1、 植物花粉母細胞減數分裂制片植物花粉母細胞減數分裂制片技術和染色體觀察技術和染色體觀察 一、實驗目的一、實驗目的 1 1、觀察染色體在減數分裂中的行為和變、觀察染色體在減數分裂中的行為和變化，識別減數分裂各個時期特點，加深對化，識別減數分裂各個時期特點，加深對減數分裂遺傳學意義的理解；減數分裂遺傳學意義的理解； 2 2、掌握動、植物減數分裂的制片技術。、掌握動、植物減數分裂的制片技術。二、實驗原理二、實驗原理 u 減數分裂是性母細胞在配子形成過程中一種特殊的細胞分減數分裂是性母細胞在配子形成過程中一種特殊的細胞分裂方式。裂方式。在減數分裂過程中染色體只復制一次，而細胞卻連續在減數分裂過程中染色

2、體只復制一次，而細胞卻連續分裂兩次，因此一個二倍體的性母細胞便形成為四個單倍體的分裂兩次，因此一個二倍體的性母細胞便形成為四個單倍體的性細胞。性細胞。 u 高等植物花粉母細胞經減數分裂產生四個小孢子，染色體高等植物花粉母細胞經減數分裂產生四個小孢子，染色體數目已減半為數目已減半為n。小孢子進一步發育為花粉粒。小孢子進一步發育為花粉粒。減數分裂過程減數分裂過程1 1、間期間期( (前間期前間期) )2 2、減數第一分裂減數第一分裂3 3、中間期中間期4 4、減數第二分裂減數第二分裂前期前期I I 中期中期I I 后期后期I I 末期末期I I前期前期II II 中期中期II II 后期后期II

3、II 末期末期IIIIu 在適宜的時期采集植物的花蕾，經固定液在適宜的時期采集植物的花蕾，經固定液殺死固定，使細胞保持活體時形態。然后進行壓殺死固定，使細胞保持活體時形態。然后進行壓片染色等處理，在顯微鏡下進行觀察，可以看到片染色等處理，在顯微鏡下進行觀察，可以看到小孢子母細胞的減數分裂過程，研究染色體在形小孢子母細胞的減數分裂過程，研究染色體在形態和數量上的動態變化特點。態和數量上的動態變化特點。三、實驗用品三、實驗用品實驗材料：玉米實驗材料：玉米（Zea mays 2n=20）雄花序或小麥、雄花序或小麥、 蠶豆蠶豆(Vicia faba 2n=12)花蕾、花蕾、 蝗蟲蝗蟲(grasshop

4、per 初級精母細胞初級精母細胞2n=22+X) 精巢精巢儀器物品：顯微鏡、水浴鍋、鑷子、解剖針儀器物品：顯微鏡、水浴鍋、鑷子、解剖針實驗藥品：卡諾實驗藥品：卡諾氏氏固定液、固定液、70%乙醇、改良品紅或醋酸乙醇、改良品紅或醋酸洋紅。洋紅。四、實驗操作流程四、實驗操作流程 取材取材 固定固定 剝離花藥剝離花藥 染色染色 壓片壓片 鏡鏡檢檢 1.1.取材：取材：u選取適當大小的花蕾，是觀察花粉母細胞減數分裂的關選取適當大小的花蕾，是觀察花粉母細胞減數分裂的關鍵性步驟。不同植物取材時期不同。鍵性步驟。不同植物取材時期不同。u 玉米：抽雄前兩周（大喇叭口期），玉米：抽雄前兩周（大喇叭口期），雄穗尖端

5、露出以前雄穗尖端露出以前7-10d時，先以手指擠摸穗尖的外部，覺得松軟時時，先以手指擠摸穗尖的外部，覺得松軟時在雄花在雄花序所在部位用刀片縱向劃一切口，用鑷子取出花序分枝。序所在部位用刀片縱向劃一切口，用鑷子取出花序分枝。此時雄花序先端小穗穎長此時雄花序先端小穗穎長4mm左右，花藥長左右，花藥長23mm。每小穗中有兩朵小花，各有花藥每小穗中有兩朵小花，各有花藥3個個 。通常從一個分枝。通常從一個分枝上從幼嫩的部位向較為成熟的區域混合制片。上從幼嫩的部位向較為成熟的區域混合制片。 u小麥：孕穗期以后，旗葉抽出小麥：孕穗期以后，旗葉抽出1 2cm，取出穗子。，取出穗子。u 時間一般在上午時間一般在

6、上午9時時10時，不同材料間稍有差異。時，不同材料間稍有差異。玉米大喇叭口玉米大喇叭口期期玉米小穗玉米小穗玉米雄花序玉米雄花序小麥孕穗期小麥孕穗期小麥的小花小麥的小花實驗中注意觀察：每一分枝是中上部還是下部小穗發育最早？實驗中注意觀察：每一分枝是中上部還是下部小穗發育最早？2 2固定：固定：u取下的材料應立即放入固定液中殺死固定。取下的材料應立即放入固定液中殺死固定。u一般采用卡諾氏固定液，無水酒精：冰醋酸一般采用卡諾氏固定液，無水酒精：冰醋酸3:1，一般固定，一般固定424h。可用。可用95 乙醇代乙醇代替無水乙醇。替無水乙醇。u如需長期保存，可先用如需長期保存，可先用70%酒精沖洗酒精沖洗

7、2次然次然后轉入后轉入70%酒精中保存。酒精中保存。u注意：固定液時應現配現用，固定時不要在陽光下注意：固定液時應現配現用，固定時不要在陽光下暴曬。暴曬。3 3、剝離花藥、剝離花藥取出保存的花序，吸去小穗過多保存液，置于載玻取出保存的花序，吸去小穗過多保存液，置于載玻片中央，挑出花藥片中央，挑出花藥4 4染色：染色： 在剝離的材料上滴加在剝離的材料上滴加1滴染液，在室溫下滴染液，在室溫下染色染色1015min。5.壓片壓片 蓋上蓋玻片，在蓋玻片上墊蓋上蓋玻片，在蓋玻片上墊12層吸水紙，用一只層吸水紙，用一只手穩住載玻片和蓋片手穩住載玻片和蓋片防止滑動防止滑動，另一只手用解剖針的針柄，另一只手用

8、解剖針的針柄敲擊蓋片敲擊蓋片6.6.鏡檢觀察鏡檢觀察先用低倍鏡觀察，找到一個好的分裂相，再轉用高倍鏡觀先用低倍鏡觀察，找到一個好的分裂相，再轉用高倍鏡觀察。要求能夠分辨減數分裂的各個時期，特別是能夠獨立察。要求能夠分辨減數分裂的各個時期，特別是能夠獨立辨認第一次減數分裂前期的各個時期辨認第一次減數分裂前期的各個時期7.7.觀察永久制片觀察永久制片 在顯微鏡下觀察，并與自己的制片比較，掌握各個時在顯微鏡下觀察，并與自己的制片比較，掌握各個時期的特點。期的特點。u注意：注意： 怎樣區分各個時期？怎樣區分各個時期？五、實驗結果與分析五、實驗結果與分析1繪出自己所制作片子的分裂相繪出自己所制作片子的分

9、裂相(3個以上時期），個以上時期），說明其時期和特點。說明其時期和特點。2. 分析自己制片操作過程中出現的問題及可能原因。分析自己制片操作過程中出現的問題及可能原因。注意事項注意事項u 愛護顯微鏡。愛護顯微鏡。u 一次取材不要太多。一次取材不要太多。u用過的載玻片必須刷洗干凈，用過的用過的載玻片必須刷洗干凈，用過的蓋玻片丟入垃圾桶，不得直接沖入水蓋玻片丟入垃圾桶，不得直接沖入水池。池。減數分裂前期減數分裂前期 I I細線期細線期偶線期偶線期偶線期偶線期粗線期粗線期雙線期雙線期終變期終變期中期中期后期后期后期后期前期前期II中期中期II后期后期II末期末期II四分體四分體小孢子小孢子玉米減數分裂

10、中期玉米減數分裂中期I玉米減數分裂中期玉米減數分裂中期 IIM1 中期與中期與M2中期的比較中期的比較前期前期 I細線期細線期偶線期偶線期粗線期粗線期雙線期雙線期終變期終變期中期中期 I后期后期 I末期末期 I前期前期 II中期中期 II后期 II末期 II取材及固定取材及固定捕捉雄性蝗蟲，直接投入到捕捉雄性蝗蟲，直接投入到卡諾固定液中固定卡諾固定液中固定2424小時，小時，然后轉到然后轉到7070的酒精中保存。的酒精中保存。雌雄蟲辨別雌雄蟲辨別（外觀）（外觀）雄性蝗蟲蟲個體小，雌蟲較大；雄性蝗蟲蟲個體小，雌蟲較大；雌性蝗蟲尾部有產卵瓣，雄蟲雌性蝗蟲尾部有產卵瓣，雄蟲無無。解剖取出解剖取出精巢

11、精巢：先將蝗蟲翅膀剪去，在翅基部的后先將蝗蟲翅膀剪去，在翅基部的后方，相當于腹部背側的前端，用解剖剪將其體壁剪方，相當于腹部背側的前端，用解剖剪將其體壁剪開，上方兩側的黃色團塊就是精巢。精巢由許多排開，上方兩側的黃色團塊就是精巢。精巢由許多排列在一起的精小管組成。列在一起的精小管組成。將精巢取出置于一潔凈的將精巢取出置于一潔凈的培養皿內，用蒸餾水洗滌干凈。用解剖針將精巢輕培養皿內，用蒸餾水洗滌干凈。用解剖針將精巢輕輕分離開，即可看到大量的精細小管。輕分離開，即可看到大量的精細小管。取取1 12 2根精小管放在干凈的載玻片上，根精小管放在干凈的載玻片上，用吸水紙將上面的水吸凈，用吸水紙將上面的水吸凈，在精小管位在精小管位置上滴加一滴改良苯酚品紅染液，在室置上滴加一滴改良苯酚品紅染液，在室溫下染色溫下染色10-15min。附：顯微鏡操作和使用u 開關顯微鏡，移動顯微鏡。開關顯微鏡，移動顯微鏡。u調節調節目鏡間距和目鏡微調目鏡間距和目鏡微調，使兩個眼睛視野相同和清晰，使兩個眼睛視野相同和清晰，防止眼睛疲勞。防止眼睛疲勞。u 先低倍鏡，后高倍鏡觀察，高倍鏡下不準用粗調。先低倍鏡，后高倍鏡