1、摘要 題目摘 要目的：通過比較不同斷面顏色白術中白術內酯的含量，從而確定不同顏色的白術的質量，建立白術的質量標準。方法：采用外標法，HPLC法測量其中一個含量。Dikma Kromasil C。(250 mm×46 miD，5 pro)色譜柱，以乙腈(A)一水(B)為流動相梯度洗脫；體積流量為10 mLmin，柱溫為35，檢測波長為220 nm(白術內酯I、III)、276 nm(白術內酯I)，進樣量10uL。結果：白術內酯I.II.III分別在114114、0776"-'776、321321 ugmL與峰面積呈良好的線性關系。結論：白術顏色白者與顏色棕者，其中白術

2、內酯I.II.III含量差異較大，尤其白術內酯I.III含量白者多于棕者，故而白術白者質量優于棕者。關鍵詞：白術，I白術內酯I，斷面顏色，白術內酯II，白術內酯III，高效液相色譜，含量測定- II -目錄目錄摘 要I1 引言11.1白術簡介11.2化學研究11.3.1、利尿作用11.3.2調節免疫11.3.3抗凝血作用21.3.4抗腫瘤作用21.3.5對胃腸運動的影響21.3.6抗菌作用21.4總結22實驗部分32.1儀器與藥品32.2方法與結果32.2.1色譜條件32.2.2對照品溶液的制備32.2.7穩定性試驗42.2.8加樣回收率試驗43分析與討論53.1檢測器的選擇53.2吸收波長的

3、確定53.3流動相的選擇53.4提取方式的選擇53.5 白術藥材的來源與選取53.6 測量指標的選擇54結論7參考文獻：81 引言1 引言1.1白術簡介白術為菊科植物白術Atractylodes macrocephalaKoidz的干燥根，主產地為浙江，安徽、此外河北，湖北、湖南及西南地區等省。味甘，性溫，入脾胃經。具有補氣健脾，燥濕利水，止汗的作用1。其主要活性物質為揮發油個類酯類成分。其中的內酯類成分具有抗炎、抗腫瘤的作用，還具有調節胃腸道功能和促進營養物質吸收的作用，尤其以白術內酯I的作用明顯。白術有多種炮制品，有白術、清炒白術、麩炒白術、土炒白術。生白術臨床常被用以健脾祛濕、利水消腫，

4、炒制可以制其燥性、增強其焦香之氣，增強健脾益氣之功能，麩炒可以增強其健脾消食的作用，土炒白術則多用于補脾陽，止瀉。為有效控制白術質量，本實驗采用HPLC法測定了白術不同斷面顏色白術中的白術內酯I、II.II的含量I,建立白術外觀與內在質量的關系，使白術的內在質量更直觀，從而更好地指導用藥者的用藥，保證臨床用藥的效果。1.2化學研究白術主要含揮發油、內酯類化合物和多糖類成分。其中揮發油在白術飲片中占比大約為1.4%,其主要成分有蒼術酮、蒼術醇等,其中蒼術酮在揮發油中含量占比為 31%-61%,揮發油中相對含量較高的還有 2-(2-乙氧基-3,4-二甲基-2-環己烯)-1-甲基-呋喃，其占揮發油的

5、17%左右,-3,4-二甲基-苯丁酸異丙酯約占 16.46%左右。利用氣象色譜法提取白術的揮發油，其中相對含量最高的是蓬莪術烯(48%左右),其次含量較高的有吉馬烯(6.6%左右),1-亞甲基-4-甲基-7-1-甲基乙烯基-十氫萘(6%左右),鄰苯二甲酸二丁酯(11%左右)等。對產于浙江的白術,以水蒸氣蒸餾和超臨界萃取法提取其中的揮發油,含量最高者都是蒼術酮。 此外，從白術中還含有多種內酯類成分。其中有白術內酯I(atrcatylenolide )、白術內酯(atractylcnolide)、白術內酯(atractylcnolide )的含量較高，此外還含有白術內酯(atractylenoli

6、de )、雙白術內酯、8,9-環氧白術內酯、4,15-環氧羥基白術內酯等微量內酯類成分。其中白術內酯 I 的含量在 0.1%左右，白術內酯的含量在 0.0150%0.2230%之間。除此以外,多糖類成分3如白術三醇及維生素 A 等也是白術中含有的活性物質。 1.3藥理研究 1.3.1、利尿作用給予正常大鼠口服白術水煎液，可以使尿中電解質排除量增加，從而增加了尿液的排泄量。其原理可能為其中桉葉醇抑制了鈉鉀ATP酶，從而增加了體內電解質，尤其是鈉的排除，繼而增加排尿。1.3.2調節免疫白術水提液中的成分對機體免疫功能有促進作用。白術能提高巨噬細胞活性，活化中性粒細胞，提高外周血液中白細胞的數量，增

7、強小鼠NK細胞的細胞毒活性。促進T淋巴細胞的增殖和轉化，提高T細胞總數和輔助性T細胞的數量。增強B淋巴細胞免疫功能，促進抗體生成，提高受環磷酰桉抑制小鼠的血清凝結素，溶血素抗體的水平。從而具有一定的免疫調節作用，可增強機體對抗能力。1.3.3抗凝血作用白術對血小板聚集有明顯的抑制作用，白術煎劑0.5g/kg灌胃14周，能顯著延長大鼠凝血酶元的時間。其作用較雙香豆素弱，但較Butadio下降，34小時內未見恢復。1.3.4抗腫瘤作用白術揮發油和內酯成分不僅在體外對腫瘤細胞有抑制作用，可以抑制腫瘤細胞的增殖，還能提高機體對抗腫瘤細胞的能力，增強機體對腫瘤細胞的毒作用。所以有一定程度的抗腫瘤作用。1

8、.3.5對胃腸運動的影響白術對回腸個小腸的運動具有雙向的特點。在小劑量下，白術水提液能抑制回腸平滑肌的收縮，而給予實驗動物濃度較高，劑量較大的白術量時，發現可以增強回腸平滑肌的收縮。白術對于小腸運動的影響與實驗動物的狀態有關，實驗動物小腸運動低下時，其可以增強收縮，實驗動物亢奮時，其可以抑制收縮。此作用的機制較為復雜，可能與白術中成分對平滑肌乙酰膽堿受體的作用有關。1.3.6抗菌作用研究發現，白術水提液能在體外多種細菌生長，而不能殺死細菌。1.4總結白術為我國常用中藥材，為名副其實的大宗藥材。其最常被用于各類消化系統疾病。正因為其用量大，所以不僅要從內在制定其質量標準，也須建立其外觀與內在質量

9、的關系，以指導患者用藥。然而平常市面白術質量參差不齊，顏色也不相同。藥典中記白術為黃白至淡棕色，此兩種顏色相差懸殊，以往古籍中也有記載越白越好10。因為白術最常被用于消化系統疾病，而其中內酯類成分為作用基礎，也因為其內酯類成分為其獨有的，與蒼術相區別的物質，故而本實驗選取其中白術內酯I,II,III為指標，探討其不同顏色的質量的優劣，也也驗證古籍所載正確與否。- 8 -2實驗部分2實驗部分2.1儀器與藥品美國Agillent 1100高效液相色譜儀，二級陣列檢測器，1100色譜工作站。白術內酯I、II、III對照品購自中國藥品生物制品檢定所，批號分別為1396060123、1397060123

10、、1398060123；乙腈和甲醇皆為色譜純，水為純化水。白術藥材購于西安雨潤中藥材專業市場，經陜西中醫藥大學鑒定教研室鑒定為菊科植物白術Amacrocephala Koidz的干燥根。2.2方法與結果2.2.1色譜條件色譜柱為C18(250 mm×46 mm，5 tim)；流動相為乙腈(A)一水(B)，梯度洗脫：016 min，6076A，1618min76-100A；1830 min，100A；流動相的體積流量為1.0 mLmin；柱溫為35；檢測波長為220nm(白術內酯I、III)、276 nm(白術內酯II)；進樣量為10 uL。理論塔板數以白術內酯I計算應該高于3 000

11、。色譜圖見圖l2.2.2對照品溶液的制備稱取白術內酯I、II.III對照品1.44mg.0.78mg.3.21mg精密稱定，置于10 mL的容量瓶中，以甲醇溶解并添加至刻度，搖勻。2.2.3供試品溶液的制備：稱取兩種白術飲片約1 g，置于50 mL規格的錐形瓶中，加入甲醇50 mL，超聲提取30 min，過濾，濃縮，轉移至100ml的容量瓶，再加入甲醇定容至100 mL，搖勻，即得。規定以顏色白者制得的供試品為供試品1，以顏色淡棕色者制得的為供試品2。2.2.4線性關系考察分別精密吸取白術內酯I、II.III混合對照品儲備液01、03、05、10、20、50.70.9 ，1.0.1.25ml置

12、于10ml的容量瓶中，加入甲醇定容，搖勻。在以上色譜條件下進行分析，分別以峰面積(y)為縱坐標，以質量濃度(x)為橫坐標，進行線性回歸，繪制標準曲線，得回歸方程如下:白術內酯I、II、III分別在115115、0775775、320320ugmL與峰面積呈良好的線性關系，回歸方程分別為Y=4 350X+7715、Y=2 878X+5228、y=8 038X+1494，r分別為0999 9.0.9998.0.9999。2.2.5精密度試驗精密吸取兩種白術供試品溶液，在以上色譜條件下連續進樣6次，分別測定白術內酯I、II、III的峰面積，結果如下：相對標準偏差分別為0.46、037、052。2.2

13、.6重現性試驗取生白術飲片6份各約2.0 g，精密稱定，以甲醇聲提取，制備供試品溶液，在以上色譜條件下測定其峰面積，計算其中白術內酯I、II、III的質量分數，結果如下：其相對標準偏差分別為I.23、255、225。2.2.7穩定性試驗取白術供試品溶液，分別于0、l、3、5、10、15、24、32、48 h在上述色譜條件下進樣分析，分別計算白術內酯I、II、III的質量分數，結果如下:其相對標準偏差分別為163、099、058，結果表明供試品溶液在48 h內穩定。圖I 白術內酯I.III(A.220nm)和白術內酯II(B.276nm)和樣品(C.D)HPLC圖譜2.2.8加樣回收率試驗精密稱

14、取白術供試品粉末約1.0g，安供試品制備方法提取，分別精密加入1.0，2.0，3.0混合對照品溶液，制備供試品溶液，在各水平下平行操作3份，在供試品高效液相色譜條件下進樣分析，計算回收率。結果如下：白術內酯I、II、III的平均回收率分別為96.33、101.59、99.78，相對標準偏差分別為1.56、1.39、2.06。2.2.9樣品測定取各兩種白術制備供試品溶液，進行測定，進樣10UL，計算白術內酯I、II、III的質量分數，結果見表1。 表1不同斷面顏色白術中自術內酯I、I、的測定結果供試品白術內酯I(mg/g)白術內酯II(mg/g)白術內酯III(mg/g)內酯總量(mg/g)10

15、.60980.31900.79611.724920.47530.26900.45211.19643 分析與討論3分析與討論3.1檢測器的選擇光電二極管陣列檢測器可同時檢測190-800nm全部紫外光和可見波長范圍內的信號，進行一次檢測，可以同時獲得多個吸收。由于本實驗需要檢測白術內酯I.II.III三個成分，故而選擇PDAD檢測器可以方便地采集到每個成分的吸收數據，可以得到每一個峰的在線紫外吸收圖，所以選擇。方法學的考察所用樣品測定提取方法的方法學考察均符合要求，簡化了白術測定的繁瑣步驟，為探索制訂完善的白術原藥材的質量標準提供了依據。3.2吸收波長的確定利用二極管陣列裝置同時獲得樣品的色譜圖

16、及每個色譜組分的光譜圖，即三維時間色譜光譜圖，在通過計算不同波長的相對吸收對比，對每個色譜峰的指定位置實時記錄吸收光譜圖，并計算最大吸收波長。最后確定白術內酯I.III在220nm處有最大吸收，白術內酯II在276nm處有最大吸收。 3.3流動相的選擇本實驗曾嘗試以乙腈一水、甲醇一水等不同的流動相梯度洗脫供試品，發現以甲醇一水為流動相獲得的峰形最為合適；由于本實驗須同時測定3個內酯成分，所以本實驗嘗試了不同的流動相比例，結果發現以甲醇水為流動相梯度洗脫，三種成分的分離較好，3個成分的分離度皆大于15，拖尾因子也在095105之間。3.4提取方式的選擇分別考察了用不同溶劑，以水煎法，超聲法、回流

17、法等不同方式提取，并且在不同的提取時間下，提取不同的次數的考察，結果發現，以甲醇為容劑，采用超聲提取法，提取30 min，提取一次，為完全提取白術的最適合的提取條件。3.5 白術藥材的來源與選取本實驗目的在于研究不同斷面顏色的白術，其內在質量的差異，所以須確保其他條件的一致。所以在購買原料的時候，特地保證了兩種白術的產地.質地.大小等條件的一致性，從而讓白術斷面的顏色成為本實驗的唯一影響白術內酯類成分含量的因素。3.6 測量指標的選擇白術藥材中含有多揮發油，內酯類，多糖類等多種成分。其中揮發油類以蒼術酮的含量最高，而蒼術酮為白術與蒼術的共有成分，而且蒼術中的含量遠高于在白術中的含量，故而未選擇

18、蒼術酮為本實驗的測量指標。類酯類成分中以白術內酯I,II ,III的含量最高，并且此三種成分具有很高的生理活性，對消化系統疾病有顯著的作用，而且現實中白術也常被用于消化系統疾病11，故而本實驗選取白術內酯I.II.III為指標，判斷白術的質量。4 結論4結論 本實驗分別以HPLC法測定了不同斷面顏色的兩種白術中白術內酯I.II.III的含量，結果發現，在其他條件一致的情況下，斷面顏色白的白術，其中白術內酯含量均明顯高于斷面顏色淡棕色的白術，其內酯總含量也高于淡棕色的，尤其白術內酯I和白術內酯III，二者的差異較大。所以由此看來斷面顏色白的白術的質量好于棕色的白術。參考文獻參考文獻：1 中國藥典s一部.北京：中國中醫藥科技出版社，2015.952 毛俊浩,呂志良,曾群力,等. 白術多糖對小鼠淋巴細胞功能的調節J. 免疫學雜志,1996,12(4)：2333余上才,章育正,趙慧娟,等.枸杞子和白術免疫調節作用的實驗研究J.上海免疫學雜志,1994,14(1)：124李巖,孫思予,周卓.白術對小鼠胃排空及小腸推進功能影響的實驗研究J.遼寧醫學雜志,1996,16(4)：1865馬曉松,樊雪萍,邢治善.白術促進小鼠腸胃運動機制的探討J.中*國醫院藥學雜志,1995,15(4)：1676馬曉松,樊雪萍,陳忠,等.白術對動物胃腸