1、Janus green B中文名稱：詹納斯綠B英文名稱：Janus green B 別名：健那綠；雙氮嗪綠。 蘇鐵木精英文別名: Janus green；Diazine green；Diazine green S 。 化學式：C30H31N6Cl定義：主要用于生物活體染色的一種堿性偶氮吖嗪染料。能穿過細胞膜，進入細胞特異地顯示線粒體。 詹納斯綠B是一種活體染色劑，專一用于線粒體的染色。它可以和線粒體中的細胞色素C氧化酶結合，從而出現藍綠色。原理是線粒體中細胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態即有色狀態呈藍綠色，而在周圍的細胞質中染料被復原，成為無色狀態。必須指出的是，只有具有活性的細胞色素C氧化酶才

2、能夠把詹納斯綠B氧化，從而使它顯出顏色，因此，在實驗過程中務必保持所取的材料的活性。通常，需要把生物材料置于04的冰水浴低溫中，并且操作要迅速。Cas 編號:2869-83-2EINECS 編號:220-695-6 MDL 編號:MFCD00011758Beilstein 編號:分子式:C30H31ClN6分子量:511.06中文別名: 詹姆斯綠B，健那綠，健那綠B，雙氮嗪綠，真那氏綠，詹姆斯綠，煙魯綠，3-(二乙基氨基)-7-4-(二甲基氨基)苯基偶氮-5-苯基吩嗪翁氯化物 英文別名:3-Diethylamino-7-(4-dimethylaminophenylazo)-5-phenylph

3、enazinium chlorideDiazin Green SUnion Green BC.I. 11050 性狀:棕色呈深棕色結晶性粉末，溶于水呈藍色，微溶于醇。常用作線粒體專一性活體染色劑.線粒體中細胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態(即有色狀態)呈藍綠色,而在周圍的細胞質中染料被復原,成為無色狀態. 用途:用于線粒體活體染色，真菌和原蟲染色，胚胎切片染色，以及用作氧化復原指示劑和銅的電鍍添加劑。貯存:密封枯燥保存。聯合國編號:Risk:Safety:S24/25 Hazard:小鼠肝細胞線粒體的Janus green B染色及觀察1. 實驗目的：學習超活染色的原理及方法，用詹納斯綠B給小鼠

4、的肝細胞線粒體染色。 2. 實驗用品：1 儀器及器材：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、手術剪、解剖盤、膠頭滴管、雙凹載玻片 2 實驗藥品：蒸餾水、Ringer液、詹納斯綠B染液 3 實驗材料：小鼠 3. 實驗原理： 1 活體染色又稱超活染色，是指對生命有機體的細胞或組織能著色又無毒害的一種染色方法。這種染色方法常用的是化學染料。 目的：顯示生活中細胞的某種結構，不影響細胞的生命活動或產生任何的物理、化學變化以致細胞的死亡。 應用：研究生活狀態下細胞的形態結構和生理病理狀態。 2 通常把活體染色分為體內活體染色與體外活體染色兩類。體外活體染色又稱超活染色，它是由活的動、植物別離出局部細胞或組織小塊

5、，以染料溶液浸染，染料被選擇固定在活細胞的某種結構上而顯色。活體染料之所以能固定、堆積在細胞內某些特殊的局部，主要是靠染料的“電化學 特性。堿性染料的膠粒外表帶陽離子，酸性染料的膠粒外表帶有陰離子，而被染的局部本身也是具有陰離子或陽離子，這樣，它們彼此之間就發生了吸引作用。但并非任何染料均可用于活體染色，理論上應選擇那些對細胞無毒性或毒性極小的染料，且使用時需要配成稀淡的溶液。一般說來，最為適用的是堿性染料，這可能是因為它具有溶解在類脂質(如卵磷脂、膽固醇等)的特性，易于被細胞吸收。詹納斯綠B(Janus green B)和中性紅(neutral red)兩種堿性染料是活體染色劑中最重要的染料

6、，對于線粒體和液泡系的染色分別具有專一性。 3 選擇活體染料的原那么： 性質：有電化學特性 低毒、無毒 低濃度：如實驗中使用的是1/5000的詹納斯綠B染液 專一、特異性：中性紅可特異性地對植物液泡染色 常以堿性染料為主，因為堿性染料多可溶于類脂，容易穿膜。 4. 實驗步驟： 1 用斷頭法處死小鼠，置于解剖盤中。剪開腹腔，取出肝臟。選取邊緣較薄的肝組織0.5cm2放入小燒杯中，用Ringer液沖洗去血污。 2 滴加1/5000的詹納斯綠B染液于雙凹片的凹穴中，再將上述洗凈肝組織移入染液染色2030mins。以組織邊緣被染成藍綠色為準。 3 吸去染液，重新把組織置于小燒杯中。滴加Ringer液約

7、0.5mL，用剪刀充分剪碎組織制成懸液。 4 靜置上述懸液12mins，取靜置好的懸液滴片，加蓋玻片，高倍鏡下觀察。 5. 實驗結果：視野中可見比擬大的、呈圓形的肝細胞，此種細胞內有一些小顆粒被染成藍綠色，就是線粒體。視野中也有一些較小的細胞，有些可看到紅色，是血細胞。 10*40顯微鏡下觀察： 6. 分析與討論 1 結果分析：局部肝細胞的線粒體被染成綠色 2 考前須知 取肝組織：取肝組織時，應注意選擇肝的邊緣局部，這一局部組織的厚度差比分剪碎組織制成懸液。 3 靜置上述懸液12mins，取靜置好的懸液滴片，加蓋玻片，高倍鏡下觀察。 5. 實驗結果：視野中可見比擬大的、呈圓形的肝細胞，此種細胞

8、內有一些小顆粒被染成藍綠色，就是線粒體。視野中也有一些較小的細胞，有些可看到紅色，是血細胞。 10*40顯微鏡下觀察： 6. 分析與討論 GENMED線粒體功能詹納斯綠B染色試劑盒產品說明書中文版主要用途 GENMED線粒體功能詹納斯綠B染色試劑是一種旨在通過一種毒性較小的堿性染料特異性地使具有活性功能的線粒體呈現藍綠色，從而判斷線粒體功能的完整性的權威而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種線粒體動物、人體、植物、昆蟲等制備物的功能檢測。產品嚴格無菌，即到即用，活體檢測，操作簡捷，性能穩定。 技術背景線粒體是細胞中重要的細胞器，其主要功能是提供細胞內各種物

9、質代謝所需要的能量。線粒體大量存在于代謝旺盛的細胞中，如動物的心肌、肝、腎等器官和組織的細胞中。大量制備線粒體就是從這些器官組織中提取，或從組織培養細胞中提取。在光學顯微鏡下線粒體呈現為顆粒狀、棒狀或彎曲細線。詹納斯綠BJanus green B，是一種毒性較小的堿性染料。它可以對活細胞進行直接染色，在細胞質內可以看到被染成藍綠色的線狀或顆粒小體的線粒體。線粒體所以能顯示出藍綠色，是由于線粒體中具有細胞色素氧化酶系統，它是染料始終處于氧化狀態呈藍綠色，而在周圍的細胞質中的染料被復原呈無色。 產品內容 GENMED保存液Reagent A 毫升GENMED染色液Reagent B 毫升GENME

10、D清理液Reagent C 毫升 保存方式 保存在20冰箱里；GENMED染色液(Reagent B)，防止光照；有效保證6月 用戶自備 毫升離心管：用于線粒體染色的容器 光學顯微鏡：用于線粒體染色觀察分析實驗步驟 實驗開始前，將 冰箱里的試劑盒中的GENMED染色液Reagent B置于冰槽里融化，并放在暗室里。然后進行以下操作。 一、純化線粒體染色 1 從純化的線粒體樣品中移出 至 微升含 細胞中提取的線粒體到新的預冷的 毫升離心管，置于冰槽里注意：線粒體須均勻分布，沒有聚集成團。 2 參加等量微升的GENMED染色液Reagent B，輕柔混勻 。3 放進暗室里，在室溫下孵育1分鐘。 4

11、 即刻移取 微升到載玻片上，放上蓋玻片 。5 在光學顯微鏡油鏡下進行觀察：功能完整的線粒體呈現藍綠色圓形或橢圓形顆粒注意：可見藍綠色漸漸變淡現象。 6 籃綠色強度顯著減弱或呈現無色，說明線粒體細胞色素氧化酶系統功能不全或功能喪失。 二、活體細胞染色1 將待測細胞 X 細胞移入到1.5毫升離心管 2 放進微型臺式離心機離心1分鐘，速度為500g或2000RPM；例如 eppendorf 5415 3 小心抽去上清液 4 參加 微升GENMED清理液Reagent C或GENMED保存液Reagent A 5 參加 微升GENMED染色液Reagent B，充分混勻 6 放進暗室里，在冰槽里孵育

12、分鐘 7 即刻移取 微升到載玻片上，放上蓋玻片 8 在光學顯微鏡油鏡下進行觀察：功能完整的線粒體呈現藍綠色線狀或顆粒小體。 9 籃綠色強度顯著減弱或呈現無色，說明線粒體細胞色素氧化酶系統功能不全或功能喪失 。考前須知 1 本產品為20次活體細胞或400次純化線粒體操作 2 所有操作均須無菌狀態下進行 3 線粒體樣品操作須在低溫下進行，且操作快速 4 操作時，須戴手套 5 建議染色完成后，即刻進行顯微鏡觀察分析 6 孵育時，須防止光照 7 本公司提供系列線粒體試劑產品 質量標準 1 本產品經鑒定性能長期穩定 2 本產品經鑒定顯色清晰 使用承諾 杰美基因秉著“信譽至上、客戶滿意、質量承諾的宗旨為我

13、們的用戶提供優質產品和效勞。用戶收到貨后，應按照產品說明書上的規定妥善保管并在有效期內使用。我們的產品在銷售前已作嚴格的質量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內假設發現確屬本產品的質量問題，請立即以書面形式實驗報告與本公司聯系，并將該產品退回，經檢驗確系產品質量所致，本公司負責更換產品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承當由此造成的損失。 友情提醒 IF IT DOESNT WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。 訂購信息 編號 名稱 規格 GMS10015 GENMED線粒體功能詹納斯綠B染色試劑盒 20/

14、400次 GMS10015A GENMED保存液Reagent A 10毫升 GMS10015B GENMED染色液Reagent B 10毫升 GMS10015C GENMED清理液Reagent C 10毫升 產品編號 名稱 規格 GMS10006.1 動物細胞/組織線粒體粗提別離試劑盒 10/50次 GMS10006.2 動物細胞/組織活性線粒體別離試劑盒 10/50次 GMS10006.3 動物細胞/組織高質純化線粒體別離試劑盒 10次 GMS10006.4.1 動物硬組織線粒體別離試劑盒 50次 GMS10006.4.2 動物硬組織線粒體別離試劑盒 50次 GMS10006.4.3

15、動物硬組織線粒體別離試劑盒 10次 GMS10013.1 純化線粒體內膜功能/膜電位測定試劑盒 100次 GMS10013.2 活體細胞線粒體內膜功能/膜電位測定試劑盒 20次 GMS10013.3 線粒體內膜功能/膜電位測定試劑盒 50次 GMS10013.4 活體組織線粒體內膜功能/膜電位測定試劑盒 10次 GMS10014.1 線粒體外膜功能檢測試劑盒 20次 GMS10014.2 細胞色素C氧化酶活性測定試劑盒 20次 GMS10014.3 細胞/組織懸液細胞色素C氧化酶活性測定試劑盒 20次 GMS10014.4 純化細胞色素C氧化酶活性測定試劑盒 20次 GMS10015 線粒體功能詹納斯綠BJGB染色試劑盒 20/400次 GMS10016.1 細胞內活性氧ROS高質熒光測定試劑盒 20次 GMS10016.2 細胞內活性氧ROS初級熒光測定試劑盒 100次 GMS10016.3 活體組織活性氧ROS高質熒光測定試劑盒 8/20次 GMS10016.4 活體組織活性氧ROS初級熒光測定試劑盒 40/100次 GMS10016.5 冰凍切片活性氧ROS高質熒光測定試劑盒 50次 GMS10016.6 冰凍切片活性氧ROS初級熒光測定試劑盒 50次 GMS10067 細胞內活性氧ROS比色法定量檢測試劑盒