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1、 蛋白質含量的測定蛋白質含量的測定FolinFolin- -酚試劑法（酚試劑法（LowryLowry法）和考馬斯亮藍法法）和考馬斯亮藍法（BrodfordBrodford法）法） 一一 FolinFolin- -酚試劑法（酚試劑法（LowryLowry法）法）目的和要求目的和要求學習Folin-酚法測定蛋白質含量的原理和方法。進一步掌握分光光度法求標準曲線、準確測定未知樣品、正確使用儀器 原理原理蛋白質濃度可以從它們的物理化學性質，如折射率、比重、紫外吸收等測定而得知：或用化學方法，如定氮、雙縮脲反應、Folin-酚試劑反應等方法來求算。其中雙縮脲法和Folin-酚法是一般實驗室中經常使用的方

2、法。它們操縱簡便、迅速，不需要復雜而昂貴的設備，又能適合一般實驗室的要求，若作一般的濃度測定較為適應。Folin-酚法靈敏度高，較雙縮脲法靈敏100倍。本實驗采用的是Folin-酚法。Folin-酚法所用的試劑由兩部分組成。試劑甲相當于雙縮脲試劑，可與蛋白質中的肽鍵起顯色反應。試劑乙（磷鎢酸和磷鉬酸混合液）在堿性條件下極不穩定，易被酚類化合物還原而呈藍色反應（鉬藍和鎢藍的混合物）。由于蛋白質中含有帶酚基的酪氨酸，故有此顏色反應。因此，用Folin-酚法測定蛋白質含量靈敏度較高。實驗步驟實驗步驟1.標準曲線的制作：按下表操作管 號BSA（300gmL）H2OPr.含量g步 驟12345600.2

3、0.40.60.81.01.00.80.60.40.20050100150200250各試管加入試劑甲5.0mL，混合后放置10分鐘，加入試劑乙0.5mL，立即混合，37度恒溫反應20分鐘。以1號為參比，測A750的值。2. 樣品（小白菜）液的提取稱取小白菜1-4克（菜桿2-4克，菜葉1-2克）置于研缽中，加5mL蒸餾水在低溫下研磨成勻漿，全部轉移至50mL容量瓶中，并定容至刻度，然后抽濾，在3000rpm離心20分鐘，上層清液為提取液，待用。樣品的測定吸取提取液和稀釋250倍的血清液各1.0mL于試管中（三次重復），分別加5.0mL試劑甲，放置10分鐘后，加試劑乙0.5mL，立即混勻，恒溫37度反應20分鐘，測A750的

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