1、傳染病的檢測技術傳染病的檢測技術進展及質量控制進展及質量控制 . 伴隨醫療衛生事業的開展 ，人們對傳染病的防治也越來越重視 。在醫院中大量傳染病標本的檢測工作也變得十分重要。. 傳統的檢測方法多種多樣，對于很多疾病的診斷有相當大的輔助作用，傳染病病原體的準確檢測是傳染病有效防控的前提，也是合理用藥的根底。然而，傳統的病原體別離、 培養等診斷方法不能完全滿足臨床治療和疾病控制的需要。新開展的傳染病診斷技術可有效彌補傳統方法的缺乏。.傳統檢測方法.乙型病毒性肝炎的病原學檢查及其意義 .電鏡下，HBV感染者血清中存在三種形式的顆粒： 1.小球形顆粒：直徑15-25nm，數量最多 2.管形顆粒：直徑2

2、2nm，長50-230nm 3.大球形顆粒：直徑42nm，量少，完整顆粒，有傳染性僅由HBsAg構成的空心顆粒，無核酸、無傳染性生物學特征.大球形顆粒是完整的乙型肝炎病毒HBV顆粒，又稱Dane顆粒，分為包膜和核心兩局部包膜：含HBsAg、糖蛋白與細胞脂質核心：含環狀雙股DNA、DNAP、HBcAg和HBeAg，是病毒復制的主體HBsAgHBeAgDNADNA-PHBcAgDane顆粒生物學特征.HBV基因組又稱HBV DNA環狀局部雙股DNA全長2182bp 長的負鏈L 分S、C、P、X區 重疊，高利用率短的正鏈S長度可變50-80%生物學特征.HBV基因組結構 編碼 pre-S1 pre-

3、S1蛋白 pre-S2 pre-S2蛋白S HBsAgpre-C HBeAgC HBcAgP DNAPX HBxAg生物學特征.生物學特征.生物學特征.生物學特征.開放讀碼框架ORF及編碼蛋白S區 前S1區：前S1蛋白pre-S1 陽性提示HBV存在和復制，慢性化 前S2區：前S2蛋白pre-S2 陽性提示HBV復制 S區：HBsAg：感染標志 屬決定簇“a亞型決定簇“d/y和“w/rC區 前C基因：HBeAg：陽性提示患者高感染低應答率 C基因：HBcAg：免疫原性強生物學特征.開放讀碼框架ORF及編碼蛋白P區 最長，編碼多種功能蛋白，參與HBV復制 DNA多聚酶：復制的主要酶體，有逆轉錄功

4、能 RNA酶HX區 HBxAg ：具反式激活作用，在HCC發生中起重 要作用生物學特征.乙肝五項檢查是用來判斷是否感染乙肝，粗略估計病毒復制水平的初步檢查，雖然工程少，檢查簡單，但是意義非常重要。乙肝五項檢查分別是：1.外表抗原(HBsAg) 2.外表抗體(抗抗原抗體(抗HBe) 5.核心抗體(抗HBc 乙肝五項又叫乙肝兩對半。病原學檢查.乙型肝炎病毒血清學檢測臨床意義.乙肝五項的檢測包括定性檢測和定量檢測； 定量檢測方法包括：化學發光免疫分析法CLIA、電化學發光免疫分析法、時間分辨熒光分析法TRFIA、放射免疫分析法RIA、微粒子酶免分析MEIA等定性檢測包括酶聯免疫分析法ELISA、乳膠

5、分析法、金標快速法等。病原學檢查.1.乙肝五項定量檢查可以動態觀察療效和對乙肝病情進行監測。乙肝五項定量檢查分析HBSAg和HBsAb濃度的變化，可以預見急性乙肝是不是處在恢復期。乙肝五項定量檢查分析HBeAg和HBeAb濃度的變化，可以反映病情變化和治療作用。HBcAb濃度的上下能夠反映病毒感染的狀況，高濃度的HBcAb提示乙肝急性感染;低濃度通常為恢復期或既往感染，有利于對慢性肝炎活動性和非活動性的判斷，可以用于慢性乙肝的分類。病原學檢查.2.乙肝五項定量檢查分析能夠對抗體是不是真正具有中和HBV的免疫力作出正確評價，對乙肝的預防起到監督作用。HBsAb的含量在10 mIU/ml以上的患者

6、在用酶聯免疫吸附劑ELISA檢測查就可呈HBsAb陽性結果，但并不提示機體都一定具有免疫力，而HBsAb的含量在 10 mIU/ml-100 mIU/ml之間的樣本，定性雖為陽性，但此時機體對乙肝病毒的免疫能力較弱，甚至不能預防HBV感染，仍然有感染HBV的危險。作為定量檢查，依據 HBsAb的含量能夠判斷機體對HBV的免疫狀態及乙肝疫苗的免疫效果。病原學檢查.放射免疫技術優點： 1.是一項較為成熟的診斷技術，其夾心法、競爭法的標記原理為以后的檢測技術的開展奠定了根底。 2.其精度可達10-12mol/L。缺點： 1.使用的放射性物質125I對環境造成了污染 2.對操作者的身體健康造成了危害；

7、 3.試劑有效期短，試劑盒的批間、批內變異較大，標準曲線有效期短，必須每次定標，造成浪費； 4.該法操作繁瑣，出報告時間長。病原學檢查.優點：1.在于該法防止對環境和人體的危害；2.操作簡便并且有效期較長。缺點：1.由于該法酶的純度和反響過程容易受環境因素影像，導致其穩定性不好；2.該法靈敏度、重復性不及放射免疫技術，精度為10-9mol/L，易造成漏檢和假陽性。酶聯免疫分析法ELISA病原學檢查.化學發光法優點：1.單個樣本檢測速度快，適合做急診；2.靈敏度較高，精度可達10-15mol/L3.自動化程度高。缺點：1.該法發光過程短，樣品不能重復檢測2.本底較高，在超微量分析及早期診斷方面能

8、力缺乏3.試劑價格較高病原學檢查.時間分辨熒光免疫法技術特異性高，線性范圍更寬；可以反復檢測，并且其重復性、穩定性好，試劑保質期至少1a，標準曲線保存時間長，同一批次試劑只需做一條標準曲線即可，其精度可達10-18mol/L，其定量結果更是肝移植、乙肝疫苗接種療效觀察等臨床必須的檢查。病原學檢查. 臨床上采用定量測定乙肝五項指標更能準確的反響乙型肝炎臨床變化，以及乙肝患者的治療，預后情況。現在臨床醫生對乙肝五項定量測定已經有了普遍的認識，也越來越被患者接受。病原學檢查.HBV DNA 是病毒復制和傳染性的直接標志。目前常用聚合酶鏈反響PCR。聚合酶鏈式反響PCR是一種用于放大擴增特定的DNA片

9、段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點，是能將微量的DNA大幅增加。病原學檢查.HBV-DNA定量檢查就是檢驗乙肝病毒在血液中的含量。通過乙肝病毒含量的檢測，可以了解患者體內的病毒含量，病情開展狀況，對患者的治療有很好的指導作用。 病原學檢查. HBV-DNA定量檢查的正常值是1000cps/ml。 當HBV-DNA定量檢查值小于1000cps/ml時，說明體內HBV-DNA為陰性，傳染力弱。 當HBV-DNA定量檢查值大于1000cps/ml時，說明體內HBV-DNA為陽性，病毒仍然較多，傳染力強。病毒的數量與某些藥物的療效相關。例如，干擾素治療對肝炎病毒高

10、拷貝者不敏感，低拷貝者敏感；而有些藥物那么具有顯著降低病毒高拷貝的作用。病原學檢查.乙型肝炎病毒前1抗原乙型肝炎病毒前1抗原PreS1-Ag是存在于均有傳染性的完整Dane顆粒和管型顆粒上最外端的外膜蛋白，前S1蛋白抗原在病毒侵入肝細胞過程中起重要作用。國內報道局部HBeAg陰性患者仍有病毒復制，而前S1抗原可作為HBeAg陰性慢性乙型肝炎患者肝細胞損害的一項指標。作為HBV感染、復制和乙肝患者診斷、治療和預后的一個重要標志，在多數醫院廣泛開展，但其臨床價值仍沒有被充分認識。病原學檢查.國內外對前蛋白/抗前蛋白臨床意義的根本共識一前蛋白前1病毒蛋白出現在急性 HBV 感染的最早期，是病毒去除的

11、最早跡象。前 1 病毒蛋白持續存在者將開展至慢性肝炎。前1 病毒蛋白與HBV-DNA, HBeAg 高度相關。與肝內HBV-DNA, HBcAg 檢出高度相關。在抗HBe(+)的HBV感染者中，檢出前1蛋白可說明病毒的復制。病原學檢查.病毒附著于肝細胞膜上，最重要的介導部位是前1 蛋白的 氨基酸 (AA) 21-47片段。變異的病毒只要這 一區段完好就有傳染性。僅僅是對 (AA) 21-47 肽的 前1抗體才能中和病毒。前 S1 蛋白顆粒外表具有高度的免疫原性，常作為 乙肝疫苗的主要成分。 前 S1 抗原主要存在于血清中完整 HBV 外表。病原學檢查.PreS1抗原試劑盒的臨床應用1. 1.

12、對擬查對擬查“二對半的患者，同時加查二對半的患者，同時加查PreS1PreS1， 可起到確診與補充的作用，如感染與復制、可起到確診與補充的作用，如感染與復制、 急性與慢性、預后與療效等；急性與慢性、預后與療效等；2. 2. 非肝炎住院病人常規檢測，非肝炎住院病人常規檢測，PreS1 PreS1 比比“二對二對 半半 更有意義；更有意義；3. 3. 獻血員篩查，檢測前獻血員篩查，檢測前S1S1可減少乙肝病毒感染可減少乙肝病毒感染 者漏檢；者漏檢；4. 4. 創傷性檢查病員應檢測創傷性檢查病員應檢測PreS1PreS1，如內窺鏡檢，如內窺鏡檢 查、查、 牙科手術等。牙科手術等。病原學檢查.乙型肝炎

13、病毒血清學檢測的臨床意義.乙肝大蛋白HBV 外表抗原通過啟動子表達后，會產生大蛋白HBV-LP、中蛋白HBV-MP以及小蛋白HBV-SP三類產物;HBV-LP氨基酸序列中包括Pre-S1、Pre-S2和S局部；產物中蛋白和產物小蛋白形式主要為小球型病毒顆粒，其余兩種病毒顆粒管形顆粒、Dane顆粒那么是由三類產物共同組成，且Dane顆粒的組成取決于HBV-LP。因此HBV-LP被認為是一種能反映HBV 復制和Dane顆粒存在的標記物。病原學檢查.病原學檢查.HBV-LP有直接的肝細胞毒性，致使肝細胞凋亡而快速死亡。HBV-LP對HBV復制過程有反式激活作用，并與病毒顆粒從細胞內釋放調節有關。所以

14、，檢測HBV-LP用于臨床判斷體內HBV 復制和治療預后有一定意義。病原學檢查.病毒性肝炎丙肝 丙型肝炎HC是一種對人類危害重大的疾病，HCV感染的慢性化發生率明顯高于乙型肝炎，較乙型肝炎易早期出現肝硬化、HCC，因此，HCV的檢測對丙型肝炎病毒感染的早期診斷和指導臨床治療有重大的意義。到目前為止 ,丙型肝炎檢測技術主要有抗 - HCV檢測、HCV - RNA核酸擴增檢測、HCV基因分型、HCV核心抗原的檢測以及同時檢測抗 - HCV和 HCV核心抗原等。.抗抗 - HCV的檢測的檢測 抗抗 - HCV的檢測化學發光免疫分析法的檢測化學發光免疫分析法CIA，或者酶免疫法，或者酶免疫法EIA是最

15、早出現的是最早出現的 HCV檢測技術檢測技術 , 可用于可用于HCV感染者的篩查。感染者的篩查。快速診斷測試快速診斷測試(RDTs)可以被用來初步篩查抗可以被用來初步篩查抗 HCV，對于抗體陽性者，應進一步進行，對于抗體陽性者，應進一步進行HCV RNA檢測。檢測。 然而，對于免疫功能不正常的然而，對于免疫功能不正常的 HCV感染感染者者 ,那么不能檢出抗那么不能檢出抗 - HCV。另外。另外 ,由于由于“窗窗口期口期 的存在的存在 ,仍有一定的漏檢率仍有一定的漏檢率 。對于抗。對于抗 - HCV的檢測的檢測 ,目前仍有改進的潛力。目前仍有改進的潛力。HCV抗原的檢測抗原的檢測 在缺乏在缺乏H

16、CV RNA檢測條件時，可考慮進行檢測條件時，可考慮進行HCV核心抗原的檢測，用于慢性核心抗原的檢測，用于慢性HCV感染者感染者的實驗室診斷。的實驗室診斷。. HCV - RNA核酸擴增檢測技術核酸擴增檢測技術 (NAT) HCV-RNA是HCV感染、傳染性和病毒復制的標志 HCV-RNA水平直接代表患者病毒血癥水平 HCV-RNA檢測可將窗口期由6-8周縮短至12天 HCV-RNA檢測是丙肝早期篩查、診斷和治療管理最關鍵的指標 準確的HCV-RNA檢測是應答指導治療策略的保障，可以幫助醫生確定停藥終點，進而提高治愈率. HCV基基因因分分型型 HCV基因分型的方法有分子生物學和血清學兩大類，

17、前者包括DNA測序法、特異型引物擴增法、基因芯片、探針雜交等，后者是合成HCV特異性多肽來檢測其特異性的抗體從而區分基因型，HCV基因分型應當在抗病毒治療前進行。 HCV基因型與肝病嚴重程度有著密切關系，并且對抗病毒治療產生很大影響。因此，HCV基因分型檢測可為HCV感染者的診斷和治療提供重要的科學依據。 HCV1b和2a在中國各地較為常見。. 肝纖維化非侵襲性診斷肝纖維化非侵襲性診斷 目前常用的無創診斷方法包括血清學和目前常用的無創診斷方法包括血清學和影像學兩大類。血清學方法通常是指包括影像學兩大類。血清學方法通常是指包括多種臨床指標的模型。其中多種臨床指標的模型。其中APRI和和FIB-4

18、簡簡單易行，但敏感性和特異性不強。單易行，但敏感性和特異性不強。 影像學主要是瞬時彈性成像影像學主要是瞬時彈性成像TE，TE是近年開始廣泛使用的一種新的影像學無是近年開始廣泛使用的一種新的影像學無創診斷方法，對創診斷方法，對HCV肝纖維化分期的診斷肝纖維化分期的診斷較為可靠，對肝硬化的診斷更準確。較為可靠，對肝硬化的診斷更準確。 血清學和血清學和TE等影像學無創指標聯合應用，等影像學無創指標聯合應用，可顯著提高纖維化的診斷準確率。當兩者可顯著提高纖維化的診斷準確率。當兩者結果不一致時，建議進行肝活檢明確真確。結果不一致時，建議進行肝活檢明確真確。.艾滋病 人類免疫缺陷病毒HIV，即艾滋病AID

19、S病毒，是造成人類免疫系統缺陷的一種病毒。人類免疫缺陷病毒是一種感染人類免疫系統細胞的慢病毒Lentivirus，屬逆轉錄病毒的一種。 HIV通過破壞人體的CD4T淋巴細胞，進而阻斷細胞免疫和體液免疫過程，導致免疫系統癱瘓，從而致使各種疾病在人體內蔓延，最終導致艾滋病。.病毒復制過程.HIV 感染過程中 HIV 抗原和相關抗體及 CD4+ 細胞的變化.實驗室免疫學檢查 1.主要是中度以上細胞免疫缺陷包括：CD4+T 淋巴細胞耗竭：T淋巴細胞功能下降，外周血淋巴細胞顯著減少，CD4200/l，正常人為，遲發型變態反響皮試陰性，有絲分裂原刺激反響低下。 淋巴細胞功能失調：多克隆性高球蛋白血癥，循環

20、免疫復合物形成和自身抗體形成。 細胞活性下降. 檢測HIV感染者體液中病毒抗原和抗體的方法，操作方便，易于普及應用，其中抗體檢測尤普通。但HIv P24抗原和病毒基因的測定，在HIV感染檢測中的地位和重要性也日益受到重視。 抗體檢測 血清中HIV抗體是判斷HIV感染的間接指標。根據其主要的適用范圍，可將現有HIV抗體檢測方法分為篩檢試驗和確證試驗。HIV-1抗體的檢測，ELISA測定法結果連續兩次為陽性者，再行WB法進行確診確證試驗。. HIV P24抗原 HIV-1P24抗原檢測可用于HIV-1抗體不確定或窗口期的輔助診斷；HIV-1抗體陽性母親所生嬰兒早期的輔助鑒別診斷。 病毒基因 通過檢

21、測HIV基因型和表型的變異了解藥物變異情況。目前主要采用基因型檢測。在抗病毒治療前進行基因檢測，有助于選擇適宜的抗病毒藥物。. 蛋白質芯片蛋白質芯片 蛋白芯片在人的傳染病檢測方面主要研究對象是較為嚴重的傳染病病原，能同時檢測HIV、HBV、HCV聯合感染患者血中HIV、HBV、HCV核酸和相應的抗體，有較好的應用前景。.流行性出血熱 出血熱即流行性出血熱又稱腎綜合征出血熱，是由流行性出血熱病毒漢坦病毒引起的，以鼠類為主要傳染源的自然疫源性疾病。以發熱、出血、充血、低血壓休克及腎臟損害為主要臨床表現。，其病理變化為全身小血管和毛細血管損傷。流行性出血熱的病毒具有多嗜性的特點，可以導致患者體內多個

22、臟器官的損傷，臨床表現較為復雜，時常出現并發癥和不典型病例。. 出血熱潛伏期一般為23周。典型臨床經過分為五期：發熱期、低血壓休克期、少尿期、多尿期及恢復期。 1.發熱期 主要表現為感染性病毒血癥和全身毛細血管損害引起的病癥。起病急,有發熱3840、三痛頭痛、腰痛、眼眶痛以及惡心、嘔吐、胸悶、腹痛、腹瀉、全身關節痛等病癥，皮膚黏膜三紅臉、頸和上胸部發紅，眼結膜充血，重者似酒醉貌。口腔黏膜、胸背、腋下出現大小不等的出血點或淤斑，或呈條索狀、抓痕樣的出血點。 2.低血壓休克期 多在發熱46日，體溫開始下降時或退熱后不久，主要為失血漿性低血容量休克的表現。患者出現低血壓，重者發生休克。. 3.少尿期

23、 24小時尿量少于400ml，少尿期與低血壓期常無明顯界限。 4.多尿期 腎臟組織損害逐漸修復，但由于腎小管回吸收功能尚未完全恢復，以致尿量顯著增多。第812日多見，持續714天，尿量每天40006000ml左右，極易造成脫水及電解質紊亂。 5.恢復期 隨著腎功能的逐漸恢復，尿量減至3000ml以下時，即進入恢復期。尿量、病癥逐漸恢復正常，復原需數月。. 診診斷斷: 出出血血熱熱病病死死率率與與臨臨床床類類型、型、治治療療遲遲早早及及措措施施是是否否正正確確相相關。關。早早期期的的診診斷斷和和治治療療措措施施的的改改進進可可有有效效降降低低病病死死率。率。通通常常診診斷斷依依據據主主要要依依靠

24、靠臨臨床床特特征征病病癥癥和和體體征，征，結結合合實實驗驗室室檢檢查，查，參參考考流流行行病病學學資資料料進進行行診診斷。斷。 . 1.常規檢查常規檢查 1血常規早期白細胞總數正常或偏低，血常規早期白細胞總數正常或偏低，34日后即明顯增高，多在日后即明顯增高，多在1530109/L，異型淋巴細胞在，異型淋巴細胞在12病日即可出病日即可出現，且逐日增多，一般為現，且逐日增多，一般為1020%，局部，局部達達30%以上；血小板明顯減少，低血壓及以上；血小板明顯減少，低血壓及少尿期最低，并有異型、巨核血小板出現，少尿期最低，并有異型、巨核血小板出現，多尿后期始恢復。紅細胞和血紅蛋白在發多尿后期始恢復

25、。紅細胞和血紅蛋白在發熱期開始上升，低血壓期逐漸增高，休克熱期開始上升，低血壓期逐漸增高，休克期患者明顯上升，至少尿期下降，其動態期患者明顯上升，至少尿期下降，其動態變化可作為判斷血液濃縮與血液稀釋的重變化可作為判斷血液濃縮與血液稀釋的重要指標。要指標。 2尿常規顯著的尿蛋白是本病的重要尿常規顯著的尿蛋白是本病的重要特點，也是腎損害的最早表現。尿中還可特點，也是腎損害的最早表現。尿中還可有紅細胞、管型或膜狀物是凝血塊、蛋有紅細胞、管型或膜狀物是凝血塊、蛋白質與壞死脫落上皮細胞的混合凝聚物。白質與壞死脫落上皮細胞的混合凝聚物。. 2.血液生化檢查血液生化檢查 1尿素氮及肌酐低血壓休克期輕、中度尿

26、素氮及肌酐低血壓休克期輕、中度增高。少尿期至多尿期達頂峰，以后逐漸增高。少尿期至多尿期達頂峰，以后逐漸下降，升高程度及幅度與病情成正比。下降，升高程度及幅度與病情成正比。 2電解質血鉀在發熱期可有降低，休克電解質血鉀在發熱期可有降低，休克期仍低，少尿期上升為高血鉀，多尿期又期仍低，少尿期上升為高血鉀，多尿期又降低。但少尿期亦有呈低血鉀者。血鈉及降低。但少尿期亦有呈低血鉀者。血鈉及氯在全病程均降低，以休克及少尿期最顯氯在全病程均降低，以休克及少尿期最顯著。血鈣在全病程中亦多降低。著。血鈣在全病程中亦多降低。 3二氧化碳結合力發熱后期即下降，低二氧化碳結合力發熱后期即下降，低血壓休克期明顯，少尿期

27、亦有下降，多尿血壓休克期明顯，少尿期亦有下降，多尿期逐漸恢復至正常。期逐漸恢復至正常。. 3.凝血功能檢查凝血功能檢查 凝血因子大量消耗，血小板下降，凝血凝血因子大量消耗，血小板下降，凝血酶原和局部凝血活酶時間延長，纖維蛋白酶原和局部凝血活酶時間延長，纖維蛋白原降低。繼發性纖溶亢進表現為凝血酶凝原降低。繼發性纖溶亢進表現為凝血酶凝固時間延長，纖維蛋白降解物增加及優球固時間延長，纖維蛋白降解物增加及優球蛋白溶解時間縮短。血漿魚精蛋白副凝試蛋白溶解時間縮短。血漿魚精蛋白副凝試驗驗3P試驗陽性。試驗陽性。. 4.特特異異性性抗抗原、原、抗抗體體和和病病原原學學檢檢查查 早早期期用用免免疫疫熒熒光光試

28、試驗、驗、酶酶聯聯免免疫疫吸吸附附試試驗驗ELISA、膠膠體體金金法法在在血血清、清、尿尿沉沉渣渣細細胞胞可可查查特特異異性性抗抗原。原。檢檢測測血血清清特特異異性性抗抗體體IgM1：20以以上上和和IgG抗抗體體1：40為為陽陽性，性，恢恢復復期期血血清清特特異異性性IgG抗抗體體比比急急性性期期有有4倍倍以以上上增增高高者者也也可可診診斷。斷。RT-PCR法法檢檢測測血血清清中中病病毒毒RNA，可可用用于于早早期期的的診診斷斷和和非非典典型型患患者者的的診診斷。斷。.布魯菌病布魯菌病 為人畜共患病，以畜傳染人為主，人傳人的實例少見。 1.傳播途徑 主要為接觸性傳播，包括飲食、接觸患病動物皮

29、毛 2.病癥 急性的病人會發高熱、關節炎、出汗、另有一些病人會出現肌肉痛等病癥 3.危害 可侵犯中樞神經系統，以及引起腦膜炎等并發癥，侵蝕骨骼，引起骨骼損傷，甚至讓患者喪失勞動能力。. 成年人發病男性多于女性 ，且多集中在 歲 。 另外 ，分布于中國北部的病患以農牧民居多 ，而在中國南方那么主要集中于餐飲效勞者 ，工人及退休人員 ，城市地區發病率有所上升 。 面臨如此嚴峻的形勢 ，加強臨床實驗室的檢測力度并形成統一的篩選及確診檢驗模式是十分重要的 。.細細菌菌學學培培養養技技術術 細細菌菌學學培培養養技技術術是是臨臨床床實實驗驗室室最最常常用用的的別別離離方方法法 ，是是布布魯魯菌菌病病疫疫情

30、情判判定定 ，臨臨床床診診斷斷中中最最直直接接的的證證據據 。 目目前前血血液液中中布布魯魯氏氏菌菌的的別別離離率率呈呈上上升升趨趨勢。勢。 臨臨床床醫醫生生如如遇遇診診斷斷不不明明的的腦腦膜膜炎炎患患者者 ，應應考考慮慮腦腦脊脊液液的的細細菌菌培培養養 ，以以排排除除布布魯魯菌菌性性腦腦膜膜炎炎 。目目前前細細菌菌學學培培養養是是別別離離布布魯魯氏氏菌菌的的“金金標標準準 ，但但由由于于其其培培養養周周期期長長 ，別別離離鑒鑒定定困困難難 ，因因此此易易造造成成漏漏診診誤誤診診 。.免免疫疫學學檢檢測測技技術術1. 特特異異性性血血清清凝凝集集性性試試驗驗 目目前前國國內內外外用用于于檢檢測

31、測診診斷斷布布魯魯菌菌病病的的特特異異性性血血清清凝凝集集性性試試驗驗方方法法主主要要有有平平板板凝凝集集試試驗驗PA T 、虎虎紅紅平平板板凝凝集集試試驗驗 RBPT 試試管管凝凝集集試試驗驗 SAT 。PA T 和和 RBPT 在在臨臨床床上上主主要要用用于于早早期期大大面面積積快快速速篩篩查查。2.酶酶聯聯免免疫疫吸吸附附試試驗驗ELISA 酶酶的的催催化化效效率率很很高高 ，可可使使測測定定到到達達很很高高的的靈靈敏敏度度 ，同同時時優優化化檢檢測測靶靶點點 ，大大大大提提高高了了檢檢測測的的特特異異。3 .其其他他血血清清學學檢檢測測方方法法 補補體體結結合合實實驗驗CFT 和和抗抗

32、人人球球蛋蛋白白試試驗驗Coomb s此此外外 ，熒熒光光偏偏振振技技術術FPA被被認認為為是是檢檢測測牛牛布布魯魯菌菌病病抗抗體體最最穩穩定定的的血血清清學學 方方法法，FPA 技技術術可可以以進進行行人人類類感感染染布布魯魯菌菌病病的的快快速速檢檢測測 ，且且可可以以對對治治療療過過程程及及預預后后復復發發進進行行實實時時監監控控。. 分子生物學技術分子生物學技術PCR 技術技術) 實時熒光定量實時熒光定量 PCRReal time PCR Real time PCR 技術實現了技術實現了 PCR 技術中技術中定性到定量的飛躍定性到定量的飛躍 ，具有更強的特異度，具有更強的特異度 ，更高的自動化程度更高的自動化程度 ，并且有效地解決了，并且有效地解決了 PCR 的污染問題，的污染問題，Real time