胞動動物物體體內內多多種種抗抗體體抗抗原原 抗原抗原 動物體動物體刺激刺激漿細胞漿細胞 抗體抗體抗體不純抗體不純特異性差、純度低；特異性差、純度低；產量低、反應不夠靈敏產量低、反應不夠靈敏傳統血清抗體的制備傳統血清抗體的制備抗原不純抗原不純 每個淋巴細胞只能分泌一種抗體，由一個淋巴細每個淋巴細胞只能分泌一種抗體，由一個淋巴細胞增殖產生的細胞群分泌的抗體化學成份是單一的。胞增殖產生的細胞群分泌的抗體化學成份是單一的。如何獲得化學性質單一、特異性強的抗體？如何獲得化學性質單一、特異性強的抗體？體外培養淋巴細胞能無限增殖嗎體