1、一、肝素分類 肝素是哺乳動物體內含的一種粘多糖，它與蛋白質結合在一起存在于腸粘膜、肺、肝等器官內，肝素與蛋白質分離提取后，具有抗凝血、抗血栓、降血脂等多種生理活性，是防止動脈粥樣硬化，心腦血管疾病的顯效藥物。(1) 一般(標準)肝素是由豬或羊黏膜提取，平均分子量為15000，相當穩定。 (2) 通常把分子量小于6000的稱為低分子肝素。低分子肝素與一般肝素比較，其半衰期較長，抗血栓效果好，而抗凝出血傾向較弱，有取代一般肝素的趨勢。近年臨床常用的有：達肝素鈉(法安明)、依諾肝素鈉(克賽)、低分子肝素鈣(速避凝、那屈肝素鈣)。 (3) 目前正在深化商量的肝素制劑中還有低抗凝活性肝素、改構型肝素、類

2、肝素等, 這些藥物特點是具有低抗凝、高抗栓、作用時間長和出血作用少的優點，很有開發前途。 二、肝素鈉簡介拼音名：Gansuna 英文名：Heparin Sodium 本品系自豬的腸黏膜中提取的硫酸氨基葡萄糖的鈉鹽，屬粘多糖類物質，通過激活抗凝血酶(AT-)而發揮抗凝作用。它對凝血過程的三個階段均有影響，在體內外均有抗凝作用，可延長凝血時間、凝血酶原時間和凝血酶時間。口服不吸取，皮下、肌肉或靜脈給藥均吸取良好。 三、肝素鈉檢測 （藥典版）拼音名：Gansuna 英文名：Heparin Sodium 本品系自豬或牛的腸黏膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的鈉鹽，屬黏多糖類物質，具有延長血凝時間的作用。按干燥

3、品計算，每1mg 的效價不得少于150 單位。 【性狀】 本品為白色或類白色的粉末；有引濕性。 本品在水中易溶。 【比旋度】 取本品，精密稱定，加水溶解并稀釋制成每1ml 中含40mg的溶液，依 法測定（附錄 E），比旋度應不小于35°。 【鑒別】 (1) 取本品與肝素標準品，分別加水制成每1ml 中含2.5mg 的溶液，照 電泳法（附錄 F第三法）試驗，供試品和標準品所顯斑點的遷移距離之比應為0.9 1.1 。 (2) 本品的水溶液顯鈉鹽的鑒別反應（附錄）。 【檢查】 酸堿度 取本品0.10g ，加水10ml溶解后，依法測定（附錄 H），pH 值應為5.0 7.5 。 溶液的澄清度

4、與顏色 取本品0.50g ，加水10ml溶解后，溶液應澄清無色；如顯渾 濁，照分光光度法（附錄 A），在640nm 的波長處測定，吸取度不得大于 0.018；如 顯色，與黃色1 號標準比色液（附錄 A第一法）比較，不得更深。 吸取度 取本品，加水制成每1ml 中含4mg 的溶液，照分光光度法（附錄 A）測 定，在260nm 的波長處，其吸取度不得大于0.20；在280nm 的波長處，其吸取度不得大 于0.15。 黏度 精密稱取本品（按實際測得的單位計算相當于40萬單位），加水適量研細 ，移入干燥并稱定重量的10ml量瓶中，研缽用水沖洗并移入量瓶中，將量瓶置25水浴 內，俟溫度平衡后，加25水至

5、刻度，搖勻，稱定重量，計算供試品溶液的密度。取溶 液，必要時用0.45m 的濾膜過濾，照黏度測定法（附錄 G第一法），用內徑約為 1 mm的毛細管，在25±0.1 測定其動力黏度，不得大于0.030Pa.s 。 總氮量 取本品，照氮測定法（附錄 D其次法）測定，按干燥品計算，含總氮量應 為1.3 2.5 。 硫 取本品約25mg，精密稱定，照氧瓶燃燒法（附錄 C）進行有機破壞，選用 1000ml燃燒瓶，以濃過氧化氫溶液0.1ml 與水10ml為吸取液，俟生成的煙霧完全吸取后 ，置冰浴中15分鐘后，加熱緩緩煮沸2 分鐘，冷卻，加乙醇醋酸銨緩沖液 (pH3.7)50 ml，乙醇30ml，

6、0.1 茜素紅溶液0.3ml 為指示液，用高氯酸鋇滴定液(0.05mol/L) 滴 定至淡橙紅色。每1ml高氯酸鋇滴定液(0.05mol/L) 相當于1.603mg 的S，按干燥品計算，含 硫量不得少于10.0。 干燥失重 取本品，置五氧化二磷干燥器內，在60減壓干燥至恒重，減失重量不得過 5.0%（附錄 L）。 熾灼殘渣 取本品0.50g ，依法檢查（附錄 N），遺留殘渣應為28.041.0。 鉀鹽 取本品0.10g ，置100ml 量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液（B）；另量取標準氯化鉀溶液（精密稱取在150干燥1 小時的分析純氯化鉀 191mg ，置1000ml量瓶中，

7、加水溶解并稀釋至刻度，搖勻） 5.0ml，置50ml量瓶中，加（B）溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對比溶液（A）。照原子吸取分光光度法（附錄 D雜質檢查法）在766.5nm 的波長處分別測定，應符合規定。 重金屬 取本品0.50g ，依法檢查（附錄 H其次法），含重金屬不得過百萬分之 三十。 熱原 取本品，加氯化鈉注射液制成每1ml 中含1000單位的溶液，依法檢查（附錄 D），劑量按家兔體重每1kg 注射2ml ，應符合規定。 【效價測定】 照肝素生物檢定法（附錄 D）測定，應符合規定；測得的結果應 為標示量的91110 。 【類別】 抗凝血藥。 【貯藏】 密封，在涼暗處保存。 【制劑】 肝素鈉

8、注射液四、肝素鈉生產工藝流程1、鹽解：將刮好的新奇腸粘膜，每100斤腸粘膜加入清水100斤，按腸粘膜和水的總重量，加入4%的工業鹽，攪拌均勻，再加燒堿液調PH值為8-9，緩慢升溫50-55度，加溫時每10-20分鐘加水攪拌一次，恒溫2小時，注意要間隔攪拌。恒溫結束后，要快速升溫到96-98度，恒溫10分鐘，趁熱撈出上層的渣子。用100目尼龍布過濾。 注意： 加鹽過多會使下一步交換吸附含量超過規定，加鹽過少，肝素和蛋白質分離不完全，堿性過強，會使肝素降解破壞，收率下降。同時還能使一些蛋白質溶解度增大，造成過濾困難。堿性不足造成提取液偏酸，則在高溫的情況下，肝素迅速破壞，升溫過急會使蛋白質早凝固，

9、影響肝素的分解和溶出。 2、吸附：待提取液溫度冷至50-55度，應檢測鹽濃度為3。5-5%時，即可加入5%已處理號的樹脂。如樹脂上含有鹽水，需用清水將樹脂洗凈控干，方可使用。攪拌吸附6-8小時，轉速60-80轉/分鐘為宜，攪拌須使樹脂上下翻動，否則吸附效果差，收率低。吸附完畢，棄去上層吸附液，然后用100目的尼龍布過濾出樹脂。加入提取液的樹脂量：新樹脂可按提取液的5-6%加入，舊樹脂可按提取液的8-10。 3、洗滌：過濾后的樹脂用40度左右的溫水，漂洗潔凈。再放入與樹脂重量相等的鹽溶液中(鹽溶液的濃度為5%左右)洗滌10-20分鐘，除去低分子肝素和一些蛋白質，然后將樹脂過濾。 4、洗脫：第一次

10、洗脫將過濾號的樹脂放入濃度為20-22%的鹽溶液中攪拌洗脫5-6小時，樹脂和鹽水的比例為1：0。7。過濾后將樹脂控干進行其次次洗脫，調鹽溶液濃度為16-18%，攪拌3小時以上，樹脂和鹽水的比例與第一次相同，過濾后的水即是藥液。 5、除雜：將稀堿水加入洗脫后的藥液里，要快攪慢加，調PH值為10-12攪拌2分鐘，靜止沉淀20小時后，抽出上層藥液，下沉的是雜質，且渣子放另外桶內過濾。過濾后的藥液和下次藥液除雜時合并待用。 6、沉淀：將抽出除雜后的藥液加入鹽酸調PH值為7-7。5，即可加入酒精進行沉淀。向藥液里加入酒精要快攪慢加。(由于酒精的濃度不同，因此沉淀肝素的酒精用量不等)用酒精計測量酒精度為3

11、0-35%，加蓋密封，沉淀20小時。棄去廢酒精收集糊狀肝素。注意在抽出廢酒精時，不行抽動沉淀的肝素。將多次生產的肝素鈉漿收集在一起，以備集中脫水干燥。 7、脫水：將生產的肝素鈉漿，用雙層的確良布過濾后放入95%的酒精內浸泡20小時，加蓋密封。過濾后按上述方法重復一次，使其充分的將肝素上的水分交換下來。 8、干燥：待肝素鈉漿瀝干后，放在不銹鋼盤中烘干，用鏟子來回的翻動，溫度保持在50-55度，注意溫度低于要求是不易烘干的，溫度高于60度時會使肝素鈉的生物活性下降。干燥后的肝素很易吸潮，應準時用雙層塑料袋密封包裝，于通風干燥處存放。五、肝素鈉精制新工藝本工藝接受酶解結合氧化法精制肝素，在該過程中接

12、受低溫離心技術,解決在除酸性蛋白過程中，粗品肝素鈉中殘留雜蛋白在純化過程中很難被除去的缺點。在粗品肝素鈉中加入胰蛋白酶對這些雜蛋白進行酶解,再結合一次氧化除雜過程,從而提高精品肝素鈉的效價和效價回收率。1、工藝流程2、溶解稱取適量肝素鈉粗品加質量分數3%左右NaCI溶液進行溶解。50水浴加熱，用NaOH溶液調pH至8.0靜置2小時，過濾除不溶性雜質。3、酶解法除蛋白肝素在動物體內是以肝素-蛋白質復合物的形式存在，通過酶解或鹽解去除復合物的蛋白質成分，游離肝素。但在實際生產過程中，復合物的解離，蛋白質的除去是不完全的，粗品中總存在數量不等的蛋白質。粗品肝素鈉必須經過精制，可以進一步去除粗品中殘存

13、的結合蛋白質，不僅因雜蛋白的去除而提高效價，而且因被“掩蔽”的肝素活性得到釋放而獲得較高活性。為此，利用蛋白水解酶專一水解蛋白的特點，并結合調酸除蛋白和氧化除蛋白方法,接受酶解除蛋白法，該法能在除去蛋白質時較少影響肝素總效價。在肝素鈉溶液中加入少量的胰蛋白酶，使殘留在肝素中的少量蛋白質降解成小分子肽,從肝素-蛋白質復合物中解離出來，再結合調酸堿和氧化法除蛋白,制得精品肝素鈉的效價和效加回收率均有不同程度提高。酶解反應條件：蛋白酶加入量0.05%， pH 79， 溫度40，反應時間5h。4、調酸除蛋白在調酸除蛋白過程中，為防止肝素失活,加入亞硫酸氫鈉作保護劑。在低溫下離心脫除蛋白。5、氧化條件H2O2用量2/% pH8.5，溫度2527，時間15h。6、沉淀 將氧化液調pH6.5，加人等量的95%乙醇沉淀。抽出上清液得沉淀物，將沉淀物漸漸加無水酒精或丙酮中脫水。7、干燥55，真空干燥3小時以上即得精品。接受酶解結合過氧化氫一次氧化的肝素鈉精制工藝，產品較白，且效價和效價回收率均高于二次氧化方法，效價達150U/mg以上，效價回收率達