1、細菌噬菌體應該如何檢測噬菌體是一類專性寄生于細菌和放線菌等微生物的病毒，其個體形態極為微小，用常規微生物”數法無法測得其數量。當烈性噬菌體侵染細菌后會迅速引發靈敏細菌裂解，釋放出大量子代噬菌體，然后它們再擴散和侵染周圍細胞，最終使含有靈敏菌的懸液由混濁慢慢變清，或在含有靈敏細菌的平板上顯現肉眼可見的空斑一噬菌斑。了解噬菌體的特性，快速檢查、分離，并進行效價測定，對在生產和科研工作中避免噬菌體的污染具有重要作用。檢樣能夠是發酵液、空氣、污水、土壤等（至于無法采樣而需檢查的對象，能夠用無菌水浸濕的棉花涂拭表面作為檢查樣品）。為了易于分離可先經增殖培育，使樣品中的噬菌體數量增加。采納微生物測定法進行

2、噬菌體檢測，約需12h左右，因此不能及時判定是不是有噬菌體污染。通過快速檢測可大致確信是不是有噬菌體污染，以采取必要的防治方法。根據正常發酵（培育）液離心后菌體沉淀，上清液蛋白含量很少，加熱后仍然清光;而侵染有噬菌體的發酵（培育）液經離心后其上清液中因含有自裂解菌中逸出的活性蛋白，加熱后發生蛋白質變性，因此在光線照射下顯現丁達爾效應而不清克。此法簡單、快速，對發酵液污染噬菌體的判定亦較準確。但不適于溶源性細菌及溫合噬菌體的診斷，對侵染噬菌體較少的一級種子培育液也往往不適用。噬菌體的效價即1mL樣品中所含侵染性噬菌體的粒子數。效價的測定一樣采納雙層瓊脂平板法。由于在含有特異宿主細菌的瓊脂平板上，

3、一樣一個噬菌體產生一個噬菌斑，故可依照必然體積的噬菌體培育液所顯現的噬菌斑數，計算出噬菌體的效價。此法所形成的噬菌斑的形態、大小較一致，且清楚度高，故計數比較準確，因此被普遍應用。檢測材料1 .菌種靈敏指示菌（大腸桿菌）、大腸桿菌噬菌體（從陰溝或糞池污水中分離）2 .培育基兩倍肉膏蛋白陳培育液，上層肉膏蛋白陳半固體瓊脂培育基（含瓊脂樂試管分裝，每管血），基層肉膏蛋白陳固體瓊脂培育基（含瓊脂2%）,1%蛋白陳水培育基。3 .儀器耗材無菌的試管、培育皿、三角瓶、移液管（一、5mL）,恒溫水浴鍋，離心機、721分光光度計等。噬菌體檢測方式1 .噬菌體的檢測樣品搜集將23g土樣或5mL水樣（如陰溝污水

4、）放入滅菌三角瓶中，加入對數生長期的靈敏指示菌（大腸桿菌）菌液35mL,再加20mL二倍肉湯蛋白陳培育液。增殖培育30c振蕩培育1218h,使噬菌體增殖。離心分離將上述培育液以3000rpn）離心1520min,取上清液，用，1%蛋白陳水稀釋至10-210-3,用于噬菌體檢查及效價測定。生物測定法雙層瓊脂平板法倒基層瓊脂，融化基層培育基，倒平板（約10mL/皿）待用。倒上層瓊脂融化上層培育基，待融化的上層培育基冷卻至50c左右時，每管中加入靈敏指示菌(大腸桿菌)菌液，待檢樣品液或上述噬菌體增殖液，混合后當即倒入上層平板攤平。恒溫培育：30c恒溫培育612h觀看結果。觀看結果：如有噬菌體，那么在

5、雙層培育基的上層顯現透亮無菌圓形空斑噬菌斑。單層瓊脂平板法省略基層培育基，將上層培育基的瓊脂量增加至2%,融化后冷卻至45c左右,猶如上法加入指示菌和檢樣，混合后迅速倒平板。30c恒溫培育616h后觀看結果。離心分離加熱法(快速檢查)取大腸桿菌正常培育液和侵染有噬菌體的異樣大腸桿菌培育液，4000rpm離心20min,別離取兩組發酵液的上清液(Al),一部份于721分光光度計上測定0D650光密度值，另外各取5mL上清液于試管中，置水浴中煮沸2min(A2),檢測A2溶液0D650光密度值，記錄結果。2 .噬菌體效價的測定倒平板將融化后冷卻到45c左右的基層肉膏蛋白陳固體培育基傾倒于11個無菌

6、培育皿中，每如約傾注10mL培育基，平放，待冷凝后在培育皿底部注明噬菌體稀釋度。稀釋噬菌體按10倍稀釋法，吸取大腸桿菌噬菌體，注入一支裝有蛋白陳水的試管中，即稀釋到10-1,依次稀釋到10-6稀釋度。3 .噬菌體與菌液混合將11支滅菌空試管別離標記10-4、10-五、10-6和對照。別離從10-4、10-5和10-6噬菌體稀釋液中吸取于上述編號的無菌試管中，每一個稀釋度平行做三個管，在另外兩支對照管中加無菌水，并別離于各管中加入大腸桿菌菌懸液，振蕩試管使菌液與噬菌體液混合均勻，置37水浴中保溫5min,讓噬菌體粒子充分吸附并侵入菌體細胞。4 .接種上層平板將11支融化并保溫于45c的上層肉膏蛋白陳半固體瓊脂5mL別離加入到含有噬菌體和靈敏菌液的混合管中，迅速搓勻，當即倒入相應編號的底層培育基平板表面，邊倒入