1、細(xì)胞生物學(xué)?實(shí)驗(yàn)養(yǎng)殖： 1 3；生技、海科： 1 6實(shí)驗(yàn)一 細(xì)胞器的別離、提取與 測(cè)量【目的】 掌握葉綠體別離的一般原理和方法，學(xué)習(xí)用測(cè)微尺測(cè)量細(xì)胞與細(xì)胞器大小的測(cè)定方法，并了解應(yīng)用熒 光顯微鏡方法觀察葉綠體熒光現(xiàn)象。【原理】 葉綠體是植物細(xì)胞中較大的一種細(xì)胞器，能發(fā)生特有的能量轉(zhuǎn)換。利用低速離心機(jī)可以別離葉綠體， 其別離在等滲溶液 0.35 mol L 氯化鈉或 0.4mol L 蔗糖溶液 中進(jìn)行，目的是為了防止?jié)B透壓的改變引 起葉綠體的損傷。將勻漿液在1000r min 離心，去除其中的組織殘?jiān)鸵恍┪幢黄扑榈耐暾?xì)胞，然后，3000 r min 離心，可獲得沉淀的葉綠體 混有局部細(xì)胞核

2、。在室溫下進(jìn)行別離要迅速。用顯微測(cè)微尺可以直接測(cè)量細(xì)胞大小，精確度較高。顯微測(cè)微尺分為物鏡測(cè)微尺和目鏡測(cè)微尺 2 種。 目鏡測(cè)微尺是1塊小玻璃圓片可放人目鏡內(nèi)，其大小正好卡人目鏡筒內(nèi)，在圓片正中央刻有 1cm長(zhǎng)的直線，直線上均勻分為 100 小格或 50 小格，每小格的長(zhǎng)度，隨目鏡和物鏡的放大倍數(shù)而變動(dòng)。物鏡測(cè)微尺 是一塊特制的玻璃載片，載片中央刻有一條1mm長(zhǎng)的直線，均勻地刻分為100個(gè)小格，每小格為1/ 100mm為10 um，用一小圓形玻璃蓋片封蓋著，物鏡測(cè)微尺較目鏡測(cè)微尺小格的間距精確，通過(guò)目鏡測(cè)微尺測(cè) 量細(xì)胞與細(xì)胞器的大小 小格數(shù)，然后換以物鏡測(cè)微尺校測(cè)小格數(shù)的精確數(shù)值，即為測(cè)量的細(xì)

3、胞與細(xì)胞器 大小結(jié)果。某些物質(zhì)在一定短波長(zhǎng)的光 如紫外光 的照射下吸收光能進(jìn)入激發(fā)態(tài)，從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí)，就能在 極短的時(shí)間內(nèi)放射出比照射光波長(zhǎng)更長(zhǎng)的光 如可見光 ，這種光就稱為熒光。假設(shè)停止供能熒光現(xiàn)象立即停 止。有些生物體內(nèi)的物質(zhì)受激發(fā)光照射后，可直接發(fā)出熒光 稱為自發(fā)熒光 ，如葉綠素的火紅色熒光。有 的生物材料本身不發(fā)熒光，但它吸收熒光染料后同樣也能發(fā)出熒光稱為間接熒光 ，如葉綠體吸附吖啶橙后可發(fā)橘紅色熒光。【材料】 菠菜葉片。【實(shí)驗(yàn)用品 】1 .試劑：蒸餾水，0.35 mol / L氯化鈉溶液，0.01%吖啶橙。2 器材：普通離心機(jī)，組織搗碎機(jī)，天平，熒光顯微鏡，顯微鏡，載玻片，蓋玻片

4、，鑷子，接種針， 濾紙，試管，試管架，移液管，滴管，燒杯，無(wú)熒光載片，蓋玻片，離心管，目鏡測(cè)微尺，物鏡測(cè)微尺， 培養(yǎng)皿。【 實(shí)驗(yàn)步驟 】1 選取新鮮的菠菜嫩葉，洗擦干后去除葉梗及粗脈，稱3g于0.35 mol / L氯化鈉溶液45mL中，置人組織搗碎機(jī)或研缽中。2 .利用組織搗碎機(jī)低速5000r / min勻漿3-5min，或研磨成勻漿。3 .用 6層紗布過(guò)濾，濾液盛于燒杯中。4 .取濾液4 mL在1000 r /min下離心2min,棄去沉淀。5 .將上清液在3000 r / min下離心5 min，棄去上清液，沉淀即為葉綠體混有局部細(xì)胞核。6 .沉淀用0.35mol / L氯化鈉溶液懸浮。

5、7. 取葉綠體懸液 1 滴置于載玻片上，加蓋玻片后用普通光學(xué)顯微鏡觀察、繪圖。8. 將物鏡測(cè)微尺放在載物臺(tái)上，校準(zhǔn)目鏡測(cè)微長(zhǎng)度：在低倍顯微鏡下，移動(dòng)鏡臺(tái)測(cè)微尺和轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡 測(cè)微尺，使兩者刻度平行，并使兩者間某段的起、止線完全重復(fù)。數(shù)出兩條重合線之間的格數(shù)，即可求出 目鏡測(cè)微尺每格的相應(yīng)長(zhǎng)度。目鏡測(cè)微尺與物鏡測(cè)微尺兩者重合點(diǎn)的距離越長(zhǎng)，所測(cè)得的數(shù)字越準(zhǔn)確。用同樣方法分別測(cè)出高倍物鏡下，目鏡測(cè)微尺每格的相對(duì)長(zhǎng)度。計(jì)算目鏡測(cè)微尺每格的長(zhǎng)度：例如，測(cè)得某顯微鏡的目鏡測(cè)微尺 50格相當(dāng)于物鏡測(cè)微尺 7格，那么目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度為：7X10ym /50=1.4 ym/格。9. 測(cè)量510個(gè)葉綠體的長(zhǎng)軸和短軸

6、，制表格表示測(cè)量結(jié)果。10. 取菠菜葉片于研缽中，加少量丙酮，研磨勻漿、過(guò)濾，濾液置于試管中，順著太陽(yáng)光觀察，再將 試管避開直射光，比擬顏色的變化。【 實(shí)驗(yàn)報(bào)告 】1. 繪制普通光學(xué)顯微鏡下觀察的葉綠體形態(tài)示意圖。2. 用測(cè)微尺測(cè)量葉綠體的大小后，制表格表示測(cè)量結(jié)果。3. 記錄觀察的熒光現(xiàn)象，分析結(jié)果。【 思考題 】1 別離葉綠體的實(shí)驗(yàn)原理是什么 ?2操作過(guò)程中應(yīng)注意什么 ?實(shí)驗(yàn)二 細(xì)胞原生質(zhì)流動(dòng)的觀察【 目的 】 觀察植物細(xì)胞質(zhì)中原生質(zhì)流動(dòng)現(xiàn)象，了解影響細(xì)胞質(zhì)中原生質(zhì)流動(dòng)的因素。【原理】 在多種植物的細(xì)胞中都能觀察到原生質(zhì)的流動(dòng)現(xiàn)象，它是細(xì)胞活動(dòng)強(qiáng)弱的重要指標(biāo)。細(xì)胞原生質(zhì)流動(dòng) 現(xiàn)象的產(chǎn)生，是

7、細(xì)胞骨架中微絲肌動(dòng)蛋白與肌球蛋白相互滑動(dòng)的結(jié)果，此過(guò)程要消耗能量，受各種因素諸 如溫度、滲透壓及各種離子的影響。【材料】黑藻也稱水王蓀、輪葉黑藻 葉，輪藻，洋蔥鱗莖 最好使用萌發(fā)的鱗莖 或鴨跖草雄蕊花絲或小麥幼 苗的根毛種子在培養(yǎng)皿中濕濾紙上萌發(fā)，當(dāng)根長(zhǎng)到12cm,有許多根毛時(shí)最適宜。【實(shí)驗(yàn)用品】1 試劑： 1mol/L 氟化鈉, 1 mol/L 丙二酸鈉, 0.17mol/L2,4 二硝基酚 DPN。2 器具：顯微鏡,載玻片,蓋玻片,尖頭鑷子,刀片。【 實(shí)驗(yàn)步驟 】1 取 1 塊干凈的載玻片,在中央滴 1 2 滴蒸餾水；取紫鴨跖草 或其它材料 花 1 朵,用鑷子取 1 枚雄蕊，迅速置載玻片水

8、滴中，切去花蕊，加蓋玻片，用顯微鏡低倍物鏡10X進(jìn)行觀察，注意花絲周圍附著許多“含珠鏈狀的花絲毛,每 1 粒“念珠是 1 個(gè)單毛細(xì)胞。2 轉(zhuǎn)換高倍物鏡 40X 觀察,可以看到細(xì)胞質(zhì)中的顆粒和顯著的細(xì)胞質(zhì),細(xì)胞質(zhì)之間是液泡,內(nèi)含水 溶性花青素。注意觀察花絲毛細(xì)胞核的部位,哪一個(gè)部位見到細(xì)胞質(zhì)流動(dòng),其流動(dòng)的速度如何。3 用吸水紙吸干水,加 1 滴 1 mol/L 氟化鈉,注意觀察細(xì)胞質(zhì)停止流動(dòng)的時(shí)間。細(xì)胞質(zhì)停止流動(dòng)后, 用吸水紙吸去氟化鈉,滴人清水,注意流動(dòng)是否能恢復(fù)。4 依上述操作,加 1 滴 1 mol/L 丙二酸鈉或 0.17 mol/L 2,4 二硝基酚,注意觀察細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)速度 是否發(fā)生改

9、變；用吸水紙吸去藥液后,參加蒸餾水,再觀察細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)的變化。【 考前須知 】 取材時(shí)用洋蔥鱗片內(nèi)表皮、鴨跖草雄蕊花絲上的表皮毛、輪藻幼嫩的節(jié)間細(xì)胞進(jìn)行的顯微觀察,如一 時(shí)找不到原生質(zhì)流動(dòng)的細(xì)胞,可將載玻片置于溫箱里或白熾燈泡上很短時(shí)間提高溫度后再觀察。【 實(shí)驗(yàn)報(bào)告 】1 繪制紫鴨跖草花絲細(xì)胞或其它材料原生質(zhì)流動(dòng)圖。2 記錄參加各種化學(xué)試劑后細(xì)胞原生質(zhì)流動(dòng)停止的時(shí)間,并分析原因。【 思考題 】1、 你如何理解細(xì)胞原生質(zhì)流動(dòng)原理 ?2、 影響細(xì)胞原生質(zhì)流動(dòng)的因素有哪些？實(shí)驗(yàn)三 細(xì)胞骨架的觀察【目的】 掌握用光學(xué)顯微鏡觀察植物細(xì)胞骨架的原理及方法，觀察光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞骨架的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。【原理】植物細(xì)胞

10、用適當(dāng)濃度的 TritonX-100 處理后，可破壞細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)，但細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋白質(zhì)卻保護(hù) 完好。考馬斯亮藍(lán) R250(Coomassie brilliant blue R250)是一種蛋白質(zhì)染料，處理后的材料用考馬斯亮藍(lán) R250 染色后，用光學(xué)顯微鏡觀察，可以見到一種網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，即是細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)。【材料】洋蔥鱗葉。【 實(shí)驗(yàn)用品 】1 試劑：(1) 2% 考馬斯亮藍(lán) R250染色液：稱考馬斯亮藍(lán) R250 1g ,溶于250mL無(wú)水乙醇中，加冰醋酸35mL再加蒸餾水至 500mL。(2) 磷酸緩沖液 (pH 6.8) ： 6.8mmol/L 磷酸緩沖液，調(diào)至 pH6.8。(3) M緩沖液(

11、pH7.2) : 50 mmol/L 咪唑、50 mmol/L 氯化鉀、0.5mmol/L 氯化鎂、1mmol/L 乙二醇雙乙 胺醚、 0.1 mmol/L 乙二胺四乙酸、 1 mmol/L 琉基乙醇，調(diào)至 pH7.2。(4) 1%TritonX-1OO :用 M緩沖液配制。(5) 3% 戊二醛：用 M緩沖液配制。(6) 中性樹膠。2 器具：顯微鏡，燒杯，玻璃滴管，載玻片，蓋玻片，鑷子。【 實(shí)驗(yàn)步驟 】1 .用鑷子撕取洋蔥鱗葉內(nèi)側(cè)的表皮假設(shè)干片(約1cnf大小假設(shè)干片)，置于50mL燒杯中，參加pH6.8磷酸緩沖液，使其下沉。2 .吸去磷酸緩沖液，用 1%TritonX-100 處理 20mi

12、n。3 .吸去TritonX-100 ，用M緩沖液洗3次，每次5min。4 .用 3%戊二醛固定 30min。5 .磷酸緩沖液 (pH 6.8) 洗3次，每次 5 min。6 . 0.2 %考馬斯亮藍(lán) R250染色10min。7 蒸餾水洗 2 次，然后將樣品置于載玻片上，加蓋玻片，于普通光學(xué)顯微鏡下觀察。8 .如果染色效果好，那么可依次用50%乙醇、 70%乙醇、 95%乙醇、正丁醇、二甲苯處理樣品，各5min。然后將樣品平展于載玻片上，加 l 滴中性樹膠，蓋上蓋玻片封片，制成永久切片。【 實(shí)驗(yàn)報(bào)告 】 描繪所觀察到的洋蔥鱗葉細(xì)胞骨架圖。【 思考題 】1 、 組成細(xì)胞骨架的成分有哪些 ?2、

13、本實(shí)驗(yàn)制片中， TritonX-100 有何作用？實(shí)驗(yàn)四 細(xì)胞中多糖和過(guò)氧化物酶的定位【 目的 】 掌握細(xì)胞中多糖和過(guò)氧化物酶的組織化學(xué)定位檢測(cè)方法。【原理】高碘酸 -席夫試劑反響，簡(jiǎn)稱 PAS 反響。主要是利用高碘酸作為強(qiáng)氧化劑，能作用于含乙二醇基的糖，Schiff試劑中的無(wú)色亞硫酸品紅結(jié)合而生成紅色化合物的使其碳鏈斷裂而形成乙二醛，氧化得到的醛基與 取代染料而到達(dá)定位的目的，見下列圖：i OHHMII過(guò)氧化物酶體系能把聯(lián)苯胺氧化成藍(lán)色或棕色產(chǎn)物，反響式如下:F9一亠-AYMY-沁i中間產(chǎn)物聯(lián)苯胺藍(lán)是不穩(wěn)定的，無(wú)需酶作用即可氧化為棕色。【材料】馬鈴薯塊莖、洋蔥根尖或洋蔥鱗莖。【實(shí)驗(yàn)用品】1、

14、試劑：(1) 高碘酸溶液：高碘酸(HIO4.2H2O)0.4g95% 乙醇35ml1/3mol/L 乙酸鈉溶液5ml蒸餾水10ml2Schiff 試劑：取 0.5 克研細(xì)的堿性品紅于 100毫升沸騰的蒸餾水中，攪拌使其充分溶解，當(dāng)染液冷卻至50C時(shí)過(guò)濾，在濾液內(nèi)參加1NHCI 10毫升。然后放置，使其繼續(xù)冷卻至25C時(shí)，再加無(wú)水偏重亞硫酸鈉或無(wú)水偏重亞硫酸鉀 1 克，置陰暗處約 24小時(shí)后，染液褪至無(wú)色或略帶淡黃色，然后參加 0.5克活 性炭，用力振蕩1min，最后用粗濾紙過(guò)濾于棕色瓶中，密封保存于4 C冰箱中。可保存數(shù)日，用時(shí)升至室溫，如溶液帶紅色或紫色，可參加少許無(wú)水偏重亞硫酸鈉或無(wú)水偏重

15、亞硫酸鉀，使之再轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)色時(shí)，仍 可再用。0.8克+蒸餾水20毫升+0.2M醋酸鈉10毫升+純酒精70毫升3亞硫酸水：取 200mI 自來(lái)水，加 10mI 10偏重亞硫酸鈉或無(wú)水偏重亞硫酸鉀水溶液和10mI1moI/LHCI ，三者于使用前混勻。 4 7 0乙醇。5 聯(lián)苯胺水溶液：在 0.85鹽水內(nèi)參加聯(lián)苯胺至飽和為止，使用前參加20體積的 H2O2， 每 2mI 加 1 滴。60.1鉬酸銨溶液： 0.1g 鉬酸銨于 100毫升 0.85鹽水。 2、儀器設(shè)備：顯微鏡，鑷子，染色缽，載玻片，蓋玻片，吸水紙。【 實(shí)驗(yàn)步驟 】1、PAS反響：1把馬鈴薯塊莖用刀片切成薄片；2浸于高碘酸溶液 515mi

16、n；3移入 70乙醇中浸 5min；4Schiff 試劑染色 15min ；5亞硫酸溶液洗 3 次，每次 1 min ；6蒸餾水洗片刻，裝片鏡檢。2、 過(guò)氧化物酶的測(cè)定：1把洋蔥根尖徒手切稱 2040微米厚的薄片或用鑷子撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮一小塊；2浸在鉬酸銨溶液 5 min；3浸在聯(lián)苯胺溶液內(nèi) 2 min 至切片出現(xiàn)藍(lán)色；40.85鹽水洗 1 min；5將薄片置于載玻片上展開，蓋上蓋玻片，鏡檢。【 實(shí)驗(yàn)報(bào)告 】 繪圖、記錄并分析兩種實(shí)驗(yàn)方法的顯示情況。【 思考題 】1. 組織化學(xué)的含義和作用是什么 ?2. 過(guò)氧化物酶在生物細(xì)胞中的分布有何特點(diǎn) ? 它有何功能？實(shí)驗(yàn)五 細(xì)胞融合【目的】通過(guò)利用P

17、EG法介導(dǎo)雞血細(xì)胞融合的實(shí)驗(yàn)操作與融合過(guò)程的觀察，掌握利用PEG介導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，為從事細(xì)胞工程相關(guān)領(lǐng)域的工作奠定根底。【原理】細(xì)胞融合 ceII fusion 又稱體細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞融合形成一個(gè)雙核或多核細(xì)胞的現(xiàn)象。細(xì)胞融合可在基因型相同的細(xì)胞間進(jìn)行，也可在基因型不同的種內(nèi)細(xì)胞間甚至種間細(xì)胞問(wèn)進(jìn)行。基因 型相同的細(xì)胞形成的融合細(xì)胞稱為同核融合細(xì)胞或同核體；基因型不同的細(xì)胞形成的融合細(xì)胞稱為異核融 合細(xì)胞或異核體。含有兩個(gè)核的同型融合細(xì)胞可通過(guò)同步有絲分裂產(chǎn)生含有一個(gè)異常大的核的單核子細(xì) 胞，其染色體數(shù)為正常數(shù)的兩倍。這些染色體是由原來(lái)兩個(gè)核融合而來(lái)的。通過(guò)細(xì)胞雜交形成的

18、單核子細(xì) 胞稱為融合核細(xì)胞或合核體，即雜交細(xì)胞。細(xì)胞融合可分為：病毒 如仙臺(tái)病毒等 誘導(dǎo)的細(xì)胞融合；化學(xué)物質(zhì) 如聚乙二醇，即PEG，polyethyleneglycol 誘導(dǎo)的細(xì)胞融合；電場(chǎng)誘導(dǎo)的細(xì)胞融合；激光誘導(dǎo)的細(xì)胞融合。PEG是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同分子量的多聚體，可改變各類細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)，使兩細(xì)胞 接觸點(diǎn)處脂類分子發(fā)生疏散和重組，引起細(xì)胞融合。細(xì)胞融合技術(shù)已成為細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)和醫(yī)學(xué)研究 的重要手段。特別是利用這項(xiàng)技術(shù)而開展起來(lái)的雜交瘤技術(shù)，非常具有實(shí)用價(jià)值，應(yīng)用極為廣泛。【材料】雞血【 實(shí)驗(yàn)用品 】1 試劑：10.85%NaCl溶液；2GKN液：8.0g NaCI, 0.

19、4g KCI, 1.77g N&HPQ 2HzO, 0.69g NaHP04 H20, 2.0g 葡萄糖，O.OIg酚紅，溶于 l000ml 重蒸水中；350 % m/ VPEG溶液： 取50gPEG相對(duì)分子質(zhì)量=4000放入100ml瓶中，高壓滅菌 20min。 讓PEG冷卻至50-60 C,勿讓其凝固。 參加50ml預(yù)熱至50C的GKN液，混勻，置37C備用。4Hanks 原液10 XNaCl80.0gNa2HPO 12H20 1.2 gKCl4.0gKH2P040.6gMgSO 4.7 H 202.0g葡萄糖10.0gCaCl 21.4g稱取1.4g的CaCl2，融于30- 50

20、m1的重蒸水中。取 1000ml 的燒杯及容量瓶各一個(gè),先放重蒸水 800ml 于燒杯中,然后按上述配方順序,逐一稱取藥品。必須在前一藥品完全溶解后,方可參加下一藥品,直到葡萄糖完全溶解后,再將已溶解的CaCl2溶液參加,最后加水至 1000ml。 5 Hanks 液：Hanks 原液 100ml重蒸水896ml0.5 %酚紅 4ml配好的Hanks液，分裝包扎好貼上標(biāo)簽，經(jīng)過(guò)滅菌后，4C保存。 6詹納斯綠染液。 2器具：注射器、刻度離心管、離心機(jī)、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、水浴鍋、容量瓶、顯微鏡,燒杯,玻璃滴 管,凹面載玻片,蓋玻片,酒精燈。【 實(shí)驗(yàn)步驟 】1雞血細(xì)胞的獲得：從家雞的翼根靜脈用注射器采血

21、,注入試管后,迅速參加肝素100U 肝素/ 5ml全血 混合,制成抗凝全血。2 .雞血細(xì)胞儲(chǔ)藏液的制備：在抗凝全血的試管中，參加 4倍體積的0. 85% NaCl溶液，制成紅細(xì)胞 儲(chǔ)藏液，置于4C冰箱內(nèi)可供一周內(nèi)使用。3雞血細(xì)胞懸液的制備 : 取雞血細(xì)胞儲(chǔ)藏液 lml ，參加 4ml 0.85 NaCl 溶液，混勻后， 1 200r/min 離心5min,棄去上清液，再參加 5m1 0.85 % NaCI溶液按上述條件離心一次。最后，棄去上清液，參加10ml的GKN溶液制成雞血細(xì)胞懸液。4 .計(jì)數(shù)：取0.5m1雞血細(xì)胞懸液，加 3.5ml的GKN溶液進(jìn)行稀釋，在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)。假設(shè)細(xì)胞 濃

22、度過(guò)大，用 GKN溶液稀釋至IXI0 7個(gè)/ ml左右。5. 雞血細(xì)胞的收集： 吸取1m1雞血細(xì)胞懸液放入離心管中，參加4mlHanks液混勻，I OOOr / min離心5min，棄去上清液，用手指輕彈離心管底部，使沉淀的血細(xì)胞團(tuán)塊松散。6. PEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合：吸取0.5m1 37 C的50% PEG溶液，慢慢沿著離心管壁逐滴參加，邊加邊輕搖離 心管，使PEG與細(xì)胞混勻，然后在 37C水浴中靜置2min。7. 終止PEG作用：緩慢參加5mIHanks液，輕輕吹打混勻，于 37C水浴中靜置5min。8. 制備細(xì)胞懸液 ： 用吸管輕輕吹打細(xì)胞團(tuán)數(shù)次使細(xì)胞團(tuán)分散, 1 000/min 離心 5m

23、in ,使細(xì)胞完全沉降。 棄去上清液,加 Hanks 液,再離心一次,棄多數(shù)上清,留少許溶液,混勻。9. 染色和鏡檢 ： 吸取細(xì)胞懸液,在凹面載玻片上滴一滴,參加詹納斯綠染液混勻,染色3min 后蓋上蓋玻片,在顯微鏡下觀察細(xì)胞融合情況。10. 計(jì)算細(xì)胞融合率 ： 細(xì)胞融合率是指在顯微鏡的視野內(nèi),已發(fā)生融合的細(xì)胞其細(xì)胞核總數(shù)與該視野 內(nèi)所有細(xì)胞 ( 包括已融合細(xì)胞 ) 的細(xì)胞核總數(shù)之比,通常以百分比表示,而且要進(jìn)行多個(gè)視野測(cè)定,進(jìn)行統(tǒng) 計(jì)分析。【 實(shí)驗(yàn)報(bào)告 】畫出觀察到的融合細(xì)胞,并計(jì)算融合率。【 思考題 】(1) 試說(shuō)明細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。(2) 細(xì)胞融合有哪些實(shí)際應(yīng)用？實(shí)驗(yàn)六 細(xì)胞膜的通透性

24、觀察【 目的 】 了解細(xì)胞膜的滲透性及各類物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的速度。【原理】 將紅細(xì)胞放入數(shù)種等滲溶液中,由于紅細(xì)胞對(duì)各種溶質(zhì)的透性不同,有的溶質(zhì)可以滲入,有的溶質(zhì)不能滲入,滲入的溶質(zhì)能夠提高紅細(xì)胞的滲透壓,所以促使水分進(jìn)入細(xì)胞,引起溶血。由于溶質(zhì)透入速度互 不相同,因此溶血時(shí)間也不相同。【材料】 動(dòng)物新鮮血液。【實(shí)驗(yàn)用品 】1 、試劑：0.17moI/L 氯化鈉, 0.17moI/L 氯化銨, 0.17moI/L 醋酸胺, 0.17moI/L 硝酸鈉, 0.12mo1/L 草酸 銨, 0.12moI/L 硫酸鈉, 0.32moI/L 葡萄糖, 0.32mo1/L 甘油, 0.32moI/L 乙醇,

25、 0.32moI/L 丙酮。2 、儀器設(shè)備：50mL小燒杯，10mL移液管，試管，試管架。【 實(shí)驗(yàn)步驟 】1 、血細(xì)胞懸液取50mL小燒杯一只，加 1份血樣和10份0.17moI/L氯化鈉溶液，形成一種不透明的紅色液 體,此即稀釋的血樣。2 、低滲溶液取試管一支，參加10mL蒸餾水，再參加1mL稀釋的血樣，注意觀察溶液顏色的變化，由不透明的紅色逐漸澄清，說(shuō)明紅細(xì)胞發(fā)生破裂造成100%紅細(xì)胞溶血， 使光線比擬容易透過(guò)溶液。3 、紅細(xì)胞的滲透性取試管一支，參加0.17mo1/L氯化鈉溶液10mL，再參加1mL稀釋的血樣，輕輕搖動(dòng)，注意顏色有無(wú)變化？有無(wú)溶血現(xiàn)象 ？為什么？(2) 取試管一支，參加0

26、.17mol/L 氯化銨溶液10mL，再參加1mL稀釋血樣，輕輕搖動(dòng)，注意顏色有無(wú)變化？有無(wú)溶血現(xiàn)象 ？假設(shè)發(fā)生溶血，記下時(shí)間(自參加稀釋血樣到溶液變成紅色透明澄清所需時(shí)間 )。(3) 分別在另外8種等滲溶液中進(jìn)行同樣實(shí)驗(yàn)。步驟同(2)。【實(shí)驗(yàn)報(bào)告】將觀察到的現(xiàn)象列入表6-1，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比擬和分析。表6-1不同等滲溶液下的溶血現(xiàn)象試管編號(hào)是否溶血時(shí)間結(jié)果分析1 . 10mL氯化鈉+1mL稀釋血樣2. 10mL氯化銨+1mL稀釋血樣3. 10mL醋酸銨+1mL稀釋血樣4. 10mL硝酸鈉+1mL稀釋血樣5. 10mL草酸銨+1mL稀釋血樣6. 10mL硫酸鈉+1mL稀釋血樣7. 10mL葡萄

27、糖+1mL稀釋血樣& 10mL甘油+1mL稀釋血樣9 . 10mL乙醇+1mL稀釋血樣10 . 10mL丙酮+1mL稀釋血樣【思考題】1、你的實(shí)驗(yàn)證明了什么問(wèn)題？2、在你的實(shí)驗(yàn)中，哪些物質(zhì)容易通過(guò)細(xì)胞膜？哪些不易？為什么?實(shí)驗(yàn)七植物愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)技術(shù)【目的】近年來(lái)，組織培養(yǎng)作為一種研究技術(shù)，已廣泛地應(yīng)用于許多學(xué)科中，它不僅對(duì)理論研究有重要意義， 并已展現(xiàn)了十分廣闊的應(yīng)用前景。本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)植物愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)技術(shù)【原理】植物組織培養(yǎng)是把植物的器官，組織以至單個(gè)細(xì)胞，應(yīng)用無(wú)菌操作使其在人工條件下，能夠繼續(xù)生長(zhǎng)，甚至分化發(fā)育成一完整植株的過(guò)程。植物的組織在培養(yǎng)條件下，原來(lái)已經(jīng)分化停止生長(zhǎng)

28、的細(xì)胞，又能重新 分裂，形成沒有組織結(jié)構(gòu)的細(xì)胞團(tuán)，即愈傷組織。這一過(guò)程稱為脫分化作用，已經(jīng) 脫分化的愈傷組織，在一定條件下，又能重新分化形成輸導(dǎo)系統(tǒng)以及根和芽等組織和器官，這一過(guò)程稱再分化作用。植物激素在此過(guò)程中起著重要的作用，吲哚乙酸IAA 和6 -芐基氨基腺嘌呤6 -BA 的比例，決定了根和芽的分化。植物組織經(jīng)過(guò)脫分化作用，形成愈傷組織，經(jīng)過(guò)再分化作用，愈傷組織又能重新分化為有結(jié)構(gòu)的組織 和器官，最終形成完整的植株。早在1957年Skoog即發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基中植物激素的類型和它們的比例，對(duì)再分化過(guò)程起著重要的作用。【材料】煙草、花椰萊、胡蘿卜、番茄等【實(shí)驗(yàn)用品】1、試劑：1乙醇。2IAA 或 2

29、,4 -D。3HgCI 2 或次氯酸鈉。46-芐基氨基腺嘌呤6-BA5MS培養(yǎng)基見下表。MS培養(yǎng)基母液配制表單位：mg類 別稱取董母事體積ml擴(kuò)大侑數(shù)K1升堵卯墓的啜殿mDKNOj1 90019 0001 65016 500元WSO. THjO3703 7 001 00010100KHjPO1701 70&CaCli * 2HtO4404 400MnSOn! - 4H?O也302 230 ZnSOt 7HiO8.6$60比BOm6. 2$20KI4 33831 00010010NifMoO» 214,06 2525CuSOt 5HiO0- 0252. aCuCL * SHjO0 02525鐵Nbj-EDTA37. 253 7251 00010010FeSO八27. &52 785書0100有a 420機(jī)0+525500100100.52510050002、儀器設(shè)備：培養(yǎng)室，高壓滅菌鍋，水浴鍋，解剖